用酵母双杂交系统研究载脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受体BI(SR-BI)间的相互作用

目的:利用酵母双杂交系统验证在胆固醇逆转运过程中起关键作用的大鼠载脂蛋白AI(apoAI)和清道夫受体BI- (SR -BI)间存在着相互作用,为初步筛选具有降脂活性组分提供1对新的靶点。方法:首先分别克隆了Wistar大鼠的apoAI和SR -BI基因的cDNA ,并构建了酵母表达载体,利用共转化技术观察到apoAI和SR -BI间存在着相互作用,并在酵母交配实验中证实了这个结果。结果:经共转化后的实验组与阳性对照组可在SD/ -Leu/- Trp/- His/- Ade/X -α- Gal平板上生长且菌斑呈蓝色,经测定α、β半乳糖苷酶活力可知酶活分别为8～1 2U和1 0～40U。酵母交配后的二倍体实验组、阳性对照组可在SD/- Leu/- Trp/ -His/- Ade/X -α- Gal平板上生长且菌斑呈蓝色。结论:apoAI和SR BI间的确存在相互作用。

人SR-AI转基因小鼠遗传与繁育的研究

目的 探讨被转入的人SR AI基因的整合与复制情况及其对小鼠繁育的影响。方法 采用类似系祖建系的方法 ,对人SR AI转基因小鼠的 2、35 34、35 6 0、36 38、36 39五个系列进行了繁育。并用PCR和Southernblot的方法 ,检测五个系列小鼠尾组织的DNA样品。结果 五个系列小鼠共产仔 431只 ,PCR检出阳性小鼠 178只 ,阳性率为 41.2 %。在 36 39系的F1、F2、F3代及纯合子转基因鼠中PCR阳性率分别为 47.8%、71.3%、75 %和 10 0 %。结论 人SR AI基因在子代鼠中能稳定遗传 ,且对生殖和发育无明显影响。

应激性肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β_1与SR-AImRNA表达的影响

目的探讨心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与SR-AImRNA表达的影响。方法不同浓度肾上腺素(1pmol/L^1μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞24h,运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1与SR-AImRNA表达。结果1~10nmol/L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较差异无显著性意义(P>0·05)。而100nmol/L及1μmol/L的肾上腺素下调TGF-β1mRNA水平和上调SR-AImRNA水平,与各自对照组比较差异均有显著性意义(P<0·05)。结论一定浓度的肾上腺素可下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1mRNA水平,上调其SR-AImRNA水平。

用酵母双杂交系统筛选影响apo-AI和SR-BI相互作用的苦豆子活性成分

本文通过将苦豆子总提取物及其分离得到的10个组分加入含有AH109菌株(携带大鼠apo-AI及其受体SR-BI全基因)的培养基中,利用报告基因半乳糖苷酶活力有无变化来寻找能够促进大鼠载脂蛋白apo-AI及其受体SR-BI相互作用的激动剂。经测试,我们观察到苦豆子总提取物(K-1),在上述系统中能显著增强这两种蛋白的相互作用。继续用硅胶柱层析方法从k-1中分出10个组分后,利用酵母双杂交系统再次筛选,发现有五个组分能增强两种蛋白的相互作用,(与空白对照组相比其中有两个组分有极显著差异)另外三个组分显著地抑制上述两种蛋白的相互作用,剩下的两个组分则没有差异。该实验还提示该酵母双杂交系统可能成为一种跟踪具有调脂功能的先导化合物的有效方法。

肾上腺素对THP-1源巨噬细胞SR-AI与ABCA1表达的影响

目的 探讨肾上腺素对THP-1源巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）与清道夫受体AI（SR-AI）mRNA表达的影响。方法 不同浓度肾上腺素（1pmol／L～1μmol／L）处理THP-1源巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其ABCAl与SR-AI mRNA表迭。结果 1pmol／L～10nmol／L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较其差异无统计学意义（P〉0．05）。而100nmol／L及1μmol／L的肾上腺素上调SR-AI mRNA水平和下调ABCA1 mRNA水平，与各自对照组比较其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 肾上腺素上调THP-1源性巨噬细胞SR-AI mRNA水平，下调其ABCA1 mRNA水平。

oxLDL对U937细胞SR-AⅠ及ABCA1 mRNA表达的影响

目的以人单核细胞株U937为研究对象,观察在氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下U937细胞清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA的表达情况。方法以不同质量浓度的oxLDL(0、25、50、75、100、125 mg/L)与U937细胞共同培养48 h,然后进行油红O染色以了解其胞内脂质含量,同时用实时荧光定量PCR方法检测其ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达量。结果单核细胞ABCA1和SR-AⅠmRNA在无oxLDL干预下其表达最低;oxLDL可诱导ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达,与无oxLDL干预组比较差异有统计学意义(P均<0.01);ABCA1 mRNA在50 mg/L oxLDL干预下表达最强,其后随着oxLDL培养浓度的增加其表达反而下降;SR-AⅠmRNA表达为逐渐增高,50 mg/L oxLDL干预时表达最强。结论 U937细胞随着oxLDL干预浓度的提高其ABCAl mRNA和SR-AⅠmRNA表达呈先增高后降低的趋势,在50 mg/L oxLDL时表达最高;二者在泡沫细胞形成过程中起着非常重要的作用。

亚共晶Al-Si合金的Sr变质处理工艺

对亚共晶Al-Si合金进行Sr变质处理,试验结果表明:变质处理能使合金的组织细化,力学性能得到提高。

热处理工艺对Sr变质Al-11.6Si-0.5Mg合金组织与性能的影响

在铸造Al-11.6Si-0.5Mg合金中,加入Sr作为变质剂,并研究了T6热处理工艺对其组织与性能的影响。结果表明:0.3%Al-8Sr中间合金能有效细化α-Al枝晶与共晶组织;T6热处理的最佳经济型工艺为535℃固溶6 h,50～60℃水冷;160℃时效6 h,空冷。Sr变质与T6热处理后,合金的力学性能显著提高,抗拉强度由变质前的183 MPa提高至348 MPa,伸长率由3.0%提升至6.5%左右。

大鼠SR-BI胞外域与ApoA-I蛋白相互作用的确认

先以含全长SR-BIcDNA序列的重组质粒pMD18-T-rS为摸板进行PCR反应扩增SR-BI得到胞外域cDNA片段,经测序证明正确后,定向克隆到酵母双杂交表达载体,然后与pGBKT7-ApoA-I质粒共转化酵母细胞,通过报告基因及酵母交配试验确认了SR-BI的胞外域部分和ApoA-I之间的确存,观察到ApoA-I与SR-BI胞外域间的相互作用力比与全长的SR-BI间的相互作用力提高了10%。

Eu,Dy共掺杂SrAl_2O_4长余辉材料制备新工艺

活化A l-Sr合金粉末水解制备SrA l2O4长余辉材料的前驱体,并采用高温固相反应法制备出Eu,Dy共掺杂的SrA l2O4长余辉材料,对其微观结构和发光特性进行了研究。实验结果表明:前驱体中A l、Sr元素在微观状态下分布均匀,所制成的长余辉发光材料的发射主峰位于520 nm附近,为典型的Eu2+离子4 f5d-4 f的特征发射,初始亮度达到18 cd/m2,余辉时间长达46 h。

Sr含量对4004铝合金铸锭变质效果的研究

研究了Sr加入量分别为0.01%、0.015%、0.02%,变质保温时间分别为60min、80min、100min,对4004铝合金变质效果的影响。结果表明:Sr加入量低于0.015%、变质保温时间小于80min时,合金组织和力学性能均没有达到完全变质状态;Sr加入量0.015%、变质保温时间80min时,4004铝合金变质效果最好,合金组织中的初晶硅转变为细小的圆状或短棒状,共晶硅也由片状或针状转变为纤维状,合金的抗拉强度和伸长率达到最大值193MPa和4.2%;Sr加入量超过0.015%、变质保温时间超过80min时,随着加入量的增加,合金组织开始变得粗大,抗拉强度随着下降。

基于酵母双杂交技术筛选肉苁蓉降血脂活性成分

目的利用酵母双杂交系统对肉苁蓉中的单体成分进行降血脂活性的筛选。方法将肉苁蓉中的5种化学成分加入到含有AH109菌株(携带大鼠apo-AI及其受体SR-BI全基因)的培养基中,通过报告基因β-半乳糖苷酶的活力,比较它们对大鼠apo-AI和SR-BI蛋白间相互作用的影响。结果尿囊素可提高β-半乳糖苷酶的活力,8-表马钱子苷酸、松果菊苷、管花肉苁蓉苷B可降低β-半乳糖苷酶的活力,8-羟基-香叶醇-1-β-D-葡萄糖苷对β-半乳糖苷酶的活力无明显影响。结论尿囊素可明显增强apo-AI和SR-BI蛋白的相互作用,具有一定的降血脂活性。