为了阐明水牛信号转导子和转录激活子4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)基因在水牛卵泡、胚胎发生及泌乳调节过程中的作用及分子机制,本试验采用了3′-RACE克隆获得STAT4基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列...为了阐明水牛信号转导子和转录激活子4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)基因在水牛卵泡、胚胎发生及泌乳调节过程中的作用及分子机制,本试验采用了3′-RACE克隆获得STAT4基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染HEK293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明,水牛STAT4基因编码区长2 247bp,3′-UTR区长268bp,编码748个氨基酸。BLAST分析显示,水牛STAT4核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、猪、马、犬和人相应序列的同源性分别为99%、99%、99%、95%、93%、93%和92%,系统进化树分析结果表明,STAT4基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明,STAT4蛋白呈弱酸性,无信号肽,定位于细胞质,存在STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind和SH2_STAT4等结构域。microRNA靶标预测显示bta-miR-200a、bta-miR-2429和bta-miR-2410等为STAT4 3′-UTR潜在microRNAs。试验成功构建了水牛STAT4基因真核表达载体pEGFPN1-STAT4,转染HEK293T后产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成STAT4-EGFP融合蛋白。展开更多
文摘为了阐明水牛信号转导子和转录激活子4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)基因在水牛卵泡、胚胎发生及泌乳调节过程中的作用及分子机制,本试验采用了3′-RACE克隆获得STAT4基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染HEK293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明,水牛STAT4基因编码区长2 247bp,3′-UTR区长268bp,编码748个氨基酸。BLAST分析显示,水牛STAT4核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、猪、马、犬和人相应序列的同源性分别为99%、99%、99%、95%、93%、93%和92%,系统进化树分析结果表明,STAT4基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明,STAT4蛋白呈弱酸性,无信号肽,定位于细胞质,存在STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind和SH2_STAT4等结构域。microRNA靶标预测显示bta-miR-200a、bta-miR-2429和bta-miR-2410等为STAT4 3′-UTR潜在microRNAs。试验成功构建了水牛STAT4基因真核表达载体pEGFPN1-STAT4,转染HEK293T后产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成STAT4-EGFP融合蛋白。
