大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS的表达变化

为了探讨大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C底物)在神经中的表达变化及其意义,本研究制备了成年SD大鼠坐骨神经夹伤模型,通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经夹伤后SSeCKS表达的时空变化。Western blotting结果显示:大鼠坐骨神经夹伤后,SSeCKS的表达迅速升高,伤后6h即达到高峰,之后逐渐下降。免疫组织化学染色结果表明SSeCKS在神经夹伤两端高表达,以近端明显,呈簇状聚集。夹伤远端表达较近端稍低。远离夹伤处及相应对侧,SSeCKS的表达水平有所下降且分布较为均一。免疫荧光组织化学双标记结果显示:夹伤两端SSeCKS与S100和NF200的共存不明显,但可见部分SSeCKS与GAP43双标纤维。本研究提示大鼠坐骨神经夹伤可引起SSeCKS的表达变化,该变化可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导并与损伤后神经的再生及功能修复有关。

SSeCKS调节激活的星形胶质细胞炎症因子TNF-α和NO的释放

目的:星形胶质细胞是CNS中主要的胶质细胞类型,维持着CNS内环境的稳态。慢性激活的星形胶质细胞被认为参与了包括MS在内的神经免疫学疾病。SSeCKS在EAE病程中表达显著上调,并且主要表达于神经元和胶质细胞中,参与EAE炎症的调节。本实验探讨SSeCKS对星形胶质细胞炎症因子释放的影响,为MS和EAE的治疗寻找新的靶点。方法:本实验通过培养原代星形胶质细胞,脂质体介导SSeCKS基因沉默,并采用ELISA检测星形胶质细胞中肿瘤坏死因子-α以及一氧化氮的分泌情况。结果:原代培养的星形胶质细胞纯度达到了95%以上,SSeCKS干扰后星形胶质细胞炎症因子分泌显著降低。结论:SSeCKS参与星形胶质细胞炎症因子的分泌,可能为MS和EAE治疗提供新的思路。

SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺损伤中的表达

目的观察新生大鼠高氧肺损伤模型肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达及细胞定位。方法64只新生大鼠按照随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露组,分别建立动物模型,于12、24、48、72h处死动物,进行肺组织的病理学检查及肺湿干质量比(W/D)检测,应用Western blot及免疫组化法检测各组各时相点肺组织中SSeCKS蛋白的表达,用间接免疫荧光双标法明确SSeCKS蛋白在肺组织中的定位。结果病理HE染色:高氧暴露24h肺泡内出现少量红细胞,肺泡壁增厚;48h肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁;72h出现肺出血,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔粒细胞浸润。Western blot法检测SSeCKS蛋白:空气对照组可检测到极少量的SSeCKS的表达,高氧暴露24h表达增加,72h达到最高,72h内随高氧暴露时间延长而增加;免疫组化定量分析与Western blot结果一致;间接免疫荧光双标法明确SSeCKS定位于毛细血管内皮细胞。结论提示SSeCKS参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程。

IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究

目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达。方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变。结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化。在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响。结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中。

大鼠脑损伤后SSeCKS的表达变化

目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型。通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCKS在脑组织中的细胞定位。结果:Western blot显示,大鼠脑损伤后,SSeCKS的表达逐步降低,伤后3d降至最低点,之后逐渐上升,7d达到高峰,14d后趋于平稳;RT-PCR的结果与Western blot一致。免疫荧光双标记结果显示SSeCKS与星形胶质细胞的标记物GFAP、神经元的标记物NeuN共定位。结论:大鼠脑损伤可以改变SSeCKS的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程,并与神经元的凋亡、轴突再生有关。

TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0h、0.5h、1.5h、3h、6h、12h;后组分别以0U/ml、200U/ml、1000U/ml、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。运用RT-PCR法分析SSeCKSmRNA的表达变化。结果TNF-α可以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKSmRNA的表达。结论SSeCKS可能参与了TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤过程。

内毒素致伤大鼠肝组织SSeCKS mRNA水平的研究

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)致伤大鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKs)mRNA的表达变化。方法SD大鼠腹腔注射LPS建立肝损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组。用Real-timePCR法检测肝组织SSeCKSmRNA水平的表达情况。结果不同剂量LPS注入腹腔后8小时均可引起肝脏SSeCKS的表达变化,且呈现一定的剂量依赖关系。5mg/kgLPS腹腔注射后肝脏SSeCKSmRNA水平的表达量达到最高,此后虽然增加LPS剂量但也不能诱导SSeCKSmRNA水平表达量的增加;5mg/kgLPS腹腔注射后肝脏SSeCKS的表达变化呈现时间依赖关系,LPS注射后1小时肝脏SSeCKSmRNA水平表达增高,12小时达到最高水平,此后SSeCKS一直维持高水平。结论LPS引起肝脏SSeCKSmRNA表达呈时间和剂量依赖性变化,提示SSeCKS与LPS所致肝损伤相关。

大鼠脑组织中SSeCKS基因克隆

目的 :克隆胚胎大鼠脑组织中SSeCKS基因。方法 :采用RT -PCR法 ,从胚胎大鼠脑组织mRNA中扩增SSeCKS基因部分CDS区片段 ,克隆入T载体 ,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定。结果 :RT -PCR法扩增出一特异产物与预期长度 44 6bp相符 ,DNA序列测序的结果与GenBank提供的已知序列 (U 2 3 14 6)比较 ,所克隆的SSeCKS基因片段与其中的 44 6bp完全相同 ,与SSeCKS基因 10 0 %同源。 结论 :采用RT

卡巴胆碱对失血性休克大鼠肺微血管内皮细胞功能的影响

目的 观察大鼠失血性休克时卡巴胆碱对肺微血管内皮细胞的作用。方法 将30只健康雄性SD大鼠(SPF级)按每组10只随机分为假休克组(SS组)、失血性休克组(HS组)、失血性休克+卡巴胆碱组(CBL组)。失血性休克动物模型按照Wiggers改良法制作,各组模型制备完毕后6 h,经右侧股动脉采血,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取右肺下叶肺组织检测Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)、E-选择素蛋白质水平,取右肺下叶行透射电镜检查肺微血管内皮细胞超微结构。结果 SS组表达少量的TNF-α、SSeCKS、E-选择素,HS组和CBL组表达升高(P<0.05),与HS组相比,CBL组表达降低(P<0.05)。SS组肺微血管内皮细胞细胞膜表面光滑,细胞膜、细胞质、细胞核形态结构正常;HS组肺微血管内皮细胞出现细胞水肿、坏死和凋亡表现(细胞膜表面皱折、细胞膜表面凹凸不平、细胞器水肿、异染色质染色加深边集等);CBL组较SS组,细胞有所损伤,但好于HS组。结论 大鼠失血性休克时卡巴胆碱对肺微血管内皮细胞具有保护作用,也可通过抑制炎症细胞合成和释放炎症介质减轻对血管内皮细胞的损伤。

内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

目的观察内毒素脂多糖(LPS)致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达变化和细胞定位。方法腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组。用RealtimePCR法和Westernblot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位。结果SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系:1、5、10和15mgkg组SSeCKSmRNA水平皆显著高于对照组(P<0.05),且随注射剂量增高SSeCKSmRNA表达量亦逐渐增高;不同时相LPS(5mgkg)注射后肺组织中SSeCKSmRNA水平表达呈动态变化过程,1h开始增高,3h达到表达高峰,12h降至正常水平;SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞。结论SSeCKS是炎症反应蛋白,其表达量与炎症的严重程度相关。内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调。

动脉粥样硬化大鼠动脉组织中SSeCKS的表达

目的研究动脉粥样硬化大鼠动脉组织中丝氨酸(Src)抑制的C激酶底物(SSeCKS)的表达。方法以高脂饲料喂养加维生素D3腹腔注射建立SD大鼠动脉粥样硬化模型(A),对照(B)组,每组8只给予基础饲料喂养。测定血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG);病理学观察HE染色的主动脉;用免疫组织化学法及免疫印迹法检测SSeCKS在动脉中的表达,免疫荧光双标法观察SSeCKS的细胞定位。结果12周时A组TC和TG较B组明显升高(P<0.05);A组形成纤维增生性动脉粥样硬化病变,SSeCKS表达显著增强,SSeCKS表达主要分布在动脉内膜、中膜,部分定位于内皮细胞。结论高脂饮食所致动脉粥样硬化大鼠主动脉SSeCKS表达增加,SSeCKS可能参与了血管重塑及细胞凋亡从而促进动脉粥样硬化的发展。

卡巴胆碱对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞功能的影响

目的观察卡巴胆碱对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞（VEC）功能的影响。方法将SPF级健康雄性SD大鼠30只随机分成三组：氯化钠注射液组（SHAM组）、脓毒症组（LPS组）、卡巴胆碱组（CBL组）。LPS组经左侧股静脉注射脂多糖（LPS）10 mg/kg，SHAM组经左侧股静脉注射等量氯化钠注射液，卡巴胆碱组在注射LPS后注射卡巴胆碱10 μg/kg。分别在各组模型制备完毕后6 h经腹主动脉取血用ELISA法检查肿瘤坏死因子-α（TNF-ɑ）水平，取右肺下叶肺组织用Real-time PCR检测SSeCKS的mRNA表达，Western blot检测各组右肺下叶肺组织E-选择素蛋白质表达水平情况，取右肺中叶行透射电镜检查。结果SHAM组表达少量的TNF-ɑ、SSeCKS、E-选择素，LPS能够上调他们的表达，CBL组TNF-ɑ、SSeCKS、E-选择素较LPS组表达降低（P〈0.05）。透射电镜结果显示CBL组肺VEC水肿和凋亡等表现较LPS组相对减轻。结论卡巴胆碱不仅可以有效抑制脓毒症大鼠血浆TNF-ɑ水平，抑制炎症反应，而且能下调肺微血管内皮细胞SSeCKS和E-选择素的表达，并减轻LPS所致的肺微血管内皮细胞超微结构改变。提示卡巴胆碱能够改善脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞的通透性。

脂多糖刺激大鼠肝组织后Src抑制的蛋白激酶C底物的表达变化

蛋白激酶C（PKC）作为信号转导主要成员而参与内毒素诱导肝损伤。然而，目前关于PKC参与内毒素肝损伤的分子机制尚不明确。Src抑制的蛋白激酶C的底物（SSeCKS）为一种新发现的支架蛋白，通过锚定主要信号调节因子蛋白激酶C（PKC）而调节其与下游底物的结合，从而辅助调控细胞因子的分泌和有丝分裂。有研究表明，SSeCKS是一种炎症反应蛋白，在内毒素小鼠模型中发现SSeCKS在多个组织中表达增加b1。对内毒素肝损伤中SSeCKS表达变化的研究鲜见报道。因此，我们检测了脂多糖（LPS）诱导肝损伤过程中SSeCKS的表达情况及其细胞定位。