LAIR-1通过阻断JAK2 V617F突变的人HEL细胞JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制其增殖并促进其凋亡

目的研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)对Janus激酶2(JAK2)V617F突变的人急性髓系白血病HEL细胞JAK/信号转导子与转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的调节作用,以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用反转录PCR和基因测序鉴定JAK2 V617F突变;应用免疫共沉淀和Western blot法鉴定LAIR-1募集的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)种类;采用CCK-8法检测HEL细胞的增殖;采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测HEL细胞的凋亡率;采用Western blot法检测JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白酪氨酸磷酸化水平及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果在JAK2 V617F突变的HEL细胞中,LAIR-1与其配体胶原蛋白结合后可募集含Src同源域2磷酸酶2(SHP-2);LAIR-1可以下调HEL细胞JAK2、STAT1、STAT3、STAT5、AKT和mTOR的蛋白酪氨酸磷酸化水平,并能够显著抑制cyclin D1和Bcl2的表达,而对BAX的表达水平未见显著影响;LAIR-1能够明显抑制HEL细胞的增殖,促进HEL细胞凋亡。结论在JAK2 V617F突变的人白血病HEL细胞中,LAIR-1可通过募集SHP-2抑制JAK/STAT和PI3K/AKT/mTOR信号通路的活化,进而抑制HEL细胞的增殖,促进细胞凋亡。

基于SOCS1\3\JAK-STATS信号通路探讨软坚消瘿颗粒治疗肝郁脾虚型桥本甲状腺炎模型大鼠的实验研究

目的探究软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)大鼠甲状腺组织SOCS1\3\JAK-STATS信号通路表达的影响。方法SD大鼠40只,随机取10只作为正常对照组,剩余大鼠采用高碘饮水与皮下注射甲状腺球蛋白联合方案建立桥本甲状腺炎大鼠模型,通过慢性束缚应激、过度疲劳、饮食失节复合方法建立肝郁脾虚大鼠模型。模型复制成功后,随机分为模型对照组(n=10)、雷公藤多苷片组(n=10)以及软坚消瘿颗粒组(n=10)。正常对照组给予常规饲养,模型对照组予以蒸馏水2 mL,雷公藤多苷片组给予雷公藤多苷片9.45 mg/kg,软坚消瘿颗粒组给予软坚消瘿颗粒16.17 g/kg,各组干预时间为8周。干预结束后比较各组大鼠一般情况、HE染色情况、甲状腺功能指标、SOCS1\3\JAK-STATS相关蛋白表达情况。结果实验过程中无大鼠死亡,与模型组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平较低,TSH水平较高(P<0.05);与雷公藤多苷片组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平较低(P<0.05),TSH水平较高(P<0.05)。与模型组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠SOCS1、SOCS2、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达水平较高(P<0.05);与雷公藤多苷片组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠SOCS1、SOCS2、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达水平较高(P<0.05)。结论软坚消瘿颗粒能够有效改善肝郁脾虚型HT大鼠的甲状腺功能,提高组织SOCS1、SOCS3表达水平,抑制炎性物质传导,推测与JAK-STST信号通路异常激活有关。

黄芩多糖通过调节JAK 2/STAT 3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善DSS诱导的UC模型小鼠的炎症

【目的】研究黄芩多糖对溃疡性结肠炎小鼠(UC)肠道炎症的影响及其机制。【方法】选用C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组以及黄芩多糖低、中、高剂量组(10只/组)。观察小鼠日常状态并记录疾病活动指数(DAI)评分。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中细胞因子白细胞介素-6、17、23(IL-6、IL-17、IL-23)的表达。处死小鼠,HE观察小鼠肠黏膜损伤情况记录结肠组织损伤指数(TDI)评分,Western blot法和免疫组化法检测Janus激酶2(JAK2)、信号转导因子和转录激活因子(STAT3)、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平。【结果】与空白组相比,模型组小鼠DAI评分升高,血清中IL-6、IL-17、IL-23含量升高,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,p-JAK2、p-STAT3表达量升高。与模型组相比,各给药组小鼠DAI评分降低;血清中IL-6、IL-17、IL-23含量降低,TDI评分降低,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低,p-JAK2、p-STAT3表达量降低。【结论】黄芩多糖可能通过JAK2/STAT3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善UC小鼠的炎症。

基于JAK/STAT-3通路探究右美托咪定对神经痛大鼠镇痛及星形胶质细胞活性的作用机制

目的基于Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)-3通路探究右美托咪定(Dex)对神经痛大鼠镇痛及星形胶质细胞活性的作用机制。方法将40只大鼠分为正常组、模型组、Dex组、Ket组,除正常组外,其余大鼠均建立坐骨神经结扎病理性疼痛模型,建模成功后,Dex组坐骨神经周围注射0.2 ml/kg Dex,Ket组腹腔注射10 mg/kg氯胺酮,模型组与正常组注射10 ml/kg生理盐水,分别对大鼠疼痛行为机械性缩足反射减值(MWT)、热缩腿潜伏期(TWL)进行测定,采用TUNEL检测脊髓背角星形胶质细胞凋亡,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠坐骨神经病理组织,Western印迹与PCR分别检测坐骨神经中JAK2、STAT3蛋白和mRNA表达,体外培养星形胶质细胞并检测活性,采用Dex、JAK2抑制剂、STAT-3抑制剂3组干预细胞,MTT检测其增殖活性。结果与正常组比较,模型组MWT、TWL疼痛表达显著降低(P<0.05),与模型组比较,Dex组MWT、TWL疼痛表达升高(P<0.05),与Dex组比较,Ket组MWT、TWL疼痛表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Dex组星形胶质细胞凋亡表达显著升高(P<0.05),与Dex组比较,Ket组星形胶质细胞凋亡表达显著降低(P<0.05)。正常组坐骨神经的神经纤维结构完整且均匀分布,排列整齐有序,外模和形态完整,髓鞘紧密围绕轴突结构明确;模型组出现髓鞘肿胀的现象,有部分神经鞘膜水中及轴突现象产生导致排列密集紊乱;Dex组神经纤维结构不清晰现象有所缓解,轴突逐渐清晰,水肿现象好转,外膜形态有所显现;Ket组仍有排列紊乱,髓鞘和轴突结构不清晰现象。与正常组比较,模型组坐骨神经中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,Dex组JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05);与Dex组比较,Ket组JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05)。干预24、48及72 h时,JAK2抑制剂组、STAT3抑制剂组星形胶质细胞增殖率均显著低于Dex组(P<0.05),JAK2抑制剂组与STAT3抑制剂组比较无显著差异(P>0.05)。结论Dex可提高神经痛大鼠痛阈值,促进星形胶质细胞凋亡改善病理损伤,研究机制可能与抑制JAK2、STAT3蛋白表达相关。

肥厚心肌细胞STAT-3与Beclin-1表达水平改变的研究

目的研究心肌细胞肥厚时STAT-3与Beclin-1表达水平改变的情况,探索STAT-3和Beclin-1表达异常在心肌肥厚的发生、发展中的意义。方法心肌肥大模型的建立:实验组用异丙肾上腺素(isoproternol,ISO)(10μmol/L)和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)(100μmol/L)分别干预H9c2心肌细胞48 h;对照组不加药,定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测MYH7基因的表达,细胞免疫荧光染色后,利用图像软件计算细胞大小。细胞实验验证:实验组用ISO(10μmol/L)与PE(100μmol/L)分别处理H9c2心肌细胞48 h;对照组不加药,定量PCR检测STAT-3与Beclin-1的基因表达水平,Western blot检测STAT-3与Beclin-1的蛋白表达水平。结果经ISO与PE处理的H9c2心肌细胞的MYH7基因表达水平升高(P<0.005),细胞表面积增大(P<0.001)。ISO干预组STAT-3、Beclin-1的基因表达水平及蛋白水平均比对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。PE干预组的STAT-3、Beclin-1的基因表达水平及蛋白表达水平均比对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论本实验发现经ISO或PE处理所致的肥厚心肌细胞中,STAT-3与Beclin-1的基因表达和蛋白表达水平显著升高,提示STAT-3和Beclin-1的表达异常参与了心肌肥厚发生、发展,这一结果为寻找心肌肥厚治疗新靶点提供一定的线索。

欣力康提取物调控STAT3/NF-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨欣力康提取物调控信号转导和转录激活因子(STAT)3/核因子(NF)-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响。方法 体外培养膀胱癌细胞,设空白对照组和不同浓度的欣力康组。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测欣力康提取物对细胞增殖能力的影响,采用Transwell检测细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用Western印迹检测细胞侵袭、迁移相关蛋白的影响;采用荧光酶报告基因法检测欣力康提取物对信号通路活性抑制率的影响。结果 与对照组相比,不同浓度的欣力康提取物组对膀胱癌细胞均有明显增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组侵袭细胞数明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组细胞迁移率明显较低(P<0.05);与对照组相比,欣力康提取物作用细胞后,侵袭和迁移相关蛋白表达明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度的欣力康组STAT3/NF-κB信号通路活性抑制率明显较高(P<0.05)。结论 欣力康提取物可以通过抑制STAT3/NF-κB信号通路来抑制膀胱癌增殖和迁移。

补阳还五汤通过调控PI3K/Akt、JAK2/STAT3信号促进BMSC趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠神经元活性及认知功能的影响

目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健康大鼠53只,随机分为健康组(健康大鼠常规饲养)、损伤组(建立脊髓损伤模型)、干预组(补阳还五汤治疗)、对照组(甲泼尼龙治疗),每组12只,剩余5只大鼠用于补阳还五汤含药血清制备。流式细胞术鉴定BMSCs细胞。Transwell小室法测大鼠BMSCs迁移。高架十字迷宫和Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态。TUNEL测脊髓组织神经细胞凋亡。免疫组化检测p-JAK2、p-STAT3。Western印迹测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt。结果传代后的培养细胞呈旋窝状或放射状贴壁生长,细胞多呈星形、梭形或三角状,培养3代后,细胞贴壁加快、形态均一,呈旋窝状或单层放射状生长。培养细胞表面抗原CD29、CD90为阳性,CD31、CD45为阴性,提示其为BMSCs细胞。与健康组相比,损伤组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著降低,不同时间的潜伏期显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组与对照组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著升高,不同时间的潜伏期显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标对比无统计学差异(P>0.05)。健康组脊髓组织结构完整。损伤组脊髓组织疏松水肿,有细胞空泡变性产生。相较于损伤组,干预组与对照组大鼠脊髓组织病理形态有所改善。与健康组相比,损伤组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著降低,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著升高,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标水平无统计学差异(P>0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/Akt通路抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,促进BMSCs的迁移,减轻神经细胞的凋亡,起到神经保护的作用,从而改善脊髓损伤大鼠的认知功能。

STAT3-siRNA对胃癌细胞株SGC-7901增殖与凋亡的影响

目的:探讨siRNA沉默STAT3基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:用已构建pGCsi-lencerH1/STAT3siRNA重组质粒,转染胃癌细胞SGC-7901,采用Western blotting、RT-PCR技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对胃癌细胞的生长抑制作用;用流式细胞术和TUNEL法检测重组质粒诱导的胃癌细胞凋亡。结果:用pGCsilencerH1/STAT3-siRNA重组质粒转染人胃癌细胞,Western blotting及RT-PCR结果证实重组质粒在蛋白及mRNA水平分别显著地抑制STAT3基因表达,STAT3-siRNA抑制率分别为85.43%及80.75%,与对照组相比,有显著差异(P<0.01)。MTT和流式细胞术结果证明上述重组质粒可显著抑制胃癌细胞的生长(抑制率为63%)并诱导胃癌细胞凋亡。结论:pGCsilencerH1/STAT3-siRNA可抑制STAT3在胃癌细胞中表达,并抑制胃癌细胞生长,促进细胞凋亡。

ATRA联合IFN-α对PC-3细胞株的生长抑制作用以及对GRIM-19和STAT3基因表达的影响

目的:研究ATRA联合IFN-α对人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制作用及对凋亡相关基因GRIM-19和原癌基因STAT3表达的影响。方法:采用MTT比色法筛选ATRA和IFN-α联合应用的最佳时间和剂量;相差显微镜及吖啶橙染色观察其对PC-3细胞的促凋亡作用;DNA ladder提取试剂盒检测用药后细胞凋亡;RT-PCR方法观察用药后PC-3细胞GRIM-19 mRNA的表达;Western blot分别检测GRIM-19、STAT3的蛋白表达。结果:ATRA 1μmol/L联合IFN-α1 000 U/mL作用72 h对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,与溶媒对照组、ATRA或IFN-α单独应用组比较,差异显著(P<0.05)。形态学观察两药合用后PC-3细胞呈现典型的凋亡征象。DNA电泳图谱在ATRA和IFN-α两药合用组可见较AT-RA单独应用组更为明显的DNA ladder,IFN-α单独用药组及对照组没有出现DNA降解。RT-PCR结果表明,ATRA和IFN-α两药合用GRIM-19 mRNA表达增强,与对照组和ATRA、IFN-α组比较,差异显著(P<0.05)。Western blot结果显示,两药合用组GRIM-19蛋白表达增强,STAT3蛋白表达减弱,与对照组、ATRA、IFN-α组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:ATRA和IFN-α联合应用可抑制PC-3细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是通过上调GRIM-19基因表达,进而下调原癌基因STAT3表达实现的。

IL-6/STAT3活化在大鼠肝移植胆管上皮细胞增殖中的作用

目的探讨大鼠移植肝胆管上皮细胞(BEC)增殖过程中IL-6/STAT3信号通路活化的意义。方法在"两套袖法"基础上,以"支架法"建立肝动脉重建大鼠原位肝移植(OLT)模型,并随机分为CP1h、CP12h组(供肝在4℃UW液中分别冷保存1h、12h后行OLT)、雷帕霉素(RPM)组(CP12h组术后给予RPM),和对照(C)组。分别于术后1、3、7、14d,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织IL-6mRNA表达,激光扫描共聚焦显微镜(LSM)原位检测肝BEC内活化型STAT3(p-STAT3)的表达水平,并利用免疫组化法检测BEC增殖情况。结果CP1h组术后1d肝内IL-6mRNA表达升高(0.41±0.03),随后(3、7、14d分别为0.28±0.03、0.23±0.03、0.27±0.05)逐渐接近C组水平;BEC内STAT3的活化水平(94±8、61±6、39±4、34±3),及肝内BEC增殖率(分别为2.1%±0.3%、5.9%±0.5%、2.6%±0.5%、2.3%±0.5%)的变化也呈现相同趋势。与C组及CP1h组相比,CP12h组术后各时相点肝组织IL-6mRNA表达明显增加(分别为0.60±0.03,0.73±0.02,0.38±0.02,0.30±0.04);BEC内STAT3活化水平(167±17、247±13、110±9、74±8)和BEC增殖率(分别为7.0%±0.5%、27.8%±1.8%、23.1%±1.6%、17.8%±1.2%)亦明显升高,且IL-6mRNA表达水平与STAT3活化程度呈显著正相关(r=0.95,P<0.05)。RPM可明显降低CP12h组BEC内STAT3的活化水平(分别为88±7、106±4、84±5、40±4)和BEC增殖率(4.2%±0.5%、11.2%±1.2%、12.9%±1.3%、8.5%±0.6%)。结论严重的冷保存-再灌注损伤活化BEC内IL-6/STAT3信号通路,可能是调控移植肝BEC增殖的分子机制之一。

STAT-3与Enolase-1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中信号转导及转录活化因子3(STAT-3)和糖酵解酶烯醇化酶(Enolase-1)的表达与雌孕激素受体、淋巴结转移、临床分期、病理分级等的关系。方法免疫组织化学SP法检测126例乳腺癌和26例乳腺良性病变组织中STAT-3与Enolase-1的表达情况,并分析他们与临床病理参数之间的关系。结果乳腺癌组织中STAT-3和Enolase-1的阳性表达率分别为82.5%和77.8%,明显高于乳腺良性病变组织(11.5%和7.7%),差异均有统计学意义(χ2=42.416,P<0.05;χ2=57.211,P<0.05);在有淋巴结转移的乳腺癌组织中阳性表达率分别为85.7%和90.5%,高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(χ2=9.184,P<0.05;χ2=11.014,P<0.05)。相关分析表明STAT-3和Enolase-1的表达呈正相关。在雌激素受体阳性(ER+)和/或孕激素受体阳性(PR+)或表皮生长因子受体2阳性(HER-2+)乳腺癌组织中,有淋巴结转移组中STAT-3和Enolase-1的表达水平均明显高于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 STAT-3与Enolase-1的表达与乳腺癌的发生发展及侵袭转移相关,且二者有协同作用(r=0.379,P<0.05)。在ER+和(或)PR+或HER-2+乳腺癌组织中,STAT-3和Enolase-1的高表达与淋巴结转移相关。在高表达STAT-3的乳腺癌组织中Enolase-1表达也较高,其联合检测可作为判断乳腺癌恶性程度、评价预后及指导治疗的一项评估指标。

STAT-3持续活化与肿瘤侵袭、转移

JAK-STAT(janus tyrosine kinase-signal transducer and activator of transcription)细胞信号转导途径的紊乱,是肿瘤发生最重要的原因之一.近年来的研究发现,STAT-3作为JAK-STAT信号转导途径中一个重要的调节分子,能够通过将信号直接转导入细胞核而快速激活下游基因,从而保证相应配体顺利完成信号转导过程.然而,STAT-3也有其"黑暗"的一面,其往往在恶性肿瘤细胞中表现为持续活化,作为一种原癌基因,成为肿瘤治疗的新靶标.因而,对近年来有关STAT-3的持续活化与恶性肿瘤细胞的侵袭、转移过程及肿瘤干细胞的关系作一概述,有助于深入了解STAT-3在肿瘤发生发展机制中发挥的作用.

miRNA-31和STAT-3在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-31和STAT-3在舌鳞状细胞癌中的变化及相关性。方法:收集137例舌鳞状细胞癌患者组织标本,利用荧光原位杂交法检测miRNA-31在组织中的表达情况,利用SP免疫组化法检测STAT-3在组织中表达情况,分析miRNA-31和STAT-3在不同分化程度舌鳞癌组织中表达,利用Kaplan-meier法分析miRNA-31和STAT-3表达与生存期的关系。结果:miRNA-31在低分化、中分化和高分化组织中阳性表达率分别为(80.6±14.3)%、(58.5±15.7)%和(23.7±9.4)%,STAT-3分别为(85.9±12.7)%、(51.7±16.3)%和(17.6±9.1)%,差异均具有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,舌鳞癌组织中miRNA-31和STAT-3表达呈正相关(r=0.614,P<0.05);生存分析显示,miRNA-31高表达组患者中位生存期37个月,低表达组患者中位生存期65个月,STAT-3高表达组患者中位生存期38个月,低表达组患者中位生存期66个月,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论:miRNA-31和STAT-3舌鳞癌组织中表达与组织分化程度有关,且miRNA-31和STAT-3呈正相关,高表达可影响患者预后。

HO-1在缺血后处理抗肺缺血再灌注损伤中的作用及其对STAT-3表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)在缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)抗肺缺血再灌注损伤中的作用机制及其对STAT-3蛋白表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠(250-280 g)随机分为假手术组(S)、缺血再灌注组(IR)、缺血后处理组(IPO)及缺血后处理+HO-1抑制剂组(IPO+ZnPP)。称重法计算缺血肺组织干/湿比(W/D),试剂盒检测缺血肺组织MDA水平及MPO与HO-1活性,Western Blot检测HO-1,p-STAT-3蛋白表达水平。结果与S组比较,IR组大鼠W/D、MDA、MPO、HO-1活性及蛋白表达水平均显著增加,而p-STAT-3蛋白表达水平显著降低,IPO可以逆转上述变化,而HO-1特异性抑制剂可以消除IPO对上述指标的影响。结论 IPO可以通过促进HO-1活性及蛋白表达的增加从而激活STAT-3信号通路而发挥抗肺缺血再灌注损伤作用。

JAK2/STAT3信号通路在IL-6介导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的：研究Janus激酶（JAK2）和信号转导因子和转录活化因子（STAT3）途径的激活在IL-6介导人近端肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法：（1）细胞培养及分组：待生长状况良好的HK-2细胞株60%-80%细胞贴壁后,无血清培养基同步24 h,然后根据分组给予相应的刺激。（2）指标检测：采用荧光定量PCR技术检测0 h、24 h、48 h7、2 h不同时间点α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA的表达。采用Western blot方法检测25 ng/ml浓度的IL-6刺激24 h、48 h、72 h后α-SMA、E-cadherin蛋白的表达;检测0、5、10、25、50 ng/ml浓度的IL-6刺激30 min,以及IL-6（25 ng/ml）刺激0、15 min、30 min、60 min、120 min后P-STAT3蛋白的表达水平;检测AG490预处理细胞4 h,IL-6（25 ng/ml）分别刺激30 min后及48 h后P-STAT3、P-JAK2和α-SMA、E-cadherin蛋白的表达水平。结果：与刺激前比较,IL-6以时间依赖方式上调HK-2细胞α-SMA mRNA、蛋白的表达,下调E-cadherin mRNA、蛋白的表达;IL-6以时间和剂量依赖方式上调HK-2细胞P-STAT3的表达,高峰发生在30 min;AG490部分抑制STAT3、JAK2的磷酸化,部分抑制IL-6诱导的α-SMA蛋白表达的上调、部分抑制IL-6诱导的E-cadherin蛋白表达的下调。结论：HK-2细胞中,JAK2/STAT3信号通路的激活可能参与了IL-6介导的肾小管上皮细胞转分化的发生。

TRX-1和STAT-3在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

目的检测人结直肠癌组织中TRX-1和STAT-3的表达,探讨二者之间的相关性。方法用免疫组织化学法分别检测60例结直肠癌和22例远癌正常大肠黏膜中TRX-1和STAT-3的表达情况,并结合临床资料,对其进行分析。结果 TRX-1和STAT-3均定位于细胞质和细胞核,TRX-1在结直肠癌与正常大肠黏膜组织阳性率分别为78.33%与31.82%(免疫组化染色平均评分分别为4.03±1.92和1.42±1.20),二者间差异有统计学意义(P<0.01);STAT-3在结直肠癌与正常大肠黏膜组织的阳性率分别为65.00%与27.27%(免疫组化染色平均评分分别为3.34±1.81和1.26±1.19),二者间差异有统计学意义(P<0.01)。TRX-1与STAT-3在低分化癌中比高分化者表达增强;二者的表达与淋巴结转移和TNM分级密切相关(P<0.05或P<0.01)。TRX-1和STAT-3在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.964,P<0.01)。结论 Trx-1和STAT-3在结直肠癌组织中过度表达,并与其发生发展有关,二者可能参与了结直肠癌恶化的调控。

C-FOS、STAT3在PCOS患者着床窗口期子宫内膜的表达及意义

目的探讨C-FOS,STAT 3对多囊卵巢综合征(PCOS)患者窗口期子宫内膜容受性的影响。方法选取15例已婚PCOS患者(PCOS组),14例其他原因导致不孕的妇女(对照组),在窗口期收集其子宫内膜组织,经HE染色判断组织学分期,用免疫组织化学SP法检测C-FOS,STAT 3在窗口期子宫内膜的表达。结果 PCOS组窗口期C-FOS表达高于对照组,STAT 3表达低于对照组,二者呈显著负相关,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 C-FOS高表达、STAT 3低表达可能影响PCOS组窗口期子宫内膜容受性的建立,是造成PCOS患者妊娠率低、流产率高的原因之一。

冬凌草甲素通过抑制STAT-3/SYNPO-2信号通路诱导人恶性胶质瘤U87MG细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素(ORI)在体外对人源恶性胶质瘤U87MG细胞的作用,并探讨其机制是否涉及信号转导及转录激活因子3(STAT-3)/突触足蛋白2(SYNPO-2)信号通路。方法:体外培养U87MG细胞,采用不同浓度(2.5、5、7.5、10和12.5μmol/L)的ORI处理后,CCK-8法检测U87MG细胞活力;划痕实验检测U87MG细胞的迁移能力;流式细胞术检测U87MG细胞的凋亡;给予STAT-3的磷酸化激动剂白细胞介素6(IL-6)和抑制剂Stattic进行干预,将细胞分为对照(control)组、ORI组、IL-6组、Stattic组、IL-6+ORI组和Stattic+ORI组,Western blot检测Bcl-2、Bax、STAT-3、p-STAT-3(Tyr705)和SYNPO-2蛋白水平。结果:ORI呈浓度和时间依赖性地显著抑制U87MG细胞的活力和迁移能力(P<0.01),并促进其凋亡(P<0.01);Western blot结果显示,ORI可上调Bax并下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.01),且使p-STAT-3(Tyr705)蛋白水平显著降低(P<0.01),SYNPO-2蛋白表达显著增高(P<0.01),而STAT-3蛋白含量基本不变;应用Stattic可协同促进ORI的促凋亡作用(P<0.01),而IL-6则逆转ORI的作用(P<0.01)。结论:体外细胞实验中,ORI可显著抑制恶性胶质瘤U87MG细胞的活力和迁移能力,并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制STAT-3/SYNPO-2信号通路有关。

stat-3与survivin在乳腺癌的表达及其意义

目的:通过检测信号转导与激活因子3(stat-3)与生存素(survivin)在乳腺癌组织中的表达,探讨它们在乳腺癌发生及发展中的意义。方法:应用免疫组织化学法,检测51例乳腺癌和25例癌旁乳腺组织中stat-3和survivin表达。结果:stat-3在乳腺癌中的表达阳性率高于癌旁乳腺组织(P<0.001);stat-3表达在淋巴结转移组中高于无淋巴结转移组(P<0.05)。stat-3表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、雌孕激素受体和c-erbB-2均无明显关系(P>0.05)。survivin在乳腺癌中的表达高于癌旁乳腺组织(P<0.001);survivin表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、雌孕激素受体和c-erbB-2均无明显关系(P>0.05)。survivin表达阳性者35例中stat-3表达阳性34例,两者表达呈正相关关系(P<0.05)。结论:stat-3、survivin可能相互协同通过抑制细胞凋亡,在乳腺癌发生、发展中起重要作用。

STAT-3基因腺病毒介导感染ARIP、AR42J细胞的表达

目的:探测4种腺病毒液在胰腺源ARIP、AR42J细胞中的表达,为基因改造干预干细胞分化治疗糖尿病的进一步研究提供基础。方法:①扩增、纯化STAT-3 WT、STAT-3 DN、STAT-3 CA、STAT-3 GF 4种质粒;脂质体转染法转染质粒进入人胚肾293腺病毒包装细胞系,Hela细胞作为包装细胞的对照细胞。②生产含4种基因组合的腺病毒,腺病毒检测、鉴定。③常规与盖玻片法ARIP、AR42J等细胞培养;含目的基因的腺病毒液感染目标细胞。④荧光显微镜观察感染后细胞的基因表达。结果:STAT-3腺病毒基因载体生产了较高滴度(病毒滴度为6 X106pfu/ml)的腺病毒,用含目的基因的腺病毒对靶细胞感染3 d后,荧光显微镜观察到ARIP等细胞中绿色荧光蛋白成功、高效的阳性表达报告。结论:腺病毒介导STAT-3 WT、STAT-3 DN、STAT-3 CA、STAT-3 GF进入ARIP细胞的良好表达为STAT-3基因改造病毒感染干预干细胞分化的进一步相关研究提供了重要依据。