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Cylindrotheca closterium Is a Species Complex as Was Evidenced by the Variations of rbcL Gene and SSU rDNA
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作者 LI Haitao YANG Guanpin SUN Ying WU Suihan ZHANG Xiufang 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2007年第2期167-174,共8页
The genus Cylindrotheca consists of a small group of marine diatoms with a few species described. Eleven isolates of diatoms identified as Cylindrotheca closterium morphologically were obtained from Jiaozhou Bay with ... The genus Cylindrotheca consists of a small group of marine diatoms with a few species described. Eleven isolates of diatoms identified as Cylindrotheca closterium morphologically were obtained from Jiaozhou Bay with their nuclear-encoded small-subunit ribosomal RNA (SSU rDNA) and chloroplast-encoded rbcL gene sequences determined in this study. Interestingly, very high sequence divergences of SSU rDNA and rbcL gene were found among these isolates, and numerous nucleotide variation of rbcL gene caused relatively few variation of deduced amino acid sequence. Phylogenetic analyses based on SSU rDNA and rbcL gene, respectively, grouped the isolates into 6 clades. Phylogenetic tree of SSU rDNA placed all the Cylindrotheca isolates together, separating them into two lineages clearly. Lineage I was composed of the eleven C. closterium isolates obtained in this study together with another C. closterium isolate, but some clades were not well supported. Lineage II contained two C. closterium isolates and one C. fusiformis isolate. Phylogenetic analysis of rbcL gene also separated the Cylindrotheca isolates into two well-defined lineages. The eleven C. closterium isolates formed a lineage and all clades were supported strongly. Statistical comparisons of SSU rDNA indicated that the average distance within lineageⅠwas significantly higher than that of other microalgae species (P < 0.01). These results suggested the existence of cryptic species within C. closterium. 展开更多
关键词 硅藻属 新月柱鞘藻 复合种 rbcL基因变异 ssu RDNA
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宁夏地区奶牛源隐孢子虫分子鉴定与分析
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作者 黎玉琼 于有利 +7 位作者 从志鹏 赵正伟 梁小军 王韦健 李继东 李勤凡 文亮 牛晓昊 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期130-136,共7页
为了明确宁夏地区奶牛隐孢子虫的流行情况及其优势基因型,采集宁夏4个地区10个规模化奶牛养殖场中1174份奶牛粪便样品,基于核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因通过套式PCR进行检测和分析。结果显示,宁夏地区奶牛隐孢子虫阳性率为28.5%(335/1... 为了明确宁夏地区奶牛隐孢子虫的流行情况及其优势基因型,采集宁夏4个地区10个规模化奶牛养殖场中1174份奶牛粪便样品,基于核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因通过套式PCR进行检测和分析。结果显示,宁夏地区奶牛隐孢子虫阳性率为28.5%(335/1174);共鉴定出4种虫种,即微小隐孢子虫、牛隐孢子虫、瑞氏隐孢子虫和安氏隐孢子虫,阳性率分别为40.6%(136/335)、36.1%(121/335)、19.4%(65/335)和3.9%(13/335);微小隐孢子虫共鉴定出4种基因亚型,分别为ⅡdA15G1(n=70)、ⅡdA18G1(n=26)、ⅡdA19G1(n=23)和ⅡdA20G1(n=17)。统计学分析显示,在宁夏地区,0~2月龄的犊牛隐孢子虫感染率最高,且奶牛隐孢子虫的感染率与月龄差异显著相关(P<0.001)。表明宁夏地区奶牛存在隐孢子虫感染且存在人畜共患虫种,ⅡdA15G1微小隐孢子虫是宁夏地区奶牛感染的优势亚型。 展开更多
关键词 隐孢子虫 微小隐孢子虫 ssu rRNA基因 套式PCR 阳性率
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隐孢子虫SSU rRNA基因的巢式PCR-RFLP分析 被引量:8
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作者 姚龙泉 张西臣 +3 位作者 Lihua Xiao 吴涛 李建华 尹继刚 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2004年第6期321-325,共5页
目的 建立用巢式聚合酶链反应 (NestedPCR) 限制片段长度多态性 (Restrictionfragmentlength polymor phism ,RFLP)检测、鉴别微小隐孢子虫 (Cryptospordium parvum)和安氏隐孢子虫 (C .andersoni)的方法。  方法 用巢式PCR技术扩... 目的 建立用巢式聚合酶链反应 (NestedPCR) 限制片段长度多态性 (Restrictionfragmentlength polymor phism ,RFLP)检测、鉴别微小隐孢子虫 (Cryptospordium parvum)和安氏隐孢子虫 (C .andersoni)的方法。  方法 用巢式PCR技术扩增长春市人和牛粪便中C .parvum与C .andersoni的Small SubunitrRNA (SSUrRNA)部分基因 ,并克隆和测序。扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切 ,进行RFLP分析 ,并与GenBank上的 17株隐孢子虫相应序列进行对比分析和系统发育分析。 结果 C .parvumHCC1、C .parvumBOCC1和C .andersoniBOCC1扩增产物片段大小分别为 83 0bp、83 0bp和 82 8bp ,经SspⅠ和VspⅠ分别单酶切后形成 2种不同的RFLP图谱 ,根据RFLP图谱可鉴别C .parvum与C .andersoni。序列分析结果显示 ,C .parvumHCC1与国外牛源C .parvumBOH 6、C .parvumGCH1、鹿源C .parvumDR1相应序列同源性均为 99.3 % ;C .parvumBOCC1与国外牛源C .parvumBOH6、C .parvumGCH1、鹿源C .parvumDR1相应序列同源性均为 99.5 % ;C .andersoniBOCC1与国外C .andersoni相应序列同源性为 99.9%。系统发育分析结果显示 ,隐孢子虫虫种形成了 2个群 ,1个群包括C .parvum、C .baileyi、C .meleagridis、C .felis和C .wrairi,另 1个群包括C . 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 ssu RRNA基因 巢式PCR-RFLP
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小麦AGPase胞质型小亚基SSUI的克隆及过表达反义表达与RNAi干扰载体的构建 被引量:2
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作者 康国章 张孟琴 +2 位作者 官春云 郭天财 朱云集 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期41-46,52,共7页
采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶AGPase胞质型小亚基(AGPase plastic small subunit,SSU I)的cDNA全长,并构建了此基因的过表达、反义表达和RNAi干扰载体.SSUI的cDNA全长为1465 bp(GenBank No.EF4... 采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶AGPase胞质型小亚基(AGPase plastic small subunit,SSU I)的cDNA全长,并构建了此基因的过表达、反义表达和RNAi干扰载体.SSUI的cDNA全长为1465 bp(GenBank No.EF405961),编码域长度为1 422 bp,位于EF405961的2~1 423 bp.同源性比较结果表明:与GenBank上已报道的SSU I基因(X66080,AF244 997,Z48562)同源性达98%~99%.以pWM101质粒为基础,构建了由35 S启动子调控的SSU I基因的过表达载体pWM101SSU I S;将该基因反向置于pBI121质粒的CaMV35S启动子之后,构建了SSU I的反义表达载体pBI121SSU I A.同时还克隆出SSU I基因的一段260 bp高保守序列,以pFGC5941质粒为基础,构建了RNAi干扰载体pFGC5941SSU I. 展开更多
关键词 普通小麦 AGPase胞质型小亚基 表达载体
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新疆皮肤利什曼病病原体SSUrRNA基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 郑学礼 胡孝素 +2 位作者 杨文天 章涛 敬保迁 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期260-262,共3页
[目的 ]分析新疆皮肤利什曼病病原体SSUrRNA基因序列 ,为该病原体种株鉴定分析提供实验依据。[方法 ]应用利什曼原虫特异引物R2 2 2及R333,PCR扩增SSUrRNA基因多变区的片段 ,克隆于T Easyvector,并以双脱氧链末端终止法进行序列测定 ,用... [目的 ]分析新疆皮肤利什曼病病原体SSUrRNA基因序列 ,为该病原体种株鉴定分析提供实验依据。[方法 ]应用利什曼原虫特异引物R2 2 2及R333,PCR扩增SSUrRNA基因多变区的片段 ,克隆于T Easyvector,并以双脱氧链末端终止法进行序列测定 ,用DNASIS软件和GenBank微机联网检索分析所测XJCLP、L infantum及L tropicaSSUrRNA基因序列。[结果 ]XJCLP、L infantum及L tropicaSSUrRNA基因插入片段长度均为 394bp。XJCLP与L tropicaSSUrRNA基因 394bp序列存在 3个点突变 ,两者有 391个碱基相同 ,相似性为 99 2 %。XJCLP与L infantumSSUrRNA基因序列存在 3个点突变及 1个移码突变 ,两者有 390个碱基相同 ,类似性为99 0 %。L infantum与L tropica的SSUrRNA基因序列存在 1个移码突变 ,相似性为 99 7%。XJCLP、L infantum及L tropicaSSUrRNA基因序列一级结构与RNA二级结构均不同。经用GenBank检索本次所测XJCLP、L infantum及L tropicaSSUrRNA基因序列 ,该GenBank内尚无同类 394bp的SSUrRNA基因序列。[结论 ]XJCLP、L infantum及L tropica的SSUrRNA基因 394bp序列一级结构 ,二级结构存在差异。 展开更多
关键词 皮肤利什曼病 SSRrRNA基因 克隆 序列 病原体
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基于SSU rDNA序列的网状车轮虫群体遗传结构及多样性研究 被引量:1
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作者 许治祥 唐发辉 赵元莙 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1412-1419,共8页
基于SSU rDNA序列对当前分布于我国的网状车轮虫(Trichodina reticulata Hirschman&Partsch,1955)的群体遗传结构与多样性进行了研究。遗传结构研究结果表明:20个样本共检测到9个单倍型,含4个共享单倍型与5个特有单倍型,其中鲫来源... 基于SSU rDNA序列对当前分布于我国的网状车轮虫(Trichodina reticulata Hirschman&Partsch,1955)的群体遗传结构与多样性进行了研究。遗传结构研究结果表明:20个样本共检测到9个单倍型,含4个共享单倍型与5个特有单倍型,其中鲫来源的Hap3是最大的共享单倍型;草鱼来源的Hap8和小黄黝鱼来源的Hap9暂被视为湖北武汉和西藏地区各自特有的单倍型;同时推测鲫来源的单倍型Hap1为祖先单倍型。结合ML系统发育树分析推测,在多宿主的进化历程中,鲫寄生的网状车轮虫可能是分化最早的群体,且草鱼寄生的网状车轮虫在起源上来自于鲫。遗传多样性结果显示,所有群体均呈现较高的单倍型多样性(Hd≥0.5)与较低的核苷酸多样性(P_(i)<0.005),且鲫来源的单倍型多样性显著高于草鱼来源,但核苷酸多样性(P_(i))明显低于后者。遗传分化(F_(st))与基因流(N_(m))研究结果表明,Group A(鲫来源)与Group B(草鱼来源)群体间相对独立且已经达到了极度分化程度,群体内基因层面的交流较少。综合中性检验与核苷酸单倍型错配分析认为,Group A(鲫来源)未发生过种群扩张,Group B(草鱼来源)则存在过早期的种群扩张历史。 展开更多
关键词 ssu rDNA 单倍型多样性 核苷酸多样性 遗传分化 基因流 网状车轮虫
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Molecular Phylogenetic Lineage of Plagiopogon and Askenasia(Protozoa, Ciliophora) Revealed by Their Gene Sequences
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作者 LIU An YI Zhenzhen +3 位作者 LIN Xiaofeng HU Xiaozhong Saleh A.AL-FARRAJ Khaled A.S.AL-RASHEID 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2015年第4期724-730,共7页
Prostomates and haptorians are two basal groups of ciliates with limited morphological characteristics available for taxonomy. Morphologically, the structures used to identify prostomates and haptorians are similar or... Prostomates and haptorians are two basal groups of ciliates with limited morphological characteristics available for taxonomy. Morphologically, the structures used to identify prostomates and haptorians are similar or even identical, which generate heavy taxonomic and phylogenetic confusion. In present work, phylogenetic positions lineage of two rare genera, Plagiopogon and Askenasia, were investigated. Three genes including small subunit ribosomal RNA gene(hereafter SSU r DNA), internal transcribed spacer region(ITS region), and large subunit ribosomal RNA gene(LSU r DNA) were analyzed, 10 new sequences five species each. Our findings included 1) class Prostomatea and order Haptorida are multiphyletic; 2) it may not be appropriate to place order Cyclotrichiida in subclass Haptoria, and the systematic lineage of order Cyclotrichiida needs to be verified further; 3) genus Plagiopogon branches consistently within a clade covering most prostomes and is basal of clade Colepidae, implying its close lineage to Prostomatea; and 4) Askenasia is phylogenetically distant from the subclass Haptoria but close to classes Prostomatea, Plagiopylea and Oligohymenophorea. We supposed that the toxicyst of Askenasia may be close to taxa of prostomes instead of haptorians, and the dorsal brush is a more typical morphological characteristics of haptorians than toxicysts. 展开更多
关键词 分子系统发育 基因序列 纤毛虫 原生动物 核糖体RNA基因 谱系 显示 形态特征
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卵形疟原虫wallikeri亚种及其基因检测体系的研究进展 被引量:30
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作者 李美 夏志贵 汤林华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期64-67,共4页
近年来的研究发现,以核糖体RNA小亚基(SSU rRNA)为标记基因的巢式PCR体系进行检测时,部分镜检卵形疟原虫阳性血样的结果呈阴性,主要原因是卵形疟原虫wallikeri亚种(Plasmodium ovale wallikeri)的存在。为此本文综述近20年来卵形疟原虫w... 近年来的研究发现,以核糖体RNA小亚基(SSU rRNA)为标记基因的巢式PCR体系进行检测时,部分镜检卵形疟原虫阳性血样的结果呈阴性,主要原因是卵形疟原虫wallikeri亚种(Plasmodium ovale wallikeri)的存在。为此本文综述近20年来卵形疟原虫wallikeri亚种的发现和确认的过程,以及在该过程中,开发应用的各种检测卵形疟原虫的方法和体系,为疟疾诊断尤其是卵形疟诊断方面提供技术参考。 展开更多
关键词 卵形疟原虫wallikeri亚种 核糖体小亚基 巢式PCR
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基于凝集素基因对部分隐孢子虫种类的分子鉴定 被引量:1
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作者 刘珍珍 胡苏辉 +5 位作者 张璐 陈凯丽 张龙现 宁长申 菅复春 Rongchang YANG 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期290-295,共6页
目的为了解隐孢子虫凝集素基因在不同分离株的序列差异及其遗传进化关系,以SSU rRNA基因作参照,评价Lectin基因位点作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的可行性。方法采用巢式PCR,分别在Lectin和SSU rRNA位点处对本实验室分离保存的多... 目的为了解隐孢子虫凝集素基因在不同分离株的序列差异及其遗传进化关系,以SSU rRNA基因作参照,评价Lectin基因位点作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的可行性。方法采用巢式PCR,分别在Lectin和SSU rRNA位点处对本实验室分离保存的多个隐孢子虫分离株进行PCR的扩增。用Clustalx对扩增序列与参考序列进行比对,用MEGA5中的邻近法(Neighbor joining method NJ),进行进化树的构建。结果基于Lectin基因位点,在C.parvum、C.hominis、C.cuniculus及其在SSU rRNA处与人源C.hominis极为相近的horse genotype、驴源C.hominis均成功扩增出了大小在450bp左右的目的条带,并进行了进化树的分析,不同种类和同种不同动物来源的隐孢子虫分布在不同的分支上。结论 Lectin基因位点可很好的区分SSU rRNA序列极为相似的几种隐孢子虫,有望为人兽共患隐孢子虫分类和遗传研究提供新的基因靶标。 展开更多
关键词 隐孢子虫 Lectin基因 ssu RRNA基因 基因分型
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福建古田红曲生产用红曲霉菌主要种类的鉴别 被引量:10
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作者 李志强 刘颖 +1 位作者 林风 吴丽云 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期64-69,共6页
以购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的5株红曲霉菌为对照,对福建省微生物研究所红曲霉菌资源库中收藏自福建省古田县的60株红曲霉菌(Monascus sp.)进行分类鉴定研究。首先根据不同菌株在麦芽汁琼脂(Wa)、察氏酵母提取物琼脂(C... 以购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)的5株红曲霉菌为对照,对福建省微生物研究所红曲霉菌资源库中收藏自福建省古田县的60株红曲霉菌(Monascus sp.)进行分类鉴定研究。首先根据不同菌株在麦芽汁琼脂(Wa)、察氏酵母提取物琼脂(CYA)和甘油硝酸盐琼脂(G25N)培养基上的菌落形态特征进行初步分类,进而基于核糖体DNA内转录间隔区(rDNA internal transcribed spacer,rDNA ITS)、核糖体大亚基(28S nuclear ribosomal large subunit rRNA gene,LSU)和核糖体小亚基(18S nuclear ribosomal small subunit r RNA gene,SSU)的基因片段的测序结果,在Gen Bank中通过BLAST进行分子生物学方面的鉴定研究,并用ITS序列构建系统发育树。通过形态特征及3个基因序列的比对,认为所选取的60株古田红曲霉菌分别归属红色红曲霉菌(M.ruber)、丛毛红曲霉菌(M.pilosus)或紫色红曲霉菌(M.purpureus)3个种。 展开更多
关键词 红曲霉菌 ITS LSU ssu 鉴定
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孔雀鱼暗尾丝虫病病原性确认与鉴定 被引量:4
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作者 杨丽文 潘宏博 +2 位作者 李华 李强 吴亚楠 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期578-582,共5页
近年来,随着休闲渔业的兴起,观赏鱼养殖业蓬勃发展,目前我国出口的观赏鱼类已达120多种,产品远销东南亚、日本、欧洲、美国等,年出口创汇约达2亿美元。其中孔雀鱼、剑尾鱼等小型热带观赏鱼深受养殖爱好者青睐,其贸易量约占淡水观... 近年来,随着休闲渔业的兴起,观赏鱼养殖业蓬勃发展,目前我国出口的观赏鱼类已达120多种,产品远销东南亚、日本、欧洲、美国等,年出口创汇约达2亿美元。其中孔雀鱼、剑尾鱼等小型热带观赏鱼深受养殖爱好者青睐,其贸易量约占淡水观赏鱼总贸易量的30%以上 。但在观赏鱼养殖中由于养殖密度高、管理不善、防病治病措施不力等原因,养殖期间病害极易暴发流行。 展开更多
关键词 孔雀鱼 暗尾丝虫 人工感染试验 ssu RRNA基因序列 形态学
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宁夏吴忠市羊隐孢子虫感染情况调查及虫种鉴定 被引量:5
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作者 杨佳冰 米荣升 +3 位作者 张烨华 王进香 陈兆国 于三科 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期72-78,共7页
为了解宁夏回族自治区吴忠市羊隐孢子虫病流行情况,从吴忠市的2个规模羊场采集480份粪便样品。提取基因组DNA,用套式PCR扩增隐孢子虫SSUrRNA基因,阳性样品进行测序分析。结果显示,吴忠市羊隐孢子虫感染率为28.3%,其中盐池县绵羊感染率为... 为了解宁夏回族自治区吴忠市羊隐孢子虫病流行情况,从吴忠市的2个规模羊场采集480份粪便样品。提取基因组DNA,用套式PCR扩增隐孢子虫SSUrRNA基因,阳性样品进行测序分析。结果显示,吴忠市羊隐孢子虫感染率为28.3%,其中盐池县绵羊感染率为33.8%,同心县山羊感染率为22.9%;共发现3种隐孢子虫感染,其中肖氏隐孢子虫(Cryptosporidium xiaoi)阳性率最高(62.5%),其次是泛在隐孢子虫(C.ubiquitum)(32.4%),微小隐孢子虫(C.parvum)感染率最低(5.2%);从季节上看,春季感染率最高(49.2%),夏季最低(6.7%);从羊的年龄上看,未断奶羔羊感染率最高(34.4%),而成年羊感染率最低(19.4%);序列比对结果显示,所有阳性样品均在Gen Bank找到100%同源的序列。本研究首次对宁夏羊感染的隐孢子虫进行了分子鉴定,为深入了解宁夏吴忠市羊隐孢子虫病流行情况、制定有效的防控措施提供了依据。 展开更多
关键词 隐孢子虫 ssu rRNA基因 流行病学 绵羊 山羊
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一株家蚕病原性微孢子虫的生物学特性与分子系统发育分析 被引量:8
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作者 罗梅兰 黄旭华 +6 位作者 潘志新 蒋满贵 汤庆坤 黄深惠 安春梅 胡文娟 甘丽红 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期856-863,共8页
从家蚕体内分离得到一株新的病原性微孢子虫,编号为GXM1。光学显微镜下观察GXM1微孢子虫为长卵圆形,大小(1.85±0.15)μm×(4.19±0.18)μm,在生活史的各发育阶段均为双核,以二分裂方式增殖,发育速度缓慢,发育周期约8~10 d... 从家蚕体内分离得到一株新的病原性微孢子虫,编号为GXM1。光学显微镜下观察GXM1微孢子虫为长卵圆形,大小(1.85±0.15)μm×(4.19±0.18)μm,在生活史的各发育阶段均为双核,以二分裂方式增殖,发育速度缓慢,发育周期约8~10 d。GXM1微孢子虫与家蚕微孢子虫(Nb)的抗血清产生阳性凝聚反应。利用透射电子显微镜观察到GXM1微孢子虫的超微结构具双核,极丝11~12圈,极丝倾斜角约45°。以上生物学性状显示GXM1微孢子虫具有微孢子虫属(Nosema)的基本分类特征。依据GXM1微孢子虫与其它昆虫微孢子虫的SSU rRNA基因序列构建的系统发育树,以及序列相似性和遗传距离分析,进一步证实GXM1微孢子虫属于Nosema属。GXM1微孢子虫对蚁蚕的半数感染浓度(IC50)为6.06×105mL-1,对家蚕的胚种传染率可达23.28%,是一株具有较强致病性和危害性的家蚕病原性微孢子虫。 展开更多
关键词 微孢子虫 微孢子虫属 家蚕 病原性 生物学特性 ssu RRNA基因序列 系统发育分析
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Characterization of root-associated bacterial community structures in soybean and corn using locked nucleic acid(LNA) oligonucleotide-PCR clamping and 454 pyrosequencing 被引量:6
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作者 YU Zhen-hua YU Jiang +3 位作者 Makoto Ikenaga Masao Sakai LIU Xiao-bing WANG Guang-hua 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第8期1883-1891,共9页
supported in part by grants from the Strategic Priority Research Program of Chinese Academy of Sciences (XDB15010103);the National Natural Science Foundation of China (41201247)
关键词 bacterial diversity high-throughput sequencing corn soybean ssu rRNA genes
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基于TaqMan-MGB探针的虾肝肠胞虫荧光定量PCR检测方法 被引量:5
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作者 马来 童桂香 +5 位作者 韦信贤 曾德乾 熊建华 王瑞 黄光华 江林源 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期1319-1326,共8页
【目的】基于TaqMan-MGB探针建立虾肝肠胞虫(EHP)荧光定量PCR检测方法,为EHP的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】以EHP的SSU rDNA基因为检测靶基因,在其保守区设计特异性的扩增引物和TaqMan-MGB探针,将PCR扩增目标片段克隆... 【目的】基于TaqMan-MGB探针建立虾肝肠胞虫(EHP)荧光定量PCR检测方法,为EHP的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】以EHP的SSU rDNA基因为检测靶基因,在其保守区设计特异性的扩增引物和TaqMan-MGB探针,将PCR扩增目标片段克隆至pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-T-SSU^EHP(标准品),以标准品DNA为模板优化反应体系,建立检测EHP的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR;以10倍梯度稀释的标准品DNA为模板构建扩增标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】制备的重组质粒pMD18-T-SSU^EHP DNA稳定性好,可满足作为标准品和阳性对照的要求;标准品(pMD18-T-SSU^EHP)起始模板范围为2.0×10^1~2.0×10^9拷贝/反应时,建立的标准曲线线性关系良好,对应的线性回归方程为y=-3.232×lg(x)+39.51。基于TaqMan-MGB探针建立的EHP荧光定量PCR对标准品的检测灵敏度可达20拷贝/反应,对临床虾样品EHP的检测灵敏度约10拷贝/mg,较农业农村部推荐的套式PCR约提高10倍;对虾类其他常见病原均无扩增反应,其组内和组间变异系数分别为0.26%~0.72%和0.56%~0.92%,整个检测过程可在1 h内完成。采用建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR与套式PCR同时对276份临床虾样品进行检测比较,发现两种方法的符合率为96.7%,检测低拷贝数虾样品时前者具有更高的灵敏度;2018和2019年广西虾样品的EHP阳性检出率分别为16.2%和30.6%。【结论】基于TaqMan-MGB探针建立的EHP荧光定量PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量范围宽及简单快速等优点,适用于虾类样品的EHP定量检测,可为EHP实时监测及EHPD快速诊断提供一种新的技术手段。 展开更多
关键词 虾肝肠胞虫 ssu rDNA基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR
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Distribution of Protists in the Deep South China Sea Revealed by High-Throughput Sequencing
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作者 LI Xinran WARREN Alan +1 位作者 JIAO Nianzhi XU Dapeng 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2020年第1期161-170,共10页
Protists(microbial eukaryotes)are indispensable members of the marine microbial food web.In recent years,organisms living in the deep sea(>1000 m water depth)have increasingly become the focus of research;however,s... Protists(microbial eukaryotes)are indispensable members of the marine microbial food web.In recent years,organisms living in the deep sea(>1000 m water depth)have increasingly become the focus of research;however,studies on protistan assemblages are relatively scarce compared with their prokaryotic counterparts.In the present study,high-throughput sequencing of the hypervariable V9 region of the 18S rRNA gene was used to explore the community composition of protists in bathypelagic waters of the South China Sea.Based on the analysis of the alpha and beta diversities of 14 samples,we discovered:1、members belonging to Rhizaria,Alveolata,and Excavata were the dominant groups in terms of both relative sequence abundance and operational taxonomic unit(OTU)richness in all samples,although their relative contributions differed among different samples;2、cluster analysis showed that the distribution of protistan assemblages was related neither to the sampling location nor to the water depth,and other environmental factors might have caused the differences among the communities;3、phototrophs,including members of the Bacillariophyta,Bolidophyceae,Dictyochophyceae,Prasinophyceae,and Prymnesiophyceae,were detected in all samples,which indicated their contributions to the downward transportation via the biological pump and the potential presence of phagotrophy of these phototrophic cells in the deep ocean. 展开更多
关键词 bathypelagic water DIVERSITY microbial eukaryotes ssu rRNA gene
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Taxonomy and Phylogeny of a New Marine Planktonic Ciliate, Strombidium pseudorapulum sp. n. (Protozoa, Ciliophora, Oligotrichia)
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作者 LI Fenfen HUANG Yaoyao +2 位作者 YU Ying LIU Weiwei LIN Xiaofeng 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2020年第4期954-960,共7页
As one of the main groups of marine planktonic protozoa,oligotrich ciliates have shown a high biodiversity.Recently,a new aloricate oligotrich ciliate,Strombidium pseudorapulum sp.n.was isolated from coastal waters of... As one of the main groups of marine planktonic protozoa,oligotrich ciliates have shown a high biodiversity.Recently,a new aloricate oligotrich ciliate,Strombidium pseudorapulum sp.n.was isolated from coastal waters of southeast China.The living morphology and infraciliature of this species were studied using live cell observation and protargol impregnation.Strombidium pseudorapulum sp.n.differs from its congeners by having a radish-like body with a bumped anterior end and an elongated tail-like posterior end,possessing a red‘eyespot’in apical protrusion of cell,adoral zone of membranelles composed of 12–16 collar and 9–12 buccal membranelles,one spindle-shaped macronucleus,girdle kinety in anterior 2/5 of cell with 45–60 densely spaced dikinetids,and ventral kinety occupying about the posterior 1/3 of the cell with 16–19 dikinetids.Strombidium pseudorapulum sp.n.clusters together with those species having‘eyespot’in apical protrusion in the phylogenetic tree based on the small subunit rRNA gene sequence.It is a sister species of S.cuneiforme with 31 unmatched nucleotides between their SSU rRNA gene sequences. 展开更多
关键词 aloricate oligotrichs morphology new species ssu rRNA gene sequence
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Ciliates in the Marsh Wetlands of Chongming Island: Taxonomy of Five Species and a Species List
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作者 MA Zuhang DONG Tianyao +3 位作者 LIAO Wanying FAN Xinpeng XU Yuan GU Fukang 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期441-454,共14页
To clarify the confusion surrounding species identification and state intraspecific variations, this research studied the morphological taxonomy of five species, Kentrophyllum cf. setigerum Petz et al., 1995; Zosterod... To clarify the confusion surrounding species identification and state intraspecific variations, this research studied the morphological taxonomy of five species, Kentrophyllum cf. setigerum Petz et al., 1995; Zosterodasys shumerica Aliev, 1990; Frontonia tchibisovae Burkovsky, 1970; Neourostylopsis orientalis Chen et al., 2013; and Apoholosticha cf. sinica Fan et al., 2014, which were collected from Chongming Island's marsh wetlands. Kentrophyllum cf. setigerum possesses less somatic kineties than K. setigerum(19–26 right and 18–25 left kineties vs 35–40 right and 30 left kineties). Whether Z. shumerica is identical to Z. transversa Foissner et al., 1994, which was presented in a previous report, was negated. The improved diagnosis for the species is provided. Frontonia tchibisovae was confirmed to have three or four micronuclei, and the number of kinetosome rows in its peniculus 3 varied between China and Russia populations. The new population of N. orientalis bears cortical granules, which differs from the original population that has an arrangement of rows across the dorsal bristles. For A. cf. sinica, there are colorless cortical granules on the ventral side of the new population, whereas in the previously reported populations bright orange, spherical granules were clustered around dorsal cilia. Additionally, we sequenced the small-subunit(SSU) rRNA genes of K. cf. setigerum, N. orientalis, and A. cf. Sinica, and compared the new and reported populations. For the first time, we also provide a species list, including 33 ciliates collected from the wetlands based on living observation and silver staining. 展开更多
关键词 morphology new RECORDS PROTOZOA ssu rRNA gene
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Pauciramus yunnanensis,gen.et sp.nov.,a novel freshwater red alga from China with proposal of the Ottiales ord.nov.(Nemaliophycidae,Rhodophyta)
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作者 Kunpeng FANG Fangru NAN +4 位作者 Jia FENG Junping LÜ Qi LIU Xudong LIU Shulian XIE 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期1245-1256,共12页
Species of the red algal order Acrochaetiales mostly inhabit marine environments,with only two freshwater taxa Audouinella and Ottia.A new genus and species are described for freshwater red alga Pauciramus yunnanensis... Species of the red algal order Acrochaetiales mostly inhabit marine environments,with only two freshwater taxa Audouinella and Ottia.A new genus and species are described for freshwater red alga Pauciramus yunnanensis from Ailao Mountain,Yunnan,China.It is closely related to Ottia and a new order Ottiales was proposed for these genera.Pauciramus has unique combination of morphological characteristics including the following:plants caespitose and densely pulvinate,slender uniseriate filaments with well-developed rhizoids,rarely branched,cylindrical vegetative cell with a single,ribbon-shaped and parietal chloroplast,reproduction by tetrasporangia,and dense sporangial branchlet only at the upper portion of filaments.Phylogenetic analysis of sequence data from the plastid ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase-oxygenase large-subunit(rbc L),small subunit gene of the ribosomal cistron(SSU)and barcode region near the 5′end of the mitochondrial cytochrome oxidase subunit I(COI-5P)indicated that:the new taxon,P.yunnanensis,was in a well-supported clade with Ottia meiospora,and this clade was sister to order Palmariales and Acrochaetiales.To adhere to the principle of monophyly,a new freshwater order Ottiales including Ottia and Pauciramus is proposed.Despite the high sequence interspecific divergences and obvious morphological differences between genera Ottia and Pauciramus,seems impractical to establish a new family for a monospecific genus.Therefore,we temporarily classified Pauciramus into the family Ottiaceae,and made necessary revisions to the description to accommodate this genus. 展开更多
关键词 China 5′end of the mitochondrial cytochrome oxidase subunit I(COI-5P) Ottiales Pauciramus ribulose-1 5-bisphosphate carboxylase-oxygenase large-subunit(rbc L) small subunit gene of the ribosomal cistron(ssu)
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PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因在溺死鉴定中的应用 被引量:17
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作者 余政梁 刘超 +5 位作者 胡孙林 周玉 赵建 王会品 谢卫兵 王慧君 《中国法医学杂志》 CSCD 2013年第6期457-460,共4页
目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死(水中溺毙)、死后入水(空气栓塞致死后入水)、对照组(空气栓塞致死后不做处理);溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩... 目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死(水中溺毙)、死后入水(空气栓塞致死后入水)、对照组(空气栓塞致死后不做处理);溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩增硅藻特异的核糖体小亚基(SSU)片段,用琼脂糖凝胶电泳检测、DHPLC检测分析。结果 6份硝酸消化法检测阴性的溺死人体器官组织检材经PCR及琼脂糖凝胶电泳检出5例阳性。生前溺死组肺、肝、肾硅藻检出率分别为100%、90%、85%,死后入水组仅肺检出硅藻(15%),对照组各组织均为阴性;生前溺死组检出率明显高于死后入水组(P<0.05)。10份溺死人体器官组织检材采用DHPLC法检出硅藻种类明显多于微波消解-扫描电镜法(P<0.05)。脏器检出硅藻种类与溺死点水样一致。结论采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,有助于溺死鉴定和溺死地点的推断,具有法医学应用价值。 展开更多
关键词 法医病理学 溺死 硅藻检验 ssu PCR DHPLC
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