STIM1和Orai1/TRPCs在右心衰竭Ca^(2+)重塑中的作用

本文总结右心衰竭心肌细胞动作电位变化、心肌细胞内T管和内质网的改变,详细阐述了钙调神经磷酸酶(Calcineurin)-活化细胞活因子(NFAT)通路对心肌收缩力的作用。重点描述基质相互作用因子1(STIM1)和钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)/瞬时受体电位通道(TRPCs)通路在右心室心肌细胞兴奋收缩耦联、肥大及右心室成纤维细胞迁移增强方面的机制。

光敏STIM1驱动视网膜损伤致应激性抑郁的相关机制研究

目的探讨光敏STIM1钙通道激活驱动视网膜细胞死亡致应激性抑郁症发生的情况及颅内视觉相关脑区炎性变化情况。方法采用球内光敏修饰STIM1病毒感染构建光驱动视网膜损伤小鼠模型。运用HE染色、抑郁行为学评定视网膜病变程度和抑郁发生率;采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色等技术检测抑郁鼠脑内小胶质细胞、炎性相关因子(IL-6、MIP-1α)及神经细胞损伤标志物S100B、凋亡蛋白Caspase-3、髓鞘碱性蛋白MBP的变化。结果①连续7 d、3 h/d的光照模式下可见小鼠视网膜各层细胞数量均显著减少(P<0.05)。②光敏+组在旷场实验中进入中心区次数、中心区活动路程及运动总路程均显著降低(P<0.05),蔗糖偏好实验中糖水偏好指数显著降低(P<0.01),强迫游泳实验、悬尾实验的不动时间显著增加(P<0.001)。旷场实验、蔗糖偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验4项行为学实验均为抑郁阳性的比例为23.26%。③光敏+组抑郁鼠视皮层、背外侧膝状核IBa-1+细胞密度增多(P<0.05);视皮层中IL-6、MIP-1αmRNA表达显著上调(P<0.001),S100B蛋白、Caspase-3蛋白含量显著升高(P<0.05);在白质区MBP蛋白表达显著降低(P<0.05),胼胝体(cc)区、扣带回(cg)区MBP荧光信号强度明显减弱(P<0.0001)。结论成功构建光驱动视网膜损伤致应激性抑郁发生小鼠模型,证实抑郁发生可能与视觉相关脑区炎性环境改变、凋亡发生及白质区脱髓鞘性损伤密切相关。

STIM1在肿瘤发生及转移中的研究进展

基质互作分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)是细胞钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)通路的关键成员,它定位在内质网膜上,并在多种肿瘤细胞中高表达。异常表达的STIM1能够通过影响侵袭伪足(invadopodia)形成、干扰血管生成、介导炎症反应、改变细胞骨架和细胞动力等方式促进肿瘤发生及转移,然而其具体的调控作用机制仍未完全阐明。本文综述了目前STIM1在不同肿瘤发生及转移中的最新研究进展,总结并探讨了其在肿瘤发生及转移中的调控机制,为将来在肿瘤领域对STIM1的深入研究提供借鉴和参考。

ML-9调节STIM1在下咽癌中的表达及作用机制

目的分析ML-9调节STIM1在下咽癌中的作用机制。方法选取90只饲养裸鼠作为研究对象,应用随机法分为对照组及ML-9组,各45例。比较两组治疗前后细胞增殖、凋亡、侵袭、裸鼠体重、瘤体大小、细胞转移、蛋白表达量情况。结果治疗前,两组裸鼠各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,ML-9组裸鼠蛋白表达量、瘤体体积、瘤体重量情况均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ML-9组细胞增殖、凋亡、侵袭情况低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论敲减下咽癌FaDu细胞中的STIM1基因后,下咽癌细胞的增殖、侵袭、转移能力也被显著抑制,并能够抑制下咽癌的细胞生物学行为,说明STIM1是调控下咽癌发生发展的关键因子。

芪参益气滴丸通过TRPC1/STIM1通路调节Ca^(2+)稳态发挥抗动脉粥样硬化作用

目的:探究芪参益气滴丸(Qishen-Yiqi dropping pills,QS)治疗动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)的作用机制。方法:利用高脂饮食建立SD大鼠AS模型,随机分为:正常对照组,模型组,芪参益气滴丸低、中、高剂量组,阳性对照组,每组6只。处理12周后收集血清检测各组大鼠血脂及Ca^(2+)水平;HE染色观察动脉组织形态学变化;ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;硝酸还原酶法检测动脉组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;Western blot检测动脉组织中瞬时受体电位通道蛋白1(transient receptor potential channel protein 1,TRPC1)、基质交互分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达水平。结果:芪参益气滴丸能减轻AS大鼠动脉内膜增厚及血管狭窄,抑制AS斑块形成;与模型组相比,芪参益气滴丸能显著降低大鼠血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平(P<0.05);芪参益气滴丸治疗组大鼠血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平与AS大鼠相比显著降低(P<0.05);芪参益气滴丸治疗组大鼠血清Ca^(2+)水平显著低于且动脉组织中NO水平显著高于AS大鼠(P<0.05);与AS大鼠相比,芪参益气滴丸治疗组大鼠动脉组织中TRPC1和STIM1蛋白水平显著降低,且eNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:芪参益气滴丸可以通过TRPC1/STIM1通路调节钙稳态,促进血管舒张因子NO的合成释放,抑制炎症反应,从而发挥抗AS作用。

内质网上的蛋白质RCN2与STIM1-Orai1复合体相互作用(英文)

膜蛋白质Orai1组成了一类被称为钙释放激活钙通道(CRAC)的离子通道,并且由相互作用的蛋白质STIM1作为其在内质网上的钙感受器.但是这类通道的调节机制还未研究透彻.通过串连亲和纯化STIM1-Orai1复合体,发现与之相互作用的内质网蛋白质RCN2.共聚焦显微术显示RCN2与STIM1在钙库排空前后完全共定位.对RCN2的EF hands结构突变体所作单细胞测钙,结果显示其对钙库操控通道电流特性有微弱影响.全内反射荧光显微术显示,RCN2以花环状围绕包围STIM1聚集堆,这提示RCN2在STIM1聚集中起到一种结构约束作用.

食管鳞状细胞癌中miR-4687-5P及STIM1的表达及调控机制

目的检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株及组织中miR-4687-5P及STIM1基因的表达及STIM1基因启动子区的甲基化状况,进一步探讨miR-4687-5P与STIM1基因表达的相关性以及两者是否具有共同的表达调控机制。方法应用qRT-PCR及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测ESCC细胞株(TE13、KYSE150、T.Tn)及89例ESCC及相应癌旁非肿瘤组织中miR-4687-5P及STIM1基因的表达及甲基化情况,并分析其相关性。结果 ESCC组织中miR-4687-5P与STIM1基因表达均明显下调,且表达具有一致性。miR-4687-5P与STIM1基因在3株ESCC细胞系中表达较弱,应用甲基化抑制剂5-aza-2’-deoxycytidine(5-Aza-Dc)处理细胞株后两基因表达均明显增强,而甲基化条带明显减弱或消失; ESCC组织中,STIM1基因启动子区呈高甲基化状态,且其甲基化频率与STIM1及miR-4687-5P的表达均相关(P <0. 01)。结论 ESCC中miR-4687-5P与STIM1基因表达均下调; miR-4687-5P表达可能受宿主基因STIM1启动子的调控,其启动子区的高甲基化状态可能是引起miR-4687-5P与STIM1基因在ESCC中表达下调的共同机制之一。

STIM1在幼年和成年大鼠外伤性癫痫中的表达

目的探讨钙释放激活钙离子通道(calcium release-activated calcium,CRAC)关键蛋白STIM1在幼年和成年大鼠外伤性癫痫中的表达差异及意义。方法取SD雄性幼年、成年大鼠各94只,按照完全随机设计分为成年、幼年假手术组:皮层注射生理盐水,各42只;成年、幼年模型组:铁离子皮层注射外伤性癫痫模型,各52只。建模后观察大鼠癫痫行为学表现;分别于6、24、72 h,7、14、21、28 d 7个时相点完全随机选取6只大鼠,处死取伤灶周边皮层脑组织,用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学法分别检测STIM1的mRNA与蛋白的表达。结果模型组成年、幼年大鼠均出现典型痫性发作,幼鼠模型组建模成功率为91.3%,成鼠模型组建模成功率为84%(定义Racine评分3分及以上为建模成功)。幼鼠模型组比成鼠模型组发作次数明显增多(P<0.05),每次发作持续时间显著延长(P<0.05),发作程度较重。建模后各组STIM1的mRNA和蛋白表达都有明显增高,72 h达高峰(P<0.05),但幼鼠与成鼠相比较,STIM1的mRNA和蛋白在各时间点表达增高的趋势更加显著(P<0.05)。结论幼鼠较成鼠更容易发生外伤性癫痫,STIM1在幼鼠中较成鼠的表达也更高,提示STIM1表达增加、CRAC激活可能是幼鼠更易发生外伤性癫痫的机制之一。

STIM1、ORAI1在外伤性癫痫大鼠中的表达

目的研究基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)和钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1/CRACM1)在外伤性癫痫大鼠脑组织皮层中的表达变化,探讨其与外伤性癫痫的关系及其意义。方法84只成年SD大鼠随机分为对照组(42只)和实验组(42只),制作FeCl3外伤性癫痫模型,实验组予皮层注射100mmol/L FeCl35μL,对照组皮层注射等量生理盐水,观察记录大鼠伤后癫痫发作的行为学表现,伤后不同时间点(6h、24h、72h、7d、14d、21d、28d)随机取6只大鼠伤侧皮层脑组织,用荧光定量PCR、Western blot和免疫组化技术检测STIM1和ORAI1的mRNA和蛋白的表达。结果实验组伤后出现典型的癫痫发作,制模成功率达84.0%,对照组未见癫痫发作;实验组STIM1、ORAI1的mRNA表达均较对照组显著增高(P<0.05),72h为表达高峰(P<0.05);实验组STIM1、ORAI1在伤后6h的蛋白表达与对照组比较无统计学差异(P>0.05),此后6个时间点的表达与对照组比较均显著增高(P<0.05),72h为表达高峰(P<0.05)。结论STIM1、ORAI1在外伤性癫痫大鼠皮层脑组织中表达显著上调,钙释放激活的钙(calcium re lease-activated calcium,CRAC)通道可能与外伤后癫痫的形成有关。

STIM1/ORAI1复合体参与调节人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成

为研究基质交联分子1(STIM1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca^(2+)内流和NO生成中的作用。采取2-3代HUVECs随机分组,将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测STIM1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达。细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组(Control组)及空质粒组(Scrambled组),将上述3组细胞分别与四种不同处理因素刺激后用荧光探针Fura-2/AM检测[Ca^(2+)]i变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测NO生成的变化。随后将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVECs,与Ca R激动剂精胺孵育后检测[Ca^(2+)]i和NO,用免疫共沉淀法检测STIM1和ORAI1的相互作用。结果显示,(1)与对照组相比,STIM1及ORAI1组,m RNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);(2)在4种不同处理因素作用下,STIM1及ORAI1转染组中[Ca^(2+)]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);(3)与对照组及单转染STIM1及ORAI1组比,共转染组[Ca^(2+)]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);(4)STIM1与ORAI1相互作用形成复合体,且在Ca R激动剂的剌激下相互作用增强。由此可知,STIM1与ORAI1复合体共同调节Ca R经SOC和ROC激活介导的Ca^(2+)内流和NO生成。

结肠腺癌中Orai1与STIM1的表达及临床意义

目的探讨Orai1和STIM1蛋白在结肠腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测80例结肠腺癌及50例正常结肠黏膜中Orai1和STIM1蛋白的表达。分析两者表达与结肠腺癌临床病理特征及预后的关系。结果结肠腺癌组织中Orai1和STIM1表达水平均显著高于正常结肠黏膜(P均<0.05);Orai1和STIM1表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、分化程度无关(P>0.05)。结肠腺癌中Orai1与STIM1蛋白表达呈正相关(P=0.001,rs=0.349)。单因素生存分析显示,Orai1蛋白、STIM1蛋白、TNM分期及淋巴结转移与结肠腺癌患者预后相关(P<0.05)。结论 Orai1和STIM1可能具有协同作用,共同促进结肠癌的发展,有望成为结肠癌诊断、治疗以及判断预后的生物学指标。

猪STIM1基因变异筛选及其与产仔数性状的关联分析

猪的产仔数是繁殖性状中重要的经济性状。STIM1是一种钙离子结合蛋白,在卵母细胞成熟、受精以及胚胎早期发育过程中发挥重要作用。鉴定获得了猪STIM1基因内含子10中的1个新的突变位点g.199893-del T,采用直接测序法在DIV系和大白猪群体中进行了基因分型,并对产仔数性状进行了关联分析,结果发现该突变显著影响母猪的产仔数性状(P<0.05)。NN基因型母猪总胎次的产仔数和产活仔数显著高于MM基因型(P<0.05)。

高低转移性乳腺癌细胞STIM1表达与钙内流差异比较

目的探讨基质相互作用分子1(STIM1)在高低转移性的乳腺癌细胞中的表达差异以及对钙库调节钙内流(SOCE)的影响。方法选取常见的高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞与低转移性乳腺癌细胞MCF-7作为细胞模型,用划痕试验检测两种细胞的迁移能力,应用实时荧光定量PCR检测两种细胞中STIM1的mRNA表达,用Western blot检测其蛋白水平,用激光共聚焦显微镜检测两种细胞中SOCE的差异。结果划痕实验结果显示,MCF-7细胞在24 h和48 h的迁移细胞数都明显低于MDA-MB-231细胞24 h与48 h的迁移细胞数(P<0.01)。STIM1 mRNA在MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞中的相对表达量分别为1.001 9±0.074 4和6.338 8±1.046 7,差异有统计学意义(P<0.05)。STIM1蛋白在MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞中的相对表达量分别为0.530 2±0.177 8和1.296 8±0.075 8,差异有统计学意义(P<0.01)。MCF-7与MDA-MB-231细胞中SOCE引起的外钙内流相对比例分别为1.036 3±0.413 5和4.145 8±1.045 0,差异有统计学意义(P<0.01)。结论高转移性乳腺癌细胞中存在STIM1高表达和钙内流增高,这可能是其实现高转移性的机制之一。

STIM1基因干扰对人直肠癌SW837细胞生物学功能的影响

目的研究STIM1基因干扰对人直肠癌SW837细胞增殖、凋亡及体外迁移的影响,以期为直肠癌临床防治及药物研发提供新的靶点。方法采用STIM1干扰慢病毒转染人直肠癌SW837细胞,实时定量PCR(q RT-PCR)和Western blot验证STIM1的干扰效果,分别采用MTT法和划痕试验检测细胞增殖及迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 STIM1干扰慢病毒转染后,干扰组SW837细胞STIM1基因m RNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05)。与对照组比较,干扰组细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);干扰组SW837细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05),STIM1干扰促进SW837细胞凋亡与上调caspase-3、Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。结论STIM1基因干扰可抑制人直肠癌SW837细胞的增殖活性和体外迁移能力,并促进其凋亡。

钙池操纵钙通道STIM1和ORAI1在ⅢA期非小细胞肺癌中的表达

目的:研究ⅢA期非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术肿瘤组织中STIM1或ORAI1蛋白表达和生存预后的关系。方法:应用S-P免疫组化方法检测70例ⅢA期NSCLC患者手术肿瘤组织STIM1和ORAI1蛋白表达,统计学分析其与患者无疾病生存预后的关系。结果:男性NSCLC患者中,STIM1低表达者预后有好于高表达者的趋势(21个月vs 12个月,P=0.06)。鳞癌NSCLC患者中,STIM1低表达者预后有好于高表达者的趋势(33个月vs 9个月,P=0.07)。结论:在鳞癌和男性ⅢA期NSCLC患者中,STIM1低表达可能预示着患者有较好的无疾病生存预后。

内质网膜蛋白STIM1内质网内片段的重组表达与纯化结晶

将位于内质网内的STIM1的N端片段,包括EF手性区域和SAM结构域,分别标记上N端和C端6*His标签,在大肠杆菌中重组表达,经过亲和层析和凝胶过滤层析的纯化,得到了大量、纯净的重组STIM1N端蛋白,通过悬滴气相扩散法得到了一些三维梭状晶体.

STIM1在宫颈癌中的表达及与VEGF的相关性

目的:探讨基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在宫颈癌中的表达及其与VEGF的相关性。方法:收集20例宫颈癌患者的癌变及其正常上皮组织并测量对应肿瘤体积,采用免疫印迹法检测STIM1在各病变组织中的相对表达量,分析STIM1与肿瘤病变程度的相关性;酶联免疫ELISA方法测定过表达STIM1的癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的分泌量并分析其与STIM1的相关性。结果:70%的宫颈癌组织中STIM1的表达上调,表达量与癌症病变标志物即肿瘤大小相关;STIM1可促进血管内皮因子VEGF的分泌。结论:STIM1在宫颈癌组织中高表达,是宫颈癌病变过程中的一个重要因子。

STIM1的分子结构和功能

Orai蛋白是组成钙释放激活通道的关键蛋白,定位在内质网膜上的钙离子传感器负责激活钙释放激活通道,基质相互作用分子(STIM1)与Orai通道相互作用并激活Orai通道,已证实STIM1蛋白有调节TRP通道的作用,和白三烯C4以及花生四烯酸刺激Orai1和Orai3组成的钙通道。本文就STIM1蛋白的分子结构和信号机制做一综述。