目的:构建针对信号转导子和转录激活子6(Singnal transducers and activators of transcription 6,STAT6)基因的干扰质粒,并观察其对STAT6蛋白表达的抑制效果。方法:将构建的短发夹干扰质粒(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体,与合成的p...目的:构建针对信号转导子和转录激活子6(Singnal transducers and activators of transcription 6,STAT6)基因的干扰质粒,并观察其对STAT6蛋白表达的抑制效果。方法:将构建的短发夹干扰质粒(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体,与合成的pIRES2-EGFP-STAT6基因表达质粒共同转染COS7细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Western blot观察蛋白表达的变化。结果:将pIRES2-EGFP-STAT6重组载体转染COS7细胞后,结果显示STAT6蛋白可以在细胞中高水平表达;与阴性对照组相比,STAT6 shRNA-1干扰组和STAT6 shRNA-2干扰组STAT6蛋白表达水平分别是23.1%和9.6%。结论:成功构建并筛选到具有显著干扰效率的STAT6干扰质粒,为哮喘的基因治疗研究奠定了基础。展开更多
目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细...目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细胞cDNA为模板,PCR扩增STAT6基因的完整开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,化学合成针对STAT6基因的RNAi靶向单链片段,通过pLVTHm慢病毒载体三质粒包装系统对以上2种片段进行慢病毒颗粒包装;再用病毒感染结肠癌RKO细胞,获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株。RT-PCR和蛋白质印迹法检测稳定感染细胞株中STAT6基因的表达情况,CCK8法检测细胞活性的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果:成功构建STAT6-ORF和STAT6-RNAi慢病毒表达载体,并获得稳定表达STAT6的相应RKO细胞株。与对照组细胞相比,STAT6-ORF转染组细胞的增殖速度加快不明显(P=0.609),细胞迁移能力显著增强(P<0.01);而STAT6-RNAi转染组的细胞活性显著降低(P<0.001),迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:STAT6可能是促进结肠癌细胞增殖和迁移的重要转录因子。展开更多
文摘目的:分别构建信号转导与转录活化因子6(signal transducer and activator of transcription6,STAT6)过表达及RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,研究STAT6基因表达对人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。方法:以人胚肾HEK293FT细胞cDNA为模板,PCR扩增STAT6基因的完整开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,化学合成针对STAT6基因的RNAi靶向单链片段,通过pLVTHm慢病毒载体三质粒包装系统对以上2种片段进行慢病毒颗粒包装;再用病毒感染结肠癌RKO细胞,获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株。RT-PCR和蛋白质印迹法检测稳定感染细胞株中STAT6基因的表达情况,CCK8法检测细胞活性的变化,Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果:成功构建STAT6-ORF和STAT6-RNAi慢病毒表达载体,并获得稳定表达STAT6的相应RKO细胞株。与对照组细胞相比,STAT6-ORF转染组细胞的增殖速度加快不明显(P=0.609),细胞迁移能力显著增强(P<0.01);而STAT6-RNAi转染组的细胞活性显著降低(P<0.001),迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:STAT6可能是促进结肠癌细胞增殖和迁移的重要转录因子。