旋毛虫抗小鼠体内SP2/0肿瘤作用的研究

目的观察旋毛虫感染对BAlB/c小鼠体内SP2/0瘤细胞生长的抑制作用。方法用不同剂量、不同方法致弱的旋毛虫感染BALB/c小鼠,在不同时间接种SP2/0细胞,于荷瘤后20 d解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量和无瘤生长小鼠比率,检测T淋巴细胞亚群。结果1)未致弱组、紫外线致弱组和60Co致弱组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05);无瘤生长小鼠比率显著高于对照组;2)接种750条、500条和250条旋毛虫组肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05),无瘤生长小鼠比率显著高于对照组;3)接种3 d1、1 d和21 d后荷瘤组的肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.01),CD4+/CD8+显著高于对照组(P<0.05),无瘤生长小鼠比率显著高于对照组。结论未致弱的旋毛虫和经不同方法致弱的旋毛虫对BALB/c小鼠体内的SP2/0骨髓瘤细胞的生长均有抑制作用,接种剂量增加,抑瘤效果越明显,但对实验动物的机体损伤也加重。接种11 d后荷瘤组的抑瘤效果好于接种3 d后荷瘤组和21d后荷瘤组。

不同旋毛虫粗抗原对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤抑制作用观察

目的研究不同旋毛虫抗原对BALB/c小鼠体内的SP2/0骨髓瘤的抑制作用。方法对BALB/c小鼠经腹腔和肌肉注射不同抗原,3d后对小鼠荷瘤,30d后观察小鼠体内肿瘤的大小,检测小鼠机体的免疫状态,评价不同旋毛虫抗原对小鼠体内的肿瘤的抑制作用。结果腹腔注射肌幼虫可溶性粗抗原、成虫可溶性粗抗原和新生幼虫可溶性粗抗原组的抑瘤效果略好于肌肉注射组。肌幼虫ES抗原组的抑瘤效果最好,成虫ES抗原组次之,但比3种虫体抗原组的抑瘤效果好,3种虫体粗抗原组的抑瘤效果间没有明显差别。结论不同的旋毛虫抗原都有一定的抑制肿瘤的作用,腹腔注射肌幼虫ES抗原能够很好的抑制小鼠体内肿瘤的生长。

鞣花酸对骨髓瘤SP2/0细胞的作用

目的探讨五倍子提取物鞣花酸抗骨髓瘤的生物学活性及相关机制。方法 20,40和60μg·mL-1鞣花酸体外孵育骨髓瘤SP2/0细胞株,采用细胞形态学、细胞增殖实验和流式细胞仪检测鞣花酸对SP2/0细胞株增殖、凋亡和细胞周期的影响,通过Western blotting技术检测肿瘤细胞增殖与凋亡相关基因COX-2的表达。结果 20,40,60μg·mL-1鞣花酸孵育骨髓瘤SP2/0细胞株48 h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞百分率分别为(55.21±3.01)%,(64.48±0.43)%,(75.10±2.46)%,与对照组(34.04±1.74)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。20,40和60μg·mL-1鞣花酸细胞抑制率分别为(21.18±5.92)%,(44.58±3.43)%和(70.15±2.90)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞早期凋亡率分别为(9.60±0.56)%,(19.30±1.51)%和(35.10±5.26)%,与对照组(3.23±0.85)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),随药物浓度的增加COX-2的表达逐渐下降。结论鞣花酸能够抑制骨髓瘤SP2/0细胞增殖,促进其凋亡。

小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0—Ag14)及鼠—鼠淋巴细胞杂交瘤细胞系的形态定量比较研究

小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0—Ag14)是不分泌型的浆细胞样细胞。我们用Sp2/0—Ag14细胞与免疫小鼠的脾细胞融合,建立了抗本周氏蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系并采用立体计量方法对亲本及杂种细胞进行了形态定量测量。以便探讨细胞形态结构的变化与分泌抗体的关系。从半薄切片上细胞的结构数据,计算出平均细胞的各种三维空间结构参数。在超薄切片上得到了胞浆内结构成分的三维超微结构参数。结果表明:杂种与亲本细胞相比,杂种细胞的体积明显增大;粗面内质网扩张显著;高尔基体小泡的数量有增多的趋势;线粒体平均体积增大。揭示:杂种细胞的分泌能力较强。

小鼠腹水支持Sp2/0细胞生长作用的研究

不同浓度的腹水及小牛血清RPMI1640培养基对Sp2/0细胞进行培养,结果表明,5％和10％小鼠艾氏腹水的培养基促进Sp2/0细胞增殖作用分别优于10％和15％小牛血清培养基。10％或15％小牛血清培养基中加入1％小鼠艾氏腹水可显示二者具有明显的协同作用。5％小鼠艾氏腹水培养基支持Sp2/0细胞克隆形成率最高,它超过20％小牛血清培养基(小牛血清培养基的最好克隆条件)克隆数的155％。这些结果可能为以Sp2/0细胞作为亲本的杂交瘤细胞提供有意义的生长条件。

小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡

目的研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.方法在Sp2/0细胞培养孔中,分别加入不同稀释度(1∶6,1∶12,1∶24)的小鼠心肌上清液和环磷酰胺,24h后镜下观察细胞形态,并于48h后流式细胞仪检测凋亡细胞的比率;同时,Sp2/0细胞和小鼠心肌细胞共培养,10h后观察Sp2/0细胞形态学变化;并用不同稀释度(1∶5,1∶10,1∶20,1∶40)小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液及环磷酰胺诱导Sp2/0,HeLa,Hep-2和Vero细胞凋亡,并比较其差异.结果不同稀释度的心肌裂解上清液均可诱导Sp2/0细胞的凋亡,尤以高稀释度更明显;小鼠心肌细胞与Sp2/0细胞共培养10h后,少部分Sp2/0细胞出现凋亡;小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液均可引起Sp2/0,HeLa,Hep-2和Vero细胞发生凋亡,但小鼠心肌裂解上清液作用明显,且作用时间持久.结论小鼠心肌组织裂解上清液具有明显诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.

LHRH-PE40对荷瘤BALB/c小鼠抗肿瘤效果的实验研究

目的 观察LHRH-PE40对小鼠腹水瘤及实体瘤的治疗效果,为确定药理、毒理学实验剂量提供依据。方法 分别给BALB/c小鼠腹腔内和背部皮下接种骨髓瘤SP2/0细胞,接种后第4d和第9d,分别腹腔注射LHRH-PE40,并设空白对照组,停药后第5d处死,观察两组小鼠腹水和腹腔内肿瘤生长情况,称量瘤重,计算抑瘤率。结果 腹水瘤实验组所有小鼠腹部未见腹水,腹腔未见肿瘤。实体瘤实验组抑瘤率为54％。结论LHRH-PE40可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长。

SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞的超微结构

SP2/0-Agl4骨髓瘤细胞的超微结构与浆细胞有明显差异,前者细胞质中线粒体较多.线粒体常是长条状,嵴多为纵行排列.有的线粒体切面呈椭圆形,嵴是双层膜同心圆片层排列,说明有的线粒体其嵴为横向螺旋卷绕.本文提出了此种线粒体的一个立体构想模型.细胞质中内质网稀疏,而线粒体外周常有粗面内质网池围绕.有的内质网腔中含有密电子物质,可能系粗面内质网上合成的产物.游离核糖体群很丰富,表明细胞在活跃合成自身生长所需要的蛋白质.在细胞表面顶端有一微绒毛集中区,其它部位则呈皱褶.

小鼠免疫脾细胞与SP2／0细胞融合的杂交瘤细胞的超微结构研究

对ＳＰ２／０骨髓瘤细胞、免疫脾细胞和由二者融合而分泌抗水貂肠炎病毒（ＭｉｎｋＥｎｔｅｒｔｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＭＥＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞超微结构进行了研究．经ＭＥＶ免疫的动物的脾细胞糙面内质网发达，细胞质与细胞核的比例增大．贴壁生长的ＳＰ２／０细胞的表面中央为微绒毛集中区，其余部分则遍布皱褶，细胞质中内质网不发达．由ＳＰ２／０细胞和免疫牌细胞融合形成的杂交瘤细胞，表面均匀分布有皱褶，无微绒毛，细胞在贴壁基部周围伸出裙状伪足，扩大了贴壁面积，使细胞贴壁较牢固．本实验还对ＳＰ２／０细胞和杂交瘤细胞的染色体做了计数，二者的平均数分别为６７和９７，在传代培养中染色体有丢失现象．

小鼠肿瘤疫苗的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)与脂多糖(LPS)活化的B淋巴细胞在聚乙二醇(PEG)介导下融合,经筛选获得8株状态良好的阳性细胞。这些细胞(传代第二次)能耐受HAT液,而对8—氮杂鸟嘌呤(20μgml)敏感,其染色体数在105～112条之内,表明这8株细胞均为SP2/0细胞与B细胞融合而成的杂交细胞。其中三株杂交细胞(IF6、IF11、2A6)能显著增强T淋巴细胞的增殖反应(P<0.01),提示IF6、IF11、2A6细胞对T细胞具有共刺激作用。其表面可能表达了B7等共刺激分子。

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。

甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。方法用甲醛灭活的甲型副伤寒沙门菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出稳定分泌甲型副伤寒沙门菌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对克隆纯化后的阳性细胞扩大培养后,免疫BALB/c小鼠,收获腹水,间接ELISA法检测抗体效价,并进行Ig类和亚类鉴定;腹水经辛酸-硫酸铵盐析法纯化后,采用间接ELISA法、玻片凝集试验、SDSPAGE法、免疫扩散试验进行检测。将纯化后的2株单克隆抗体用于双抗体夹心ELISA法的建立,并用自制配对抗体检测甲型副伤寒患者血浆、乙型副伤寒患者血浆、伤寒患者血浆和正常人血浆。结果共筛选出2株持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4和2A9,腹水抗体效价为1∶10~7和1∶10~6,分别为IgG_1和Ig G_3亚类,轻链均为κ型。纯化后的单克隆抗体1H4、2A9效价分别为1∶10~7和1∶10~3,1H4纯度大于85%,2A9纯度小于60%。2株单克隆抗体与甲型副伤寒沙门菌50503、50973可产生凝集反应,与伤寒沙门菌50096不产生反应;1H4在稀释度为1∶8时可与甲型副伤寒沙门菌菌体特异多糖(organism specific polysaccharide,OSP)产生凝集反应,而2A9在每个稀释度与OSP均不发生反应。将1H4和2A9用于双抗体夹心ELISA检测法建立,确定1H4/HRP-2A9的组合为最佳配对,用该配对抗体检测阳性样本检出率为100%,正常人血浆样本检出率为0。结论获得2株甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,可用于甲型副伤寒沙门菌的快速鉴定。

犬新孢子虫NC-GFP株在4种细胞中培养的比较

为筛选出犬新孢子虫的最佳培养细胞,本试验对利用非洲绿猴肾细胞（Vero）、人胚肾细胞（HEK-293）、人宫颈癌细胞（HeLa）和小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）培养犬新孢子虫NC-GFP株进行了比较研究,连续培养犬新孢子虫15d,观察Vero细胞、HEK-293细胞、HeLa细胞及SP2/0细胞的形态变化并计数犬新孢子虫的数量,绘制虫体在细胞中生长曲线。结果表明,Vero细胞、HEK-293细胞、HeLa细胞及SP2/0细胞均可培养犬新孢子虫,尤其在HEK-293细胞和Vero细胞中虫体生长较快,分别在接种虫体的第5,6天虫体数量达到最大值;而犬新孢子虫在SP2/0细胞和HeLa细胞中生长缓慢,分别在第7,8天数量达到最大值,数量处于较低水平。综合比较,HEK-293细胞可以短期较快的培养犬新孢子虫,可作为一种新的细胞系培养犬新孢子虫。本试验为体外细胞培养犬新孢子虫提供了科学依据。