白细胞与红细胞比容比值对急性ST段抬高型心肌梗死再灌注治疗后院内主要不良心血管事件的预测价值

目的探讨白细胞与红细胞比容比值(WBCHR)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者再灌注治疗后发生院内主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法采用病例-对照研究方法,回顾性选取首次确诊STEMI并接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的319例患者作为研究对象,按照住院期间是否发生MACE分为MACE组69例和非MACE组250例。比较2组患者的临床资料,包括一般资料、实验室检验指标、超声心动图和冠状动脉造影结果。采用单因素与多因素Logistic回归分析探讨STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析WBCHR对STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE的预测价值。结果MACE组空腹血糖、尿酸、肌酐、白细胞计数、中性粒细胞计数、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、D-二聚体、WBCHR水平均高于非MACE组,红细胞计数、血红蛋白、红细胞比容、左室射血分数均低于非MACE组,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者年龄、性别、吸烟史、高血压史、糖尿病史、入院首次接触导丝至通过病变血管(D2W)时间、总胆固醇、甘油三酯和病变血管数目比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,尿酸水平升高(OR=1.005,95%CI:1.002~1.009,P=0.004)、血红蛋白浓度降低(OR=0.964,95%CI:0.941~0.988,P=0.003),hs-CRP水平升高(OR=1.032,95%CI:1.009~1.056,P=0.007)、WBCHR水平升高(OR=1.455,95%CI:1.295~1.635,P<0.001)均为STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE的独立危险因素。ROC曲线分析结果显示,WBCHR预测STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE的曲线下面积为0.855(95%CI:0.796~0.914,P<0.001),灵敏度为63.8%,特异度为99.6%。结论WBCHR是STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE的独立影响因素,对STEMI患者再灌注治疗后发生院内MACE具有较高的预测价值。

血清B细胞活化因子水平与ST段抬高型心肌梗死患者心血管事件的相关性研究

目的 评估血清B细胞活化因子(BAFF)水平对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者心血管事件的预测价值。方法 选取2020年1月—2022年6月在南通大学附属南通第三医院因STEMI入院并接受冠状动脉造影的166例患者为研究对象,收集患者的一般资料、病史、超声心动图和实验室数据。对患者随访12个月,记录主要不良心血管事件(MACE)发生情况。采用Cox比例风险模型评估血清BAFF水平对MACE的预测价值;绘制血清BAFF水平预测MACE的受试者工作特征(ROC)曲线,并计算曲线下面积(AUC)。通过ROC曲线确定血清BAFF水平的最佳截断值,依照最佳截断值进行分组,采用Log-rank检验绘制Kaplan-Meier曲线以分析MACE发生情况。结果 166例患者中,26例患者在随访12个月内出现MACE, MACE发生率为15.7%。MACE组患者年龄、甘油三酯、低密度脂蛋白、心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶、血清BAFF水平高于非MACE组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险模型结果显示,年龄与MACE发生率呈显著正相关(HR=1.267, 95%CI:1.126~1.426,P<0.001),血清BAFF水平与MACE发生率呈显著正相关(HR=1.020, 95%CI:1.003~1.038,P=0.024)。血清BAFF水平预测MACE发生率的敏感度为76.2%,特异度为82.9%。ROC曲线分析显示血清BAFF水平的最佳截断值为1.07 ng/mL,据此将患者分为血清BAFF水平>1.07 ng/mL组和血清BAFF水平≤1.07 ng/mL组,结果显示血清BAFF水平≤1.07 ng/mL组患者累积生存率高于血清BAFF水平>1.07 ng/mL组患者,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 血清BAFF水平升高与STEMI患者MACE发生率增高呈显著正相关,血清BAFF水平能够作为STEMI患者心血管事件的预测因子。

全悬浮培养ST细胞增殖猪瘟兔化弱毒株的工艺研究

本试验利用生物反应器对ST细胞全悬浮培养参数以及猪瘟病毒的繁殖工艺进行探索。从培养基、细胞接种浓度、病毒接毒量三个方面进行工艺优化,放大培养,建立了猪瘟病毒的全悬浮培养工艺。结果表明:当细胞接种浓度为1.0×10^(6)/mL、病毒接毒MOI为0.05、采用培养基1进行培养时,病毒含量达到10^(7.5)FAID_(50)/mL,工艺验证两次,结果都符合要求,稳定可靠,为猪瘟疫苗大规模全悬浮培养奠定了基础。

超声心动图联合sST2、sTREM-1在急性ST段抬高型心肌梗死诊断中的临床价值

目的研究超声心动图指标联合血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)在急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)诊断中的临床价值。方法选取2021年9月至2022年9月在河北省沧州中西医结合医院治疗的90例急性STEMI患者作为STEMI组,选取同期冠状动脉造影检查结果为阴性的90例胸痛患者为对照组,比较两组超声心动图指标左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)和血清sST2、sTREM-1水平;采用Pearson相关分析急性STEMI患者LVEF、LVEDD与血清sST2、sTREM-1水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、sTREM-1、LVEF、LVEDD诊断急性STEMI的价值。采用多因素Logistic回归分析急性STEMI发生的影响因素。结果STEMI组LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。STEMI组CK-MB、cTnI水平及心率、心绞痛史比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,急性STEMI患者LVEF与血清sST2、sTREM-1水平均呈负相关(r=-0.454、-0.463,P<0.05),LVEDD与血清sST2、sTREM-1水平均呈正相关(r=0.493、0.515,P<0.05)。LVEF、LVEDD及血清sST2、sTREM-1联合诊断急性STEMI的曲线下面积(AUC)为0.930,明显大于各项指标单独检测的AUC(Z=4.780、5.611、3.591、3.087,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,sST2≥24.91 ng/mL、sTREM-1≥36.65 pg/mL是急性STEMI发生的危险因素(P<0.05)。结论血清sST2、sTREM-1联合超声心动图对急性STEMI患者的诊断效能较好。

STEMI患者行急诊PCI和肢体远隔缺血适应后血清SDF-1α变化及其与心室重构的关系

目的 探讨急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者行急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)和肢体远隔缺血适应(RIC)后血清基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)变化及其与心室重构的关系。方法 回顾性选取2020年1月至2022年7月在南京市高淳人民医院行急诊PCI的70例STEMI患者为研究对象,其中行PCI+RIC(RIC组)37例,仅行PCI(对照组)33例;比较两组患者手术前后血清SDF-1α浓度、术后3 d及1年心功能指标[包括左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)]及校正心肌梗死溶栓试验帧数(CTFC);采用Pearson相关分析术后即刻血清SDF-1α浓度与术后1年心功能指标的相关性。结果 两组患者术后血清SDF-1α浓度均较术前明显增加,且RIC组高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RIC组CTFC明显低于对照组(P=0.005)。RIC组术后3 d的LVEF高于对照组(P=0.038),但术后3 d的LVEDd、LVEDV、LVESV及术后1年LVEF、LVEDd、LVEDV、LVESV比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。术后即刻血清SDF-1α浓度与术后1年LVEDd、LVEDV、LVESV均呈负相关(r=-0.338、-0.296、-0.314,均P<0.05)。结论 STEMI患者行PCI和RIC后血清SDF-1α浓度明显升高,且与心室重构改善有关。

猪传染性胃肠炎病毒在ST细胞中增殖规律的研究

通过孔板培养系统以及微载体和转瓶培养系统,研究了感染复数(MOI)、病毒感染时间(TOI)和病毒维持液对细胞生长和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)繁殖的影响。结果表明,MOI影响细胞生长速率和单位细胞病毒产量,TOI影响细胞对病毒的敏感程度以及胞内病毒的增殖速率;丰富的维生素、氨基酸等物质有利于病毒效价的提高;采用微载体和生物反应器系统生产TGEV,病毒效价可达11.3lgTCID50/0.2mL,比方瓶培养系统提高约100倍。

蛇床子和补骨脂含药血清对乳腺癌高转移细胞MDA-MB-231BO与骨髓基质细胞ST2的影响

目的:探讨不同比例蛇床子和补骨脂配伍对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231BO及骨髓基质细胞株ST2的影响。方法:36只雌性SD大鼠按蛇床子和补骨脂用药比例随机分为4:0组、3:1组、1:1组、1:3组、0:4组和空白组。灌胃4d制备中药血清。用各药物血清培养MDA-MB-231BO细胞及ST2细胞后,甲基噻唑基四唑法检测MDA-MB-231BO细胞和ST2细胞的抑制率,细胞迁徙实验检测MDA-MB-231BO细胞迁徙能力,磷酸对硝基苯酯法检测ST2细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,矿化结节形态计量法检测ST2细胞成骨能力。结果:与空白血清比较,各配伍比例蛇床子和补骨脂含药血清均能抑制MDA-MB-231BO细胞的迁移,其中1:1蛇床子和补骨脂配伍药物血清对MDA-MB-231BO细胞的抑制迁徙能力显著(P<0.01)。与空白组比较,蛇床子和补骨脂1:1配伍组ST2细胞ALP活性增强(P<0.05),ST2细胞矿化结节形成数量增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:蛇床子和补骨脂含药血清能够抑制MDA-MB-231BO细胞增殖和转移,增强ST2细胞活性。

血清IL-17、Endocan及Nesfatin-1对ST段抬高型心肌梗死患者PCI术后无复流的预测价值

目的探讨血清白细胞介素17(IL-17)、内皮细胞特异性分子1(Endocan)及摄食抑制因子1(Nesfatin-1)在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后无复流中的预测价值。方法选择2020年1月至2022年1月于武汉市武昌医院心内科治疗的150例STEMI患者进行研究,以PCI术后无复流作为无复流组(n=46),以正常完全灌注患者为对照组(n=104),分析STEMI患者PCI术后无复流的危险因素,检测血清IL-17、Endocan及Nesfatin-1的含量,分析IL-17、Endocan及Nesfatin-1的预测价值。结果单因素分析,两组患者在性别、吸烟、年龄、心率、高血压、糖尿病、高血脂、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血小板计数(PLT)、白细胞计数(WBC)、纤维蛋白原(FIB)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、药物支架、前降支闭塞比较差异无统计学意义(P>0.05);两组左心室射血分数(LVEF)、冠心病史、中性粒细胞/淋巴细胞、C反应蛋白(CRP)、肌钙蛋白T(cTnT)、发病至再灌注时间、病变长度、IL-17、Endocan及Nesfatin-1水平比较差异显著(P<0.05);两组患者总缺血时间、术前TIMI分级、支架平均直径、支架平均长度、病变血管数目及支架支数比较,差异无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic回归分析显示,LVEF、冠心病史、中性粒细胞/淋巴细胞、CRP、cTnT、发病至再灌注时间、病变长度、IL-17、Endocan及Nesfatin-1水平均是导致STEMI患者PCI术后无复流的危险因素(P<0.05);ROC结果显示,IL-17预测STEMI患者PCI术后无复流的AUC为0.818,灵敏度为86.70%,特异度为91.20%,Endocan预测STEMI患者PCI术后无复流的AUC为0.978,灵敏度为89.60%,特异度为91.40%,Nesfatin-1预测STEMI患者PCI术后无复流的AUC为0.963,灵敏度为90.70%,特异度为91.00%。结论血清IL-17、Endocan及Nesfatin-1在STEMI患者PCI术后无复流患者中均表达异常,与患者年龄LVEF、冠心病史、中性粒细胞/淋巴细胞、CRP、cTnT、发病至再灌注时间、病变长度有关,是PCI术后无复流的独立危险因素,IL-17、Endocan及Nesfatin-1可早期预测PCI术后无复流的发生。

ST悬浮细胞培养猪伪狂犬病病毒工艺参数的优化

为优化ST悬浮细胞培养条件及其生产猪伪狂犬病病毒的工艺参数,对影响ST悬浮细胞生长的接种细胞初始密度、培养时间和摇瓶转速等工艺参数进行优化比较,对影响猪伪狂犬病病毒增殖的接种细胞初始密度、感染量和培养时间等条件进行优化。结果显示:接种细胞初始密度1.00×10^(6)cells/mL、摇瓶转速140 r/min、悬浮培养48 h时,细胞数量扩增了4倍且细胞活力高;猪伪狂犬病病毒接种时初始细胞密度2.00×10^(6)cells/mL、感染量MOI=1.0、培养60~72 h,毒价可达10^(9.00)TCID_(50)/mL。结果表明,优化后的培养工艺适用于摇瓶中ST悬浮细胞及猪伪狂犬病病毒的培养。本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高猪伪狂犬病病毒繁殖能力提供了试验依据。

同工酶分析法鉴定ST细胞系的研究

为鉴定ST细胞系的种属和纯净性,选用乳酸脱氢酶(LD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和核苷酸磷酸脱氢酶(NP)三种同工酶对ST细胞系进行了同工酶鉴定分析。结果显示:ST细胞系与猪睾丸原代细胞的三种同工酶谱带一致,不存在别的杂带,表明该ST细胞系与猪睾丸原代细胞同种,且不存在其他细胞的交叉污染。本研究可为其他动物源细胞的种属鉴定和交叉污染检测提供借鉴。

ST细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进ST细胞系,扩大培养后液氮冻存建立了种子细胞库和工作细胞库;细胞复苏后对细胞的活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、病毒、支原体检测均为阴性;染色体为19对;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库,可为开展ST细胞及猪瘟疫苗的研究提供基础理论依据和细胞资源。

ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×108 CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000bp,平均大小约为500bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。

嗜酸乳杆菌胞外多糖对TGEV感染ST细胞分泌IFN-γ IL-6 IL-8的影响

为研究抗病毒嗜酸乳杆菌菌株的细胞机制,利用嗜酸乳杆菌胞外多糖(EPS)作用于猪睾丸细胞(ST),以MTT法检测其是否抑制猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染,并观察IFN-γ、IL-6、IL-8的mRNA表达水平。本试验分为4组,分别是正常细胞对照组(Control组)、TGEV感染组(TGEV组)、EPS预处理感染TGEV组(EPS+TGEV)组和胞外多糖组(EPS组),在2、4、6、12、24 h时采集细胞样品,通过荧光定量PCR方法检测不同时间点各组细胞中IFN-γ、IL-6、IL-8mRNA的表达量。结果发现,EPS具有抑制TGEV感染ST细胞的效应;EPS组、TGEV组和EPS+TGEV组IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达量较Control组比都相对增加,三种细胞因子随着时间的延长,均呈现出先快速增加后减少回归到正常水平的趋势。EPS+TGEV组在感染2 h时IL-8 mRNA表达量达到最大值,4 h时IL-6、IFN-γmRNA表达量达到最大值,且均出现了叠加效应,相比正常细胞对照组差异极显著(P<0.001)。结果表明,EPS对TGEV感染ST细胞有一定的抑制作用,提高了抗TGEV感染初期IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达水平。

ST细胞的鉴定及种子细胞库的建立

为确保疫苗生产的的安全性,对不同代次的ST细胞进行鉴定。从中国兽医药品监察所引进第40代的ST细胞,传至80代,每个代次各冻存3瓶于液氮中。细胞复苏后,对细胞的特征、纯净度、核型、致瘤性及对细胞的毒性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈现梭状上皮细胞,生长状态良好,细胞的生长速度基本一致;细菌、霉菌、支原体、外源病毒的检测均为阴性;染色体数目为19对且核型相同;无致瘤性;对豚鼠和兔子无毒性;病毒在ST细胞系中稳定地繁殖,TCID50≥107.00,HI≥1∶32。建立ST细胞的种子细胞库,为开展猪细小病毒疫苗的生产提供安全保障,也为猪伪狂犬病疫苗及猪细小病毒弱毒苗的研究提供基础理论依据。

ST贴壁细胞悬浮驯化及应用

为将ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在ST-S细胞无血清培养基中悬浮生长且能稳定传代,在摇瓶中实现高密度生长,并应用于猪伪狂犬病毒(PRV)悬浮培养,经ST-A低血清培养基适应培养,对一株贴壁的ST细胞进行了无血清的全悬浮驯化,并将PRV在悬浮细胞中连续盲传培养。结果显示:ST悬浮细胞能在无血清培养基中传代,培养48 h至第3代后,所能达到的最终细胞密度为3.00×10^(6 )cells/mL以上;PRV连续培养至第5代,毒价可达到109.0 TCID50/mL。结果表明,用专用培养基可使ST贴壁细胞实现悬浮驯化,并可应用于PRV悬浮培养。本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高PRV增殖效率奠定了技术基础。

猪瘟病毒弱毒C株ST细胞传代疫苗对仔猪的免疫效果

将猪瘟病毒弱毒C株ST细胞苗以不同剂量(106 TCID50和105 TCID50)免疫28日龄仔猪,通过临床症状观察、病理剖检和组织病理学观察、抗体检测、特异性淋巴细胞增殖试验及抗原检测等方法评价疫苗免疫效果。结果表明:该疫苗接种仔猪后无任何临床症状,无病毒血症,无排毒现象;不同剂量免疫组,在2免后10 d左右猪瘟特异性抗体阳转,抗体水平于2免后20 d左右达到峰值。以上结果表明,猪瘟弱毒疫苗毒株C株的ST细胞传代疫苗对仔猪安全有效。

猪细小病毒M2株在ST细胞中培养条件优化

为探索猪细小病毒M2株在ST细胞中培养的适宜条件，将其分别以同步接毒法和单层接毒法接种于ST细胞，比较其接种效果，选择更有效的方法，再对其培养条件（细胞浓度、血清种类、血清含量和收毒时间等）进行优化。结果表明，同步接种法相对于单层接种法更具优势。同步接毒，采用含量为5%的胎牛血清或6%的新生牛血清培养，细胞浓度控制在3.2×104～1.5×105个/mL内，在病毒接种后，80%以上细胞出现细胞病变时收获病毒，能获得较高病毒含量的病毒液。本研究结果为制备高效价的PPV- M2株病毒抗原提供了数据资料。

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。

白细胞计数与急性非ST段抬高型心肌梗死患者预后相关关系的研究

目的探索白细胞计数对急性非ST段抬高型心肌梗死（non-ST-segment elevation myocardial infarction,NSTEMI）患者预后的预测价值。方法回顾分析了198例急性NSTEMI患者的随访资料。入院时即刻检测血白细胞计数。研究的主要终点是死亡、再发心肌梗死、再次血运重建和脑卒中。使用多因素回归分析影响预后的因素。结果 2组患者基线资料除入院时心率和肌酸激酶同工酶外差异均无统计学意义,白细胞计数〉11.0×10^9/L组住院期间和出院后6个月主要不良心脑血管事件发生率明显高于白细胞计数≤11.0×10^9/L组（25.5%vs 10.4%,P=0.006;18.4%vs 5.2%,P=0.004）,Logistics多因素回归分析显示白细胞计数〉11.0×10~9/L是住院期间主要不良心脑血管事件的独立危险因素（OR=2.942,95%CI：1.333~6.495,P=0.008）,Cox多因素回归分析显示白细胞计数〉11.0×10~9/L是出院后6个月主要不良心脑血管事件的独立危险因素（RR=3.767,95%CI：1.406~10.089,P=0.008）。结论白细胞计数升高是急性NSTEMI患者心脑血管事件发生的独立危险因素。