Strategy for Industrial Development of SPF Chickens in China

SPF chickens and chicken embryos are indispensable raw materials for high-level research in fidds of biology, medicine and veterinary science, and pro- duction and identification of a variety of biological products for people, livestock and poultry. The paper analyzes the current development status of SPF chickens in China and issues in industrial development, and puts forward suggestions for healthy development of SPF chickens in future.

Antibody Dynamic Changes in SPF Chickens and SPF Ducks Immuned with Recombinant Avian Influenza Virus H5 Subtype Bivalent Inactivated Vaccine

To study the immune effect of recombinant avian influenza virus H5 subtype bivalent inactivated vaccine （ HSN1, Re-6 strain ＋ Re-4 strain） and to provide the basis for formulating reasonable immune procedure of avian influenza vaccine in clinical practice. A total of 12 batches of vaccines from three companies were used for the iannune of SPF chickens and SPF ducks. Each chicken or duck serum was separately collected every 3 weeks until the immunization up to the 24^th week. The serum antibody titers of Re-6 and Re-4 were detected. The results showed that the HI titers of the inoculated SPF chickens and SPF ducks roached the peak when the immune time were the 6^th and 3^rd week after the first immunization respectively; then the titer decreased gradually as time prolonged; the highest titer of SPF chickens was greater than that of SPF ducks; the high titer duration of SPF chickens were longer than that of SPF ducks ; and all the vaccines from the three companies showed a good immune effect.

H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究

[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒,采集拭子、血清、气管、肺组织等样品,通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量;并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示,SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示,SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤,降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平,促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象,但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低,建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种,提高对流感的防控水平。

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21 d。感染后14 d采血测定红细胞压积,21 d统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14 d,均能引起红细胞压积显著下降;21 d时,胸腺病毒载量最高,可达10^(6.7) copies/mg。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量(100000EID_(50))出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。

裂纹SPF鸡蛋修补方法的研究

选择正常蛋形的小裂纹蛋90枚,均分为3组,每组3个重复,每个重复10枚,分别是对照组、固体石蜡组和胶带组。结果表明,在受精率方面,固体石蜡组、胶带组、正常组之间无显著差异(P>0.05),但3组的受精率均显著高于对照组(P<0.05);死胚率方面,由高到低分别为对照组>固体石蜡组>胶带组>正常组,其中胶带组与正常组差异不显著(P>0.05),但显著低于固体石蜡组和对照组(P<0.05);孵化率方面,由高到低分别为正常组>胶带组>固体石蜡组>对照组,4组之间均有显著差异(P<0.05);健雏率方面,除对照组之外,固体石蜡组、胶带组、正常组之间差异不显著(P>0.05)。通过多个指标的比较,认为用胶带对裂纹SPF鸡蛋修补是比较好的处理方法,有较好的经济效益。

葡聚糖硫酸钠饲喂SPF鸡诱导肠道炎症的研究

为深入探讨肠道炎症对鸡生长发育、肠道组织结构及微生物菌群等方面的影响,试验利用1%和4%两种浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮水诱导鸡肠道炎症,建立无特定病原(SPF)鸡肠道炎症模型,通过测定体重、器官指数、盲肠微生物菌群结构、组织病理、炎性细胞因子表达水平及炎症标识物钙卫蛋白(CALP)和脂质运载蛋白(NGAL)含量等,综合评价不同浓度DSS诱导的鸡肠道炎症对其生理功能的影响。结果显示:与对照组相比,DSS4组极显著抑制鸡增重(P<0.01),阻止鸡免疫器官脾脏和法氏囊的发育,盲肠微生物菌群多样性和丰度均极显著改变(P<0.01),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)占比达到74.39%,组织病理学检测显示十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织结构均发生显著病变,脾脏炎性细胞因子相对mRNA表达测定显示白细胞介素1β(IL-1β)表达水平极显著升高(P<0.01),而趋化因子生长调节基因1(CxCli1)和趋化因子生长调节基因2(CxCli2)极显著降低(P<0.01),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量未见显著变化(P>0.05),血清和盲肠内容物CALP和NGAL含量均极显著降低(P<0.01)。DSS1组对测定指标的影响相对较小,仅少数指标出现显著改变。试验结果表明,利用口服DSS成功建立了急性肠道炎症模型,并鉴定了肠道炎症对鸡生理功能的影响。

SPF鸡的主要垂直传播性病原体及其检测标准分析

无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)鸡在禽病及疫苗研究中应用广泛。垂直传播性疾病以垂直传播的方式传递给雏鸡,降低雏鸡成活率、增加生产成本、给整个养殖行业带来巨大经济损失的同时,严重影响SPF鸡的培育与使用。因此,需要加强研究及管理人员对鸡垂直传播性疫病病原的认识,并制定出行之有效的监测措施。质量监测是保证SPF鸡质量的重要环节,其中病原检测是首要环节。在此基础上,应结合净化方式以及生物安全防控手段来培育合格的SPF鸡群。本文综述了包括病毒性病原、细菌性病原和支原体在内的鸡主要垂直传播性病原和这些病原的检测方法,比较美国企业标准和中国国家标准中有关SPF鸡微生物检测项目及方法的差异。结果分析显示,在两种标准中,垂直传播性病原大肠埃希菌、奇异变形杆菌以及沙门菌、禽白血病等垂直传播性疾病均未被列入SPF鸡微生物检测项目。而这些病原存在混合感染特征,一旦爆发,将严重影响鸡群健康。为生产更高质量的SPF鸡群,有必要将其列入必检项目。本文旨在帮助人们了解SPF鸡微生物监测的相关标准以及垂直传播性病原的危害和防控策略,为SPF鸡病原检测及净化提供参考。

IBDV超强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白动态表达的研究

为证实传染性法氏囊炎超强毒SNJ93株感染SPF鸡后1～14 d内法氏囊淋巴细胞中Bcl-2、Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系。应用透射电镜观察、TUNEL法标记检测凋亡的淋巴细胞,用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白。结果表明,感染后1～7 d可见到大量凋亡的淋巴细胞,其中感染后3～5 d最多。感染后1～9d Bcl-2蛋白显著高于同时点的对照组(P<0.01);感染后1～5 d Bax蛋白明显高于同时点的对照组,差异极显著(P<0.01);感染后第7天高于同时点的对照组,差异显著(P<0.05); Bcl-2/Bax比率在感染后第1天低于同时点的对照组(P<0.05);3～5 d明显低于同时点的对照组(P<0.01)。SNJ93感染SPF雏鸡后1～7 d内法氏囊淋巴细胞会发生大量凋亡,Bcl-2/Bax能准确反映淋巴细胞的凋亡程度。

SPF鸡与普通鸡消化道主要正常菌群数量的比较

采用微生态学方法,对SPF鸡和普通鸡嗉囔、腺胃、回肠、盲肠和直肠5个部位的梭杆菌、真杆菌、消化球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等9种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果表明,SPF鸡嗉囔中真杆菌、梭杆菌、双歧杆菌、类杆菌、葡萄球菌和肠杆菌数高于普通鸡,其中真杆菌、梭杆菌、葡萄球菌和肠杆菌数差异极显著(P<0.01);腺胃中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌和肠杆菌数高于普通鸡,其中真杆菌数差异显著(P<0.05);回肠中真杆菌、双歧杆菌、类杆菌、葡萄球菌和肠杆菌数高于普通鸡,其中类杆菌数差异极显著(P<0.01);盲肠中梭杆菌、消化球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌数低于普通鸡,其中乳酸杆菌数差异显著(P<0.05);直肠中各菌数量都低于普通鸡,其中双歧杆菌和乳酸杆菌差异显著(P<0.05)。

三型副鸡禽杆菌对SPF鸡的致病力试验

为探讨3株A型C-Hpg 8(CVCC254)、B型(BJ-05株)和C型(668)副鸡禽杆菌对SPF鸡的致病力,用120只57日龄SPF鸡进行了此3个菌株的致病力试验,分别眶下窦内接种1.5×104cfu/0.2 mL.只-1～400×104cfu/(0.2 mL/只-1)C-Hpg 8、BJ-05株和668株,每个剂量攻击5只鸡,攻毒后观察7 d,结果除1只鸡未发病外,119只鸡均呈现典型的鸡传染性鼻炎症状。结果表明,C-Hpg 8、BJ-05株和668株副鸡禽杆菌对SPF鸡均有很强的致病力。

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒(MDV)感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。

鸡传染性喉气管炎、传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系BWEL-SPF鸡或鸡胚的感染试验

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬＳＰＦ鸡，观察比较临床症状和剖检所见病变；用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚，收获胚液并测定其毒价。从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。

鸭呼肠孤病毒人工感染SPF鸡胚的病理学研究

【目的】前人研究表明禽呼肠孤病毒可以经卵垂直传播,禽呼肠孤病毒能引起雏禽的病毒性关节炎、呼吸道和肠道疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制等。以实验室分离的鸭呼肠孤病毒HP080421株为研究对象,该毒株引起病变主要以鸭软脚为主要临床特征,病鸭肝脏和脾脏表面有大量的白色坏死灶、肾脏肿大、出血为主要病变特点。鸭呼肠孤病毒对鸡胚的致病性研究,旨在通过雏鸡的病理变化特点,探讨所分离的HP080421鸭呼肠孤病毒株是否也可感染鸡群,为鸡场鸭呼肠孤病毒感染的防控提供理论依据。【方法】运用华中农业大学兽医病理学实验室分离鉴定的HP080421株鸭呼肠孤病毒通过尿囊腔接种SPF鸡胚,建立SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,培养鸡胚至雏鸡出壳,运用临床观察、病理剖检、H.E染色和免疫组织化学染色等病理组织学检查方法,对鸭呼肠孤病毒感染SPF鸡胚进行病理学研究和致病性分析。【结果】研究发现病毒感染鸡胚孵化培养至22—23日龄均啄壳,但不能自主出壳,需人工剥壳。病理剖检可见雏鸡的肝脏、脾脏肿胀质脆,表面及实质分布有黄白色坏死灶;脑部组织肿胀,并可见出血点和出血斑。H.E染色的组织病理学观察可见接毒组雏鸡肝脏、脾脏的坏死灶周围有大量淋巴细胞浸润;法氏囊的滤泡髓质部和胸腺的髓质部淋巴细胞减少、缺失;脑、肺脏、肾脏存在不同程度的淤血、出血和水肿;免疫组织化学染色结果表明:病毒阳性信号主要分布于肝脏、脾脏、肺脏和法氏囊等器官,并且位于上皮细胞和巨噬细胞的细胞质和胞核内。【结论】鸭呼肠孤病毒株HP080421能够在SPF鸡胚中复制增殖,并使雏鸡主要器官发生明显的病理变化,病理变化主要集中在肝脏和淋巴器官,因此鸭呼肠孤病毒可通过垂直传播感染鸡群,还可导致雏鸡免疫抑制。本研究通过SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,阐述了鸭呼肠孤病毒感染鸡群的可能性,因此在实际养殖过程中,养殖户要防止鸭呼肠孤病毒对鸡胚的污染,切断传播途径,以达到预防鸡群感染鸭呼肠孤病毒的目的。

鹅源H5N1亚型禽流感病毒对SPF雏鸡血液免疫功能的影响

以21日龄SPF雏鸡为实验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过外周血液免疫球蛋白(Igs)含量、T和B淋巴细胞数量及其增殖功能的检测,较全面系统的研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述被检指标的动态变化。结果表明,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其血清IgG和IgA含量在1～4 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),并分别于8～21 d和5～8 d显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);而IgM在病毒感染后4 d开始升高,5～8 d明显高于对照雏鸡。血液T淋巴细胞数量于病毒感染后1～14 d显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞在3～14 d明显降低(P<0.05或P<0.01);T、B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖反应分别于3～14 d、3～8 d明显低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明AIV感染21日龄SPF雏鸡后的早期,其外周血液无论是细胞免疫还是体液免疫功能均降低。

禽网状内皮组织增生病病毒和呼肠孤病毒感染SPF鸡对IFN-γ产生的影响

1日龄SPF鸡分别接种禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽呼肠孤病毒(ARV)和REV+ARV,于感染后3、5、46 d采集脾细胞做脾淋巴细胞培养并采用双抗体夹心ELISA法检测IFN-γ水平。结果表明,与对照相比,鸡感染REV后脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平显著升高。感染后5 d,REV单独感染引起IFN-γ8倍的增长,达到峰值,然后逐渐下降。ARV单独感染引起IFN-γ2倍的增长。REV和ARV共感染鸡脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量增长了3倍。至感染后46 d,共感染和REV单独感染的IFN-γ水平与对照组相比仍然差异显著,ARV单独感染与对照组相比差异不再显著。

鸡副嗜血杆菌(HPG-A221、C668)对10个家系BWEL-SPF鸡胚的感染试验

用鸡副嗜血杆菌国际标准株（HPGA-221、C668）分别接种1-10个家系的BWEL-SPF鸡6日龄鸡胚，观察攻毒后16-30小时鸡胚死亡的情况。结果，第5、7、8家系死亡率为100％;1、4、6家系死亡率为90％;2、3、9、10家系死亡率为80％-85％，10个家系HPG平均死亡率为90.5％。对照组（HWL-SPF鸡胚）平均死亡率为90％。从而评估BWEL-SPF鸡群每个家系对鸡副嗜血杆菌（HPG-A221、C668）的敏感性。

2007年～2010年H9N2亚型禽流感病毒分离株对SPF鸡的致病特性研究

本研究对2007年～2010年我国H9N2亚型禽流感病毒分离株的鸡胚平均死亡时间(MDT)进行分析,发现自2008年下半年来分离的H9N2亚型禽流感病毒对鸡胚的致病性有增强的趋势,在此基础上,选择MDT在60.5～96.3h之间的9株病毒,比较其对SPF鸡的致病力。结果表明,对鸡胚致病性强的毒株,对SPF鸡的致病性也较强,能引起气管、肺、十二指肠、肾和脑等多器官的系统性感染,而且病毒在各组织器官的复制能力与致病性呈正相关。在感染SPF鸡后,所有毒株均呈现不同程度的排毒,而致病力较强毒株的感染组,排毒的比例更高,排毒时间也更长。这些数据表明,H9N2病毒在进化过程中,致病力发生了一定的变化,新近出现了一些对鸡致病力增强的毒株,这提示我们必须重视对H9N2病毒进化和变异的监测,加强对H9N2病毒的防控。

我国马流感病毒不同分离株实验感染SPF鸡的研究

本试验分别用马流感病毒吉林株、青海株和北京株人工感染ＳＰＦ鸡，通过ＨＩ价测定、临床观察，病毒分离以及病理观察，证明马流感病毒可在ＳＰＦ鸡体内激发短期的免疫应答，在各实质器官引起轻微的损害，但无明显临床症状，病毒分离阴性。

应用微卫星DNA标记对BWEL-SPF鸡种群的群体遗传学分析

本研究利用14个鸡微卫星DNA标记位点,采用DNA测序仪和荧光素标记分子内标,建立了鸡分子遗传学的检测方法,对F15世代BWEL-SPF鸡种群8个家系群体内和群体间的遗传结构进行了分析。结果表明,被检位点35.7%(5/14)的基因型趋于纯合,家系内等位基因的变异程度显著降低。F-统计量检验结果表明,家系间的遗传分化均达到了极显著水平(P<0.001),群体间的变异占到了总遗传变异的12.9%。

3株H3N8亚型禽流感病毒对SPF鸡和Balb/c小鼠致病性研究

为了解从洞庭湖区鸭子和环境中分离的3株H3N8亚型禽流感病毒的致病性。利用这3株毒株对SPF鸡及Balb／c小鼠进行致病性试验，结果显示，3株毒株均能使鸡感染并排毒，但不引起鸡明显的临床症状及死亡，感染鸡后第3天～第7天在泄殖腔排出高滴度病毒，且持续至第11天（仅观察到该天），与以往的研究相比，排毒时间更长。3株H3N8亚型毒株感染小鼠后，能在小鼠鼻甲及肺脏内高滴度复制，但小鼠的体重变化不明显。结果说明3株H3亚型AIV对家禽及哺乳动物感染能力增强，因此加强该亚型的流行病学监测及致病性的研究非常重要。