鸭呼肠孤病毒人工感染SPF鸡胚的病理学研究

【目的】前人研究表明禽呼肠孤病毒可以经卵垂直传播,禽呼肠孤病毒能引起雏禽的病毒性关节炎、呼吸道和肠道疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制等。以实验室分离的鸭呼肠孤病毒HP080421株为研究对象,该毒株引起病变主要以鸭软脚为主要临床特征,病鸭肝脏和脾脏表面有大量的白色坏死灶、肾脏肿大、出血为主要病变特点。鸭呼肠孤病毒对鸡胚的致病性研究,旨在通过雏鸡的病理变化特点,探讨所分离的HP080421鸭呼肠孤病毒株是否也可感染鸡群,为鸡场鸭呼肠孤病毒感染的防控提供理论依据。【方法】运用华中农业大学兽医病理学实验室分离鉴定的HP080421株鸭呼肠孤病毒通过尿囊腔接种SPF鸡胚,建立SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,培养鸡胚至雏鸡出壳,运用临床观察、病理剖检、H.E染色和免疫组织化学染色等病理组织学检查方法,对鸭呼肠孤病毒感染SPF鸡胚进行病理学研究和致病性分析。【结果】研究发现病毒感染鸡胚孵化培养至22—23日龄均啄壳,但不能自主出壳,需人工剥壳。病理剖检可见雏鸡的肝脏、脾脏肿胀质脆,表面及实质分布有黄白色坏死灶;脑部组织肿胀,并可见出血点和出血斑。H.E染色的组织病理学观察可见接毒组雏鸡肝脏、脾脏的坏死灶周围有大量淋巴细胞浸润;法氏囊的滤泡髓质部和胸腺的髓质部淋巴细胞减少、缺失;脑、肺脏、肾脏存在不同程度的淤血、出血和水肿;免疫组织化学染色结果表明:病毒阳性信号主要分布于肝脏、脾脏、肺脏和法氏囊等器官,并且位于上皮细胞和巨噬细胞的细胞质和胞核内。【结论】鸭呼肠孤病毒株HP080421能够在SPF鸡胚中复制增殖,并使雏鸡主要器官发生明显的病理变化,病理变化主要集中在肝脏和淋巴器官,因此鸭呼肠孤病毒可通过垂直传播感染鸡群,还可导致雏鸡免疫抑制。本研究通过SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,阐述了鸭呼肠孤病毒感染鸡群的可能性,因此在实际养殖过程中,养殖户要防止鸭呼肠孤病毒对鸡胚的污染,切断传播途径,以达到预防鸡群感染鸭呼肠孤病毒的目的。

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将MG不同菌株的培养物，经卵黄囊接种SPF鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后3～13d内达82％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染MG所致。测定了MGIc1菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有很密切关系。在SPF源鸡体上致病力低下的二株MG菌株的鸡胚致死率为60％～90％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊液中分离到MG，并测定了这些部位MG的含量。根据实验结果，认为SPF鸡胚人工感染MG，具有比SPF源鸡体更敏感、所需试验条件简单、恒定、因果关系明确的优点，可以作为测试MG菌株某些性质的一种模型。

禽腺病毒血清4型Y17215-1株对SPF鸡胚及SPF鸡的致病性研究

为了探究一株禽腺病毒血清4型(FAdV-4)天津分离株Y17215-1对SPF鸡胚及SPF鸡的致病力,试验将Y17215-1株(病毒效价为1×10^(6.5) TCID_(50)/0.1 mL)经卵黄囊和尿囊膜两种接种途径分别接种6,10日龄SPF鸡胚,经滴鼻点眼和肌肉注射两种途径分别接种7,14,21日龄的SPF鸡,观察SPF鸡胚死亡情况和病理变化情况,统计SPF鸡发病死亡情况,检测试验鸡不同组织及不同采集时间的泄殖腔中的病原,观察试验鸡的临床病变和组织病理学变化。结果表明:两种接种途径均可致鸡胚死亡,经卵黄囊途径接种致死的鸡胚可见胚体全身出血,经尿囊膜途径接种致死的鸡胚尿囊膜明显增厚;两种接种途径均可引起不同日龄SPF鸡发病和死亡,且肌肉注射组试验鸡较滴鼻点眼组试验鸡发病快、病程短,致死率高,发病鸡临床表现为精神沉郁、采食量明显下降、排黄绿色粪便。心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃等器官病原检测结果均为阳性,各试验组的泄殖腔拭子样品在感染后第2天即可检测到FAdV-4。剖检可见典型的心包积水、肝脏肿大、肾脏肿大等病变,肝细胞内有嗜酸性包涵体。说明FAdV-4天津分离株Y17215-1对鸡胚及鸡具有较高致病性。

绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究

为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体(10^8、10^9、10^10 ccu/mL)经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率(PCR检测和支原体分离鉴定),确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为10^9 ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异:FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株(40%),二者均高于A3株(25%),但差异均不显著(P>0.05);FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株(85%)及A3株(90%),但差异也不显著(P>0.05)。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。

我国主要流行的4种血清型禽腺病毒-Ⅰ群感染SPF鸡的致病性比较研究

旨在对我国流行的4种血清型(4、8a、8b和11型)禽腺病毒-Ⅰ群(fowl adenovirus,FAdVs)对鸡胚和鸡的致病性进行研究,选取12日龄SPF鸡胚和10日龄SPF鸡感染4种血清型FAdVs,对SPF鸡胚和鸡的死亡率及鸡胚胚体质量进行统计;对感染鸡的大体剖检变化、组织学变化进行观察和病毒载量进行研究。结果显示,FAdV-8b和FAdV-11感染SPF鸡胚后其死亡率高于45%,FAdV-8a感染后胚体质量降低最严重,FAdV-4感染后对胚体质量影响最小;FAdV-4感染SPF鸡死亡率高达53.3%,其他组鸡无死亡;除肝出现肿胀、变性、出血和炎性细胞浸润外,4种病毒感染SPF鸡后分别造成不同组织器官的严重损伤,FAdV-4感染出现心包积液、FAdV-8a感染肌胃出现糜烂、FAdV-8b感染导致腺胃肿胀和FAdV-11感染导致胰腺坏死,各损伤组织均出现实质细胞坏死和炎性细胞浸润;4种病毒感染SPF鸡均出现免疫器官的组织学损伤,其中,FAdV-8a、-8b和-11感染鸡引起的免疫器官内淋巴细胞缺失和损伤较FAdV-4更为严重;组织病毒载量结果显示,FAdV-4感染鸡心和肾病毒载量最高,FAdV-8b和FAdV-11感染鸡胰腺病毒载量高于FAdV-4感染组,且FAdV-4感染鸡心、肝和肾病毒载量在感染后第5天高于第3、7天,除FAdV-8a感染组外,病毒载量与各组织损伤情况相一致。综上表明,4种血清型FAdVs中,FAdV-11对SPF鸡胚的致死性最强,FAdVs对SPF鸡的致死率最高,尽管FAdV-8a、-8b和-11不致死SPF鸡,但对SPF鸡胚、SPF鸡的消化系统和免疫系统损伤较为严重,这将会造成鸡胚孵化率降低、鸡生长发育缓慢和易于继发其他病原感染。

鸡传染性支气管炎病毒的RNA干扰

为探讨短的双链RNA(siRNA)对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)增殖的干扰作用,利用软件设计siRNA1280个,75%位于Pol基因内。通过同源比较和保守性分析,筛选到针对Pol、M、N基因的12个siRNA(每个基因3～4个)作为后选目的片段,分别在Vero细胞、9日龄SPF鸡胚上进行基因干扰试验。结果,来自Pol、N靶序列的2个siRNA在Vero细胞上及鸡胚上均对IBV增殖产生明显的干扰作用,并与siRNA剂量有一定相关性,依赖于与mRNA互补的负链siRNA存在。本研究首次证实IBV增殖过程中存在siRNA干扰现象,为利用RNA干扰(RNAi)技术控制IBV提供了新手段。

中药紫草注射液对鸡胚接种后抗新城疫病毒的研究

为研究紫草对新城疫病毒的抑制作用。用鸡胚培养法和血凝试验,测定了4组试验中药紫草对鸡新城疫病毒的作用效果。结果显示:第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药紫草混合液,HA滴度0;第Ⅱ组接种病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度4 log2;第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度8 log2;第Ⅳ组不接种病毒尿囊液、不给药、HA滴度0。第Ⅰ组与第Ⅲ组差异极显著(P<0.01),第Ⅱ组与第Ⅲ组差异显著(P<0.05)。试验表明,紫草对鸡胚无毒性作用;紫草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。

莪术油注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

新城疫也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒（New castle disease virus,NDV）引起的急性高度传染性疾病。由于疫苗的广泛使用,使该病多以慢性或散发为特点。同时,由于饲养管理不完善、免疫程序不当,以及毒株的变异,使得疫苗预防效果减弱,临床上常表现为非典型新城疫,而对于水禽（鹅、鸭等）则表现为强毒感染,并出现高致死率[1-2]。

鸡胚接种虎杖醇提取液后对新城疫病毒的抑制作用

为研究虎仗对新城疫病毒的抑制作用,用鸡胚培养法和血凝试验测定中药虎仗醇提液对鸡新城疫病毒的作用效果。结果显示,Ⅰ组接种病毒尿囊液与虎杖醇提液,HA滴度0。Ⅱ组接种病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5lg2。Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9lg2。Ⅳ组不接种病毒尿囊液、不给药、HA滴度0。Ⅰ组与Ⅲ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ组与Ⅲ组差异显著(P<0.05)。可见,虎仗醇提液对鸡胚无毒性作用;虎仗醇提液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。

垂花香薷挥发油鸡胚接种抗鸡新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了中药垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验结果表明:垂花香薷挥发油对鸡胚无毒性作用;垂花香薷挥发油与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。

莪术油注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

[目的]探讨莪术油对新城疫病毒的抑制和杀灭作用。[方法]用鸡胚培养法和血凝试验,测定莪术油对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用。[结果]莪术油对鸡胚无毒性作用;莪术油与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。[结论]结果为莪术油在兽医临床上的应用提供了理论依据。

使用泰万菌素治疗鸡胚中鸡滑液支原体的效果试验

为了解泰万菌素对鸡胚中鸡滑液支原体(MS)的治疗效果,本试验将鸡滑液支原体分别以106.0变色单位(CCU)和105.0 CCU感染15日龄SPF鸡胚,并对感染后鸡胚注射泰万菌素和泰妙菌素,统计入孵蛋健雏率和孵化雏鸡肺脏感染情况。结果显示,无论MS以高剂量或低剂量感染SPF鸡胚,用药组入孵蛋健雏率均高于MS对照组,且MS+泰万菌素组效果优于MS+泰妙菌素组。对雏鸡肺脏支原体含量进行检测,MS对照组为24.8±0.84 CCU/0.1 mL,用药组为21.6~22.0 CCU/0.1 mL,二者差异显著。表明使用泰万菌素对被感染的种蛋进行治疗,可增加健雏率,减少雏鸡肺脏支原体含量,对种鸡场的净化有重要意义。

中药笃温康体内外的抗病毒作用效果研究

本试验旨在研究笃温康的体内外抗病毒效果。以H9亚型禽流感病毒为供试病毒,将不同含量病毒与笃温康混合并接种于SPF鸡胚,72 h后无菌收取每个鸡胚尿囊液,用0.75%鸡红细胞测定尿囊液血凝价;以H9亚型禽流感病毒和传染性支气管炎病毒混合液为供试病毒,人工感染SPF鸡,感染后不同时间用笃温康进行治疗,观察其病理变化。试验结果表明,笃温康体外能够抑制病毒10倍稀释液对0.75%鸡红细胞的凝集,对H9禽流感病毒在鸡胚内复制具有抑制作用。提示笃温康对感染IBV病毒、H9禽流感病毒的SPF鸡具有较好的保护作用,而且随着笃温康用量的增加,其保护作用增强。

温度对鸡传染性支气管炎病毒增殖的影响

为了在生产鸡传染性支气管炎活疫苗时,获得高效价的制苗用病毒液,该文从无特定病原体(SPF)鸡胚接种后的孵育温度方面进行探索,研究温度对鸡传染性支气管炎病毒增殖的影响。结果显示,在用SPF鸡胚增殖鸡传染性支气管炎病毒H120株、H52株时,以鸡胚液病毒含量指标衡量,接种后的鸡胚在35~37℃孵育为宜,在35.5~36.5℃孵育为佳,超过37℃或低于35℃孵育,不论接毒量大小或孵育时间长短,其鸡胚液的病毒含量均不达标,且37℃以上对鸡传染性支气管炎病毒的增殖更不利。鸡传染性支气管炎病毒对温度比较敏感,鸡胚增殖时,应尽量控制接种鸡胚在35.5~36.5℃孵育,不要超过37℃,为鸡传染性支气管炎鸡胚病毒液的高效生产提供了方法与指导。

新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响

目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率。根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度。结果SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5×10~6个/mL,活细胞数不低于2.1×10~6个/mL,细胞存活率不低于60%;2BS细胞总细胞数不低于7.0×10~5个/mL,活细胞数不低于4.2×10~5个/mL,细胞存活率不低于60%。腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为6.28 lgCCID_(50)/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为5.8 lgCCID_(50)/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致。结论新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小。