猪SR-BⅠ基因的克隆及其组织差异表达规律研究

【目的】扩增猪各组织清道夫受体B族Ⅰ型(SR-BⅠ)基因片段,并对其进行生物信息学分析,研究SR-BⅠ在猪中的表达规律。【方法】采取不同月龄和不同猪种猪的内脏脂肪、皮下脂肪、肝脏、脾脏、肌肉、肾脏、肺脏、心脏等组织,提取其RNA,根据GenBank已发表的人、小鼠及大鼠SR-BⅠ基因序列,设计并合成1对引物,用RT-PCR法扩增猪SR-BⅠ基因cDNA片段,检测该基因在猪各组织中的分布及其在不同月龄、不同部位、不同猪种脂肪组织中的转录表达规律。【结果】成功克隆了猪SR-BⅠcDNA片段,长度为192 bp(EU366320);该基因与牛、人、中国仓鼠、大鼠、小鼠在氨基酸序列上分别有84.1%,78.6%,77.5%,67.0%和66.6%的同源性;SR-BⅠ基因mRNA在瘦肉型猪种上的表达量显著高于脂肪型猪种,随月龄的增加其表达量逐渐上升,且其在皮下脂肪的表达量较内脏脂肪高。【结论】SR-BⅠmRNA的表达与猪肥胖程度、年龄以及脂肪沉积部位密切相关。

有氧运动改善高脂血症分子机理的研究V:有氧运动上调饮食性高脂血症大鼠肝脏SR-BⅠ基因表达

目的 :以RT -PCR技术测定和分析有氧运动干预对饮食性高胆固醇血症大鼠肝脏高密度脂蛋白受体 (SR -BⅠ )基因表达的影响 ,进一步探讨有氧运动对胆固醇逆向转运 (RCT)通路影响的分子机理。方法 :雄性SD大鼠 40只 ,随机分为 :(1 ) 8周普通膳食对照组 (NS ,n =1 0 ) ,(2 ) 8周高脂膳食对照组 (HS ,n =1 0 ) ,(3 ) 8周普通膳食 +运动组(NE ,n=1 0 )和 (4 ) 8周高脂膳食 +运动组(HE ,n =1 0 )。用RT -PCR方法测定肝脏SR -BⅠmRNA表达。结果 :(1 )NE组大鼠肝脏SR -BⅠmRNA的表达较NS组无显著性变化 ;(2 )HS组SR -BⅠmRNA的水平显著低于NS组 (P <0 0 1 ) ;(3 )HE组SR -BⅠmRNA较HS组显著升高 (P <0 0 1 ) ,但是仍显著低于NS组 (P <0 0 1 )。结论 :有氧运动可在转录水平纠正高脂负荷下调大鼠肝脏SR -BⅠmRNA表达的作用 。

红笛鲷SR-BⅠ基因的原核表达及条件优化

根据GenBank上登录的红笛鲷SR-BⅠ基因设计引物,采用RT-PCR方法扩增该基因胞外段序列,然后将该基因胞外段序列定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,将重组质粒转入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并对重组表达菌株的表达条件进行优化。结果显示,成功构建了原核表达载体pET28a-SR-BI,并能在大肠杆菌BL21中表达,表达的融合蛋白分子量为50.0ku。融合蛋白的最佳诱导表达温度、IPTG浓度和时间分别为16℃、0.05mmol/L和8h。研究结果为进一步研究SR-BI的功能奠定了基础。

绞股蓝总皂苷对HDL-CE诱导的HepG2细胞SR-B Ⅰ受体表达的影响

目的研究绞股蓝总皂苷(GPS)对HepG2细胞B型Ⅰ类清道夫受体(SR-BⅠ)表达的影响,分析绞股蓝总皂苷抗动脉粥样硬化的机制。方法体外培养人HepG2肝癌细胞,用不同浓度的GPS和HDL-CE与细胞共孵育24 h。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇含量的变化,运用Real-time PCR、Western免疫印迹法分别检测绞股蓝总皂苷对细胞膜受体SR-BⅠmR-NA和蛋白的表达。结果 0～120 mg·L-1浓度的GPS对HepG2源性荷脂细胞增殖无影响,HDL-CE单独处理及HDL-CE和不同浓度GPS共孵育细胞处理后HepG2细胞中脂滴堆积增加,总胆固醇和胆固醇酯的含量明显增加,但后者SR-BⅠmRNA和SR-BⅠ蛋白的表达量却下调,并具有一定的量效关系。结论绞股蓝总皂苷对肝细胞具有保护作用,在高脂环境中,绞股蓝总皂苷能抑制肝细胞无限制的摄入脂质。

巨噬细胞内胆固醇平衡机制研究进展

巨噬细胞内脂质含量增多形成泡沫细胞是动脉粥样硬化早期病变的特征变化之一。巨噬细胞可以通过CD36和清道夫受体A-Ⅰ等膜受体摄入胆固醇,同时通过清道夫受体B-Ⅰ、ABC家族等逆转运膜受体将胆固醇逆转运出细胞,从而维持细胞内胆固醇平衡,阻止其在细胞内堆积形成泡沫细胞。本文对巨噬细胞内与胆固醇平衡机制做一综述。

普罗布考对动脉粥样硬化兔HDL功能的影响及其调控机制

目的观察普罗布考对动脉粥样硬化兔巨噬细胞、肝细胞HDL功能的影响,并进一步探讨普罗布考抗动脉粥样硬化的机制。方法18只新西兰大白兔随机分为:(1)正常对照组(n=6):给予普通饮食喂养;(2)动脉粥样硬化组(n=6):饲以高脂饲料;(3)普罗布考组(n=6):在饲以高脂饮食基础上给予普罗布考[400mg/(kg·d)]。12周后取血以酶法测定血脂;利用流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞、肝细胞细胞表面ABCA1、SR-BⅠ表达量;液闪计数仪检测其[3H]胆固醇转出率。结果实验12周后,普罗布考组血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、非高密度脂蛋白(NHDL-C)水平明显下降。普罗布考上调动脉粥样硬化兔腹腔巨噬细胞及肝细胞ABCA1及SR-BⅠ蛋白质表达水平。普罗布考组腹腔巨噬细胞、肝细胞[3H]胆固醇转出率较动脉粥样硬化组明显上升。结论虽然普罗布考降低HDL-C,但是其通过上调腹腔巨噬细胞、肝细胞SR-BⅠ及ABCA1的表达及增加其[3H]胆固醇转出率,改善HDL功能,具有促进动脉粥样硬化兔胆固醇逆转运(RCT)作用。

基于酵母双杂交系统对新疆芹菜根降脂活性成分的研究

目的:进行芹菜根降血脂作用有效部位的筛选,阐明其作用机制。方法:将芹菜根提取物及分离单体加入含有AH109菌株(携带大鼠apo-AⅠ与SR-BⅠ)的培养基中,通过报告基因ɑ,β-半乳糖苷酶活力的测定来定量检测apo-AⅠ与SR-BⅠ之间互相作用力的强弱,从而反应被测药物的降脂活力大小。结果:正丁醇组分中分离出的单体能够增强两种蛋白的相互作用。结论:芹菜根中正丁醇组分中分离出的这一单体是降血脂的目标化合物。