ST3GAL5通过激活PPAR和抑制PI3K/AKT途径抑制膀胱癌的恶性生物学行为

目的研究ST3β-半乳糖苷α-2,3-半乳糖基转移酶5(ST3GAL5)对膀胱尿路上皮癌(BLCA)生物学行为的影响和潜在机制。方法利用生物信息分析确定与膀胱癌相关的差异表达基因。然后筛选出合适的膀胱癌细胞系。体外实验通过细胞计数盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、菌落形成实验、转孔迁移、流式细胞仪凋亡实验和划痕实验评估ST3GAL5对膀胱癌生物行为的影响。使用癌症基因组图谱(TCGA)数据库对ST3GAL5基因进行了京都基因和基因组百科全书(KEGG)、基因集富集分析(GSEA)。最后,使用Western-blot技术验证其增殖和转移的相关通路。结果生物信息学分析和实验测量的结合表明,ST3GAL5的表达在人类的BLCA细胞系中是异常下调的。通过癌症细胞系百科全书(CCLE)数据库,成功筛选出HT-1376细胞系进行体外实验。实验结果发现上调ST3GAL5后膀胱癌的恶性生物学行为被抑制。GSEA富集分析显示,ST3GAL5及其共表达的基因通过激活PPAR途径和抑制PI3K/AKT途径抑制了膀胱癌的细胞增殖、侵袭和转移。Western-blot实验结果验证了ST3GAL5在膀胱癌中过表达后,PPAR信号通路的关键蛋白出现了明显的增加,PI3K/AKT信号通路的关键蛋白出现了明显的减少(P<0.05)。结论ST3GAL5基因可能作为膀胱癌的致癌抑制基因,可能通过激活PPAR信号通路和抑制PI3K/AKT信号通路的相关分子来抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭和转移。

川西北地区ST3井泥盆系油气地球化学特征及来源

对比ST3井泥盆系油气与相关源岩地球化学特征,结合地质研究,明确泥盆系油气来源。结果表明:ST3井泥盆系观雾山组沥青饱和烃分布呈现双峰特征,Pr/Ph=0.56;三环萜烷分布以C23为主峰,五环三萜烷以C30藿烷为主峰,Ts/Tm=0.82,C31~C35升藿烷系列分布齐全且近于呈正常降序分布,伽马蜡烷丰度高;孕甾烷和升孕甾烷含量丰富,规则甾烷中以C27甾烷占优势;ST3井泥盆系两份天然气都是干气,以烃类为主,甲烷含量高,体积分数分别为94.42%、96.96%,C2H6、C3H8含量低,干燥系数大,非烃气体含量低,H2S含量仅为0.01~0.022g/cm^3;甲乙烷碳同位素均值分别为-31.9‰、-28.5‰,乙烷碳同位素相对较轻,甲乙烷呈正碳同位素分布序列;甲烷氢同位素为-139‰、-138‰;对比综合显示ST3井泥盆系油气主要来源于筇竹寺组泥岩,同时下二叠统泥灰岩是重要补充。

家蚕糖转运蛋白基因BmST3的克隆及序列分析与表达研究

糖转运蛋白在家蚕体内糖类化合物的转运与代谢过程中发挥重要作用。在电子克隆的基础上,通过RT-PCR方法克隆了家蚕糖转运蛋白基因BmST3(GenBank登录号:GQ871756)。生物信息学分析结果显示,该基因位于家蚕27号染色体,开放阅读框(ORF)长1434bp,编码477个氨基酸,预测蛋白有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的跨膜结构域,与埃及伊蚊、致倦库蚊、冈比亚按蚊、赤拟谷盗登录号分别为EAT47626、EDS35465、EAA11457、EFA05337的同源蛋白相似性均在60%以上。RT-PCR检测和基因芯片信号值分析结果显示,BmST3基因的表达具有组织特异性,在家蚕5龄第3天幼虫的9种组织中,主要在马氏管中大量表达,推测其可能在马氏管细胞膜内外物质的跨膜转运中发挥作用。

SPF鸡胚St3galⅠ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3galⅠ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3galⅠ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3galⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在G418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3galⅠ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3galⅠ基因成功的插入到pCI-neo质粒,从而实现真核表达载体pCI-neo-St3galⅠ的构建。在G418选择压力下,初步获得了稳转目的基因的MDCK细胞系。将抗性细胞混合克隆进行稀释,经选择后挑选出30个单克隆抗性细胞株。分别以转染细胞基因组DNA和总RNA为模板,经PCR检测显示,目的基因已整合入MDCK细胞的基因组中并可稳定的进行表达。

siat7e基因和st3gal Ⅰ基因双表达载体的构建及其初步应用

应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从人类基因组中扩增出全长为1011 bp的唾液酸转移酶(siat7e基因),并从鸡基因组中扩增出全长为1029 bp的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GAL Ⅰ)基因。将它们分别克隆入pMD18-T载体中。对扩增的全长siat7e基因序列采用BamH Ⅰ和PstⅠ双酶切后连接入pReceiver真核表达载体,构建pRE-SⅠAT重组表达载体,进而,对扩增的全长st3gal Ⅰ基因采用Sac Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,后连接入pRE-SIAT重组表达载体,构建pRE-SIAT-ST3重组真核表达载体。经限制性内切酶消化及DNA序列分析,证实构建的重组表达质粒是正确的。将构建的双基因表达载体转染MDCK细胞,利用荧光显微镜观察,可见细胞表达明显的绿色荧光,从而初步证实了外源基因在MDCK细胞中的正确表达。本研究为最终构建能够适应悬浮培养,并且对禽流感病毒更为易感的MDCK细胞系奠定了基础。

ST3Gal Ⅲ沉默通过FAK通路抑制乳腺癌细胞侵袭

目的探讨ST3Gal Ⅲ沉默抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的分子机制。方法利用本室建立的稳定沉默ST3Gal Ⅲ基因的乳腺癌细胞(ST3Gal Ⅲ基因的2个靶向序列分别记作shRNA-2,shRNA-4)、人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞未转染组(M组),转染慢病毒对照组pGLV3-H1-GFP(P组),采用western blot检测侵袭相关分子整合素α3、基质金属蛋酶(matrix Mmetalloproteinase,MMP)-2、MMP-9黏着斑蛋白激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)蛋白的表达。结果与M组、P组相比,shRNA细胞侵袭相关分子整合素α3蛋白表达明显下调,MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低,p-FAK蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ST3Gal Ⅲ沉默可能通过FAK通路下调黏附侵袭相关分子整合素α3、基质金属蛋白MMP-2、-9表达从而抑制乳腺癌细胞侵袭。

应用唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中的表达

目的:通过唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达差异。方法:制备唾液酸糖基转移酶基因芯片,应用基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达,并通过蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平。结果:唾液酸糖基转移酶ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中表达降低。结论:ST3GalⅤ在肝癌细胞系中表达水平的降低导致神经节苷脂GD1a的合成下降从而影响肝细胞的生长增殖。

羽扇豆醇增强对沉默ST3GalⅢ基因的MDA-MB-231细胞侵袭转移的抑制作用

目的探索羽扇豆醇(Lupeol)增强对沉默ST3GalⅢ基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的抑制作用。方法体外培养沉默ST3GalⅢ基因的MDA-MB-231细胞。采用细胞黏附实验,Transwell侵袭实验,细胞划痕实验检测羽扇豆醇对ST3GalⅢ沉默的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的作用。Western blotting检测各组细胞转移相关基质金属蛋白酶(MMP)-2、9和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子κB(PI3K/Akt/NF-κB)信号通路蛋白的表达情况。结果 ST3GalⅢ基因沉默及低浓度(5μmol/L)羽扇豆醇对MDA-MB-231细胞的增殖及凋亡无明显影响。羽扇豆醇对ST3GalⅢ沉默的MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭有明显的抑制作用,且相关蛋白MMP-2、-9和PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达均下调。结论羽扇豆醇体外能增强对沉默ST3GalⅢ基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和转移的抑制作用,其机制可能与抑制MMP-2、-9的蛋白表达及影响了PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

miR-26a抑制ST3GAL6基因介导mTOR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:探究miR-26a靶向调控ST3GAL6基因介导mT OR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法:构建肺癌小鼠模型,将小鼠分为正常组和模型组;免疫组化检测ST3GAL6在肺组织中的表达情况,qRT-PCR法检测miR-26a在组织中的表达;细胞分为空白组、阴性对照组、miR-26a mimic组、miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组、miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组和miR-26a mimic+RAD001(mT OR抑制剂)组;qRT-PCR法检测细胞中miR-26a和ST3GAL6 mRNA的表达情况;MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况;Western blot法测定各组细胞ST3GAL6、p-mT OR、Akt蛋白相对表达量。结果:miR-26a和ST3GAL6在肺癌小鼠肺癌组织中均高表达(均P <0. 05)。与空白组相比,miR-26a mimic组ST3GAL6 mRNA及蛋白表达上升,Akt、p-mT OR蛋白表达上升,细胞增殖率上升、凋亡率下降(均P <0. 05);而miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组ST3GAL6mRNA及蛋白表达下调,Akt、p-mT OR蛋白表达下降,细胞增殖率下降、凋亡率上升(均P <0. 05)。同时,miR-26a表达在miR-26a mimic组和miR-26a mimic+RAD001组中上升,miR-26a inhibitor组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组中下降(均P <0. 05)。结论:miR-26a下调ST3GAL6基因,抑制mT OR信号通路活化,抑制肺癌细胞增殖及促进细胞的凋亡。

唾液酸糖基转移酶ST3GAL5抑制白血病NB4细胞株的化疗多药耐药性

目的:通过研究ST3β-半乳糖苷α-2,3唾液酸转移酶5(ST3β-galactosideα-2,3-sialyltransferase 5,ST3GAL5)在人急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)NB4及其耐药细胞株NB4/ADR的差异表达,明确ST3GAL5对白血病细胞体内及体外药敏性的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blotting技术检测人AML细胞株ST3GAL5的表达情况。特异性调控ST3GAL5,MTT及小鼠移植瘤模型实验检测干扰前后NB4和NB4/ADR细胞在体内、外对化疗药物敏感性的变化、PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果:ST3GAL5在亲本细胞株NB4中高表达,在耐药细胞株NB4/ADR中低表达;特异性上调NB4/ADR细胞中ST3GAL5的表达,该细胞的药物敏感性增强(P<0.05),PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达降低(P<0.05);特异性下调NB4细胞中ST3GAL5的表达,该细胞的药物敏感性减弱,PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达升高。结论:ST3GAL5在人AML细胞及其耐药细胞株中表达均有显著差异,这些特征性改变与人AML多药耐药有关;AML多药耐药性可能是通过ST3GAL5介导PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达的改变实现。

稳定表达鸡ST3GALⅠ基因BHK-21细胞株的建立

筛选稳定表达鸡ST3GalⅠ基因的BHK-21细胞株,为进一步研究禽流感病毒大规模细胞培养生产疫苗奠定基础。克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒pcDNA3.1-EGFP中构建重组质粒pcDNA3.1-EGFP-ST3GaⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染BHK-21细胞后,ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达,经G418抗性和RT-PCR筛选鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将H9亚型禽流感病毒和H5N1Re-5禽流感病毒按不同比例接种BHK-21-ST3GalⅠ细胞和空白BHK-21细胞,同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组以检测BHK-21-ST3GalⅠ细胞对H9亚型禽流感病毒和H5N1Re-5禽流感病毒的增殖效果。接毒72h后收获细胞液,常规方法测定血凝素(HA)滴度。通过在BHK-21细胞中稳定表达ST3GalⅠ基因,提高BHK-21细胞表面SAα-2,3Gal受体丰度连续传6代后仍然能检测到其表达,荧光显微镜下能看到绿色荧光,RT-PCR可检出1 029bp的目的条带。结果显示,BHK-21-ST3GalⅠ细胞在接毒量为2%时HA滴度达到1∶256,显著高于空白BHK-21细胞组,表明其更适于流感病毒的增殖,具备生产流感病毒疫苗的潜力。

浅析ST3-D型液压站工作原理

文章介绍了ST3-D型液压站，并对其工作原理和制动方式进行了论述。

ST3GAL5在膀胱尿路上皮癌中表达水平、预后分析及作用机制的研究

目的通过TCGA、GEO、Oncomine等公开数据库探讨ST3GAL5在膀胱尿路上皮癌患者中的表达水平、预后特征以及作用机制。方法收集TCGA、GEO、Oncomine数据库中关于ST3GAL5在膀胱尿路上皮癌中的表达谱,使用R语言分别研究ST3GAL5在膀胱尿路上皮癌与正常膀胱、肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌以及高级别膀胱尿路上皮癌与低级别膀胱尿路上皮癌中的表达水平,绘制Kaplan-Meier曲线以评估ST3GAL5表达与总体生存率和复发的关系,并对ST3GAL5在膀胱尿路上皮癌中的信号通路作基因集富集分析。结果与正常膀胱组织比较,ST3GAL5在膀胱癌中表达下调,在肌层浸润性膀胱癌及高级别膀胱癌中ST3GAL5表达均显著下调。生存分析提示,在总体生存率及无复发生存率方面,ST3GAL5低表达比高表达均具更高的风险。结论ST3GAL5可能是膀胱癌的抑癌基因,ST3GAL5高表达可能抑制膀胱癌向肌层侵犯和高级别进展,因此,有可能成为肿瘤治疗的分子靶点。

ST3-D型液压站在矿井提升制动系统中的应用

矿井提升是矿井生产过程中的一个重要环节,制动系统是提升过程中安全的保障。通过对杏山铁矿主井提升采用的西马格公司生产的液压盘式制动系统的研究,详细介绍了该制动系统的工作原理,对ST3-D型液压站及其主要阀的工作流程进行了深入的分析。

共表达siat7e和st3galⅠ基因MDCK细胞株的建立

为建立易悬浮驯化和对流感病毒易感的MDCK细胞株,将表达siat7e和st3galⅠ基因的真核表达载体电击转染MDCK细胞,采用有限稀释法、荧光定量PCR和流式细胞术成功筛选到1株双基因共表达MDCK-C5细胞株,且传至12代后仍表达稳定,为流感疫苗工业化大规模生产奠定了基础。

ST3GAL4对MDA-MB-231增殖及c-met通路的影响探究

目的 探讨唾液酸转移酶ST3GAL4对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和c-met通路的影响。方法 分别设计3段针对ST3GAL4编码区的siRNA,通过RT-PCR和Western blot两种方法分别对其mRNA水平和蛋白水平进行检测;接着通过敲减ST3GAL4观察MDA-MB-231平板克隆形成能力和c-met磷酸化水平。结果 向胞内转染siRNA 之后40小时,ST3GAL4的mRNA 水平和蛋白质水平较对照组(siNC)均有降低;相较于对照组,敲减组(si ST3GAL4) MDA-MB-231克隆形成能力明显减弱(p<0.05),c-met通路活化受到抑制。 结论 ST3GAL4可能参与MDA-MB-231的增殖与关键信号通路c-met的激活。

液压失效保护盘式制动器ST3SH-A的研究

0引言 新型液压失效保护盘式制动器主要用于大中型起重机主起升机构低速轴紧急安全制动,也应用于大中型卷扬提升机和倾斜式皮带运输机驱动机构、缆车和缆索起重机驱动机构以及筑路桥梁施工机械的驱动机构,作为工作制动器或紧急安全制动器。本产品采用全自动移位机构、软连接制动块、双作用碟簧缸,其具有创新性。

亚洲上空将出现ABS1A及ST3卫星

亚洲地区上空近期及2012年将先后出现两颗"新"通信卫星,一颗是由亚洲广播卫星有限公司(ABS)购自韩国电信公司(KT)

主井提升机ST3-F型液压制动系统的应用

钱家营煤矿主井提升机为4绳落地式摩擦轮提升机,滚筒直径为4.5 m,提升载荷32t,最大静张力961kN,由两台功率为2 500 kW的直流电动机拖动,制动器为盘闸液压制动器。由于使用年限久,制动系统盘式制动器、S5电控装置及液压阀等老化严重,已严重危胁到了提升机的安全运行,因此在2013年对原制动系统进行了改造,从德国西马格公司引进了一套ST3-D型新型盘闸式液压制动系统及配套的电气制动控制系统。

ST3型高速环锭锭带

为了适应环锭高速,联邦德国Siegling公司开发了一种“Extremultus”ST3型锭带.这种锭带为一种高强混合织物的拉伸材料,在其与传动滚筒接触的一面涂有氨基甲酸乙酯涂层以增加摩擦力,与锭盘接触的一面没有涂层.据测定,用这种锭带后,高速环锭细纱机可比用普遍锭带的动力消耗降低20%.使用这种锭带时,仍采用四个锭子由一根锭带传动的方式,但当其中一个锭子停止转动时,对其他锭子的速度没有影响.