水牛STAT5a和STAT5b基因启动子克隆及其活性分析

为了解转录激活与信号转导因子5(STAT5)在水牛乳腺发育及泌乳生理中的功能,对水牛STAT5a和STAT5b基因的5′调控区启动子序列进行了克隆,并比较其活性.根据GenBank已公布的牛STAT5a和STAT5b基因序列设计特异性引物,以广西本地水牛乳腺组织基因组DNA为模板,通过PCR法分别扩增不同长度STAT5a和STAT5b基因启动子片段并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的水牛STAT5a基因启动子片段(P1和P2)大小是500bp,700bp,STAT5b基因启动子片段(P3,P4和P5)大小是500bp,800bp,1 500bp.在线分析结果显示,仅P2片段中存在高甲基化位点,且富含SP1,AP2等转录因子结合位点.将构建的不同长度启动子片段分别连入pGL3-Basic载体,分别转染水牛乳腺上皮细胞,检测荧光素酶表达水平.与未转染组相比,P1~P5质粒转染组的荧光素酶比值均显著提高(p<0.05);添加5mg/mL质量浓度催乳素(PRL)处理乳腺上皮细胞,P3质粒转染组的荧光素酶比值显著高于其他各组(p<0.05).以上结果表明,水牛STAT5a和STAT5b基因启动子活性均受到PRL调节,两者表达水平在水牛乳腺上皮细胞中不同,且STAT5b基因表达受PRL调控更为明显.

STAT5a和STAT5b蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号转导和转录激活因子-5a(STAT5a)和信号转导和转录激活因子-5b(STAT5b)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化SP法检测40例手术切除的NSCLC和20例正常肺组织中STAT5a和STAT5b的表达。结果:STAT5a和STAT5b在NSCLC中的表达明显高于正常肺组织(P<0.01),STAT5a和STAT5b的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度及组织类型、淋巴结转移及TNM分期等病理因素无关。在NSCLC中,STAT5b与患者的性别有相关性(P<0.05),其中女性患者表达高于男性患者(P<0.05)。STAT5a与NSCLC中关系比STAT5b密切,在NSCLC的发生中,STAT5a和STAT5b蛋白表达没有相关性。结论:STAT5a和STAT5b蛋白可能促进NSCLC的形成,但与肿瘤的进展可能无关,STAT5b蛋白与性别有一定的相关性。在NSCLC的发生过程中,STAT5a与STAT5b蛋白可能是各自独立发挥作用的,无协同作用。STAT5a在NSCLC的发生中发挥的作用可能更大。

STAT5b靶控报告基因检测胰岛素受体激酶活性细胞模型的建立

目的建立方便快捷的检测胰岛素受体激酶活性的方法,为筛选抗糖尿病的药物提供一种新的细胞模型。方法用克隆有胰岛素受体基因、STAT5b基因和STAT5响应元件靶控的荧光素酶报告基因的质粒共转染CHO细胞,RT-PCR检测外源基因的表达。转染的细胞经胰岛素处理,考察胰岛素对报告基因表达的剂量和时间效应,并采用AG1024处理和PTP1B基因共转染考察模型的特异性。结果经瞬时共转染的CHO细胞中检测到胰岛素受体和STAT5b基因表达,转染细胞中荧光素酶表达受胰岛素诱导且呈浓度依赖性和时间依赖性,最高诱导表达率为6.25倍。胰岛素受体酪氨酸激酶特异性抑制剂AG1024和酪氨酸磷酸化酶1B(PTP1B)可特异地阻断胰岛素的对荧光素酶表达的诱导效应。结论该细胞模型通过报告基因表达检测胰岛素受体激酶活性,灵敏性高、特异性强,在胰岛素受体激动剂和增敏剂的筛选方面具有应用价值。

STATTAT5b基因多态性及其与京海黄鸡繁殖性状的相关分析

以信号转导和转录激活子5b(STAT5b)基因为候选基因,采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测STAT5b基因在京海黄鸡、边鸡、尤溪麻鸡和AA鸡4个群体中的单核苷酸多态性(SNPs),并与京海黄鸡繁殖性状的相关性进行研究。结果表明,就STAT5b基因P1位点而言,在4个鸡群体中检测到6种基因型(DD、DE、DF、EE、EF、FF)。克隆测序发现,与DD基因型相比EE和FF基因型中存在2个突变(A9221G、T9401C)。就P2位点而言,在4个鸡品种中检测到3种基因型(GG、GH和HH),克隆测序发现,与GG基因型比较HH基因型有3个突变(C11159T、T11183C和T11252C)。最小二乘分析结果显示,DF基因型的京海黄鸡300日龄产蛋数显著高于EE基因型的京海黄鸡个体(P<0.05),其他性状基因型间无差异(P>0.05);GG基因型京海黄鸡300日龄体重显著高于GH基因型的京海黄鸡个体(P<0.05),其他性状基因型间无差异(P>0.05)。单倍型分析产生8种单倍型,10种单倍型组合。单倍型组合H1H3和H1H8京海黄鸡个体300日龄产蛋数最多;单倍型组合H1H7京海黄鸡个体300日龄蛋重最大;H1H1单倍型组合京海黄鸡个体300日龄体重最高。因此,推测STAT5b基因P1、P2位点对京海黄鸡繁殖性状有一定影响。

罗格列酮增加OLETF大鼠脂肪组织中STAT5b蛋白表达

目的探讨胰岛素信号分子STAT5b在胰岛素信号转导中的作用及罗格列酮改善胰岛素抵抗的机制。方法8周龄雄性OLETF大鼠分为罗格列酮治疗和未治疗组,并以同种系非糖尿病LETO大鼠为正常对照,用Western印迹技术检测各组大鼠脂肪组织中STAT5bI、Rβ和IRS-1的蛋白量及IRI、RS-1的酪氨酸磷酸化水平。结果在脂肪组织中,LETO大鼠STAT5bI、RβI、RS-1的蛋白量及IRI、RS-1的酪氨酸磷酸化水平均比OLETF大鼠显著增高(P<0.05);罗格列酮治疗组与未治疗组的IRβI、RS-1蛋白量比较差异不显著,而STAT5b、Tyr-P-IR和Tyr-P-IRS-1罗格列酮治疗组较未治疗组分别增加了1.2、0.75和0.6倍。结论①STAT5b参与了脂肪组织的胰岛素信号转导;②罗格列酮的胰岛素增敏作用可能与其激动PPARγ、增加STAT5b的表达、促进IRI、RS-1的酪氨酸磷酸化有关。

STAT5b基因的遗传多态性及其与京海黄鸡体重和繁殖性状的关联分析

以京海黄鸡、AA鸡、尤溪麻鸡、边鸡等4个鸡品种为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测信号转导和转录激活子5b(STAT5b)第7外显子和部分内含子7的多态性,并分析其对京海黄鸡体重和繁殖性状的遗传效应。结果显示,在STAT5b第7内含子区域检测到1处突变(8 066bp C→T)。在4个鸡品种中均检测到AA、AB、BB 3种基因型,χ2检验结果表明,除京海黄鸡外其余3个品种群体在该座位均达到Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。最小二乘分析表明,京海黄鸡3种基因型个体的出生重和开产日龄存在显著差异(P<0.05)。

21例生长激素不敏感综合征患儿生长激素受体信号通路缺陷与临床关联研究

目的探讨儿童生长激素不敏感综合征（GHIS）的分子病因及临床表型的相关性。方法对21例临床诊断GHIS患儿的4个关联候选基因（GHR、IGFALS、JAK2和STAT5B）进行基因组DNA序列筛查与临床关联参数分析。结果所有患儿平均身高标准差（standarddeviation，SDS）-4．33±1．91（-9．17—-2．21），平均血清GH峰值（22．67±20．98）μg／L（11．33—104．21μg／L），基础血清胰岛素样生长因子ISDS-2．65±0．53（-3．57～-1．79）、胰岛素样生长因子结合蛋白3SDS—1．77±1．64（-4．13～0．96）；骨龄较实际年龄落后差值（实际年龄-骨龄）为（43．10±19．54）个月（6～82个月）。在2例伴面中部发育不良的重型矮小者中发现1例GHR第六内含子5’剪接位点纯合突变（IVS6ds＋1G—A）。3例轻型矮小者被发现IGFALS基因新发变异：c．1097T〉Cc．1098C〉TP．V366A（复合杂合型）、c．1229C〉Tp．S410L（杂合型）、5’UTR区染色体第1843707位碱基A→G（纯合型）。JAK2、STAT5b基因未发现突变。结论GHIS是原发性胰岛素样生长因子I缺乏的重要病因，其分子病理涉及GHR及受体后信号通路缺陷。本文21例GHIS患儿中仅发现1例GHR突变和3例IGFALS变异。提示GHR和IGFALS缺陷可能参与致病，但并不是其主要分子缺陷，更多的分子病理机制尚有待进一步深入研究。

信号转导与转录激活因子5b在肿瘤研究中的新进展

信号转导与转录激活因子5b（signal transducer and activator of transcription 5b，STAT5b）主要参与介导细胞因子和生长因子对细胞信号转导作用。磷酸化的STAT5在细胞的增殖、分化、周期调控及凋亡过程中起重要作用，其过度活化导致细胞的异常增殖和凋亡障碍，促进肿瘤的发生、发展。新的研究发现，STAT5b作为STATS的一个亚型很有可能作为一种转录激活因子在肿瘤形成和信号转导调节中起重要的作用。