喉癌STK15基因表达和染色体不稳定的研究

为研究喉鳞状细胞癌中STK15基因表达及其与染色体不稳定的相关性 ,提取 5 0例喉鳞状细胞癌及配对癌旁正常组织和人喉鳞状细胞癌Hep - 2细胞系的RNA ,反转录合成cDNA ,以 β -actin为内对照进行PCR扩增 ,用软件分析电泳结果 ,研究喉癌中STK15基因表达的水平 ;以Hep - 2细胞系为代表应用常规和高分辨G显带方法进行核型分析。在 5 0例喉癌中 ,癌组织STK15表达高于配对癌旁正常组织的有 34例 ,占 6 8% ,经统计学分析 ,肿瘤组与对照组差异显著 ,Hep - 2细胞系中STK15基因表达高于内对照 β-actin ;Hep - 2细胞系中存在显著的染色体不稳定 :染色体数目变化于 4 3～ 84条之间 ,众数为 6 9～ 74条 ,结构畸变主要表现为 13条标记染色体。本研究首次发现STK15基因在喉癌中表达增高 ,它可能通过中心体异常而引起染色体不稳定 ,在喉癌的发生、发展中发挥一定作用。

口腔鳞癌中心体扩增与p53 STK15蛋白表达相关性

目的:分析STK15及p53蛋白表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)中心体扩增相关性,探讨OSCC中心体扩增可能分子调控机制。方法:8例正常口腔黏膜及43例OSCC石蜡包埋组织,采用间接免疫荧光双重染色了解OSCC中心体数目扩增状况,采用免疫组织化学方法检测相应组织p53、STK15蛋白表达情况,并分析其与中心体扩增相关性。结果:中心体扩增可见于76.74%(33/43)OSCC中。OSCC中STK15阳性率为67.44%(29/43),STK15阳性率在p53阳性组高于p53阴性组(P<0.05)。OSCC中心体扩增发生率在STK15/p53阳性共表达组高于STK15/p53阴性组(P<0.05),Spearman相关分析显示STK15/p53阳性共表达与OSCC中心体扩增之间存在相关关系(r=0.356,P=0.019)。结论:中心体扩增是OSCC常见异常现象,p53/STK15转激活-非依赖通路可能参与中心体异常的形成,与之共同参与OSCC的发生。

STK15、MCM5在胃癌前病变及癌变组织中的表达及相关性分析

目的:研究中心体扩增激酶STK15和微小染色体维持蛋白5(MCM5)在胃癌组织、癌旁正常胃组织及不典型增生胃组织中的表达水平,旨在探讨二者在胃癌发生中的作用及相关机制。方法:采用Real-time荧光定量PCR技术对胃组织中STK15和MCM5的mRNA表达水平进行检测。采用SPSS统计软件对二者表达进行方差分析、pearson检验对二者表达的关联性进行分析。结果:STK15在胃癌组织的表达量为1.326±0.072,在癌旁正常胃组织为0.655±0.053,不典型增生胃组织为0.703±0.072,除癌旁正常组织与不典型增生组织中表达无差异(P>0.05)外,其余各组两两比较差异均有显著性(P<0.01)。MCM5在胃癌组织的表达量为0.864±0.038,正常组织为0.553±0.048,不典型增生组织为0.796±0.055,各组两两比较差异均存在显著性(P<0.01)。在胃组织中STK15和MCM5表达呈正相关(r=0.744,P<0.01)。结论:中心体扩增和微小染色体的维持是细胞癌变过程的重要事件,MCM5能很好反映细胞的增殖状态,中心体的异常扩增是细胞恶性克隆的关键环节,二者联合检测有助于胃癌的早期诊断和评估侵袭能力。

青年食管癌和贲门癌组织中STK15的表达及意义

目的探讨河南高发区青年食管癌和贲门癌组织中STK15的表达及意义,加深对食管、贲门癌变机制的了解。方法采用免疫组化卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法和组织病理学方法,分析STK15在54例食管癌和43例贲门癌组织中的变化特征和规律。结果 STK15在青年食管癌中的阳性表达(21/54,39%)明显低于贲门痛(27/43,63%),两者差异具有统计学意义(P=0.019),随分化程度不同,STK15的阳性表达具有差异,且在低分化的SCC和GCA组织中差异具有统计学意义(P=0.036)。结论 STK15在青年食管癌和贲门癌中都有不同程度的表达。但是,食管癌中的阳性表达明显低于贲门癌,以低分化的贲门癌组织中表达最高,提示青年食管癌和贲门癌变可能具有不同的分子基础,STK15过度表达可能是贲门癌变和低分化的重要分子学基础之一。

中国人群中STK15基因内两种非同义SNP的连锁不平衡和单体型分析(英文)

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变。STK15基因外显子 3中有 3种非同义单核苷酸多态 (SNP),即: 91A→T(I31F)、169G→A(V57I)和 311C→T(S104L)。新近研究发现, 91A→T与人类肿瘤遗传易感性相关。应用PCR RFLP技术确定了 91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)两种SNP在中国人群中的基因型和单体型。采用巢式PCR方法扩增了193例正常个体的DNA样品,通过错配正向巢式内引物引入EcoRⅠ酶切位点。巢式PCR扩增产物用限制性内切酶EcoRⅠ和AccⅡ双酶切消化,其中EcoRⅠ能酶切 91A,AccⅡ能切开 169G,用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法鉴定双酶切结果,发现了 4种可能的单体型中的 3种,其单体型频率分别为:p( 91A 169G) =68 65%,p( 91T 169A) = 10 88%,p(91T 169G) =20 47%,p(91A 169A) =0%;它们组成的 6种基因型及频率分别为: 91A 169G/91A 169G ( 46 11% ), 91A 169G/91T 169A( 14 51% ), 91A 169G/91T 169G( 30 57% ), 91T 169G/91T 169G(3 11% ), 91T 169G/91T 169A( 4 15% ), 91T 169A/91T 169A( 1 55% )。等位基因及单体型数据分析结果表明, 91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)之间存在连锁不平衡。

STK15基因多态性与膀胱癌发病风险的关系

目的探讨STK15Phe31Ile基因单核苷酸多态与膀胱癌风险的关系。方法采用病例对照研究方法,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测60例膀胱癌患者和60例正常对照者STK15Phe31Ile基因型,比较不同基因型与膀胱癌危险性及其病理特征的关系。结果 STK15Phe31Ile三种基因型(Phe/Phe、Phe/Ile、Ile/Ile)在病例组的分布频率分别为20%、25%和55%,在对照组分别为28.3%、41.6%和30%,分布差异具有统计学意义(P=0.021)。携带STK15Ile/Ile基因型者患膀胱癌的风险比携带STK15Phe/Phe基因型者增加159%(OR=2.59,95%CI=1.019～6.622),此种风险增加在吸烟患者中更为显著(OR=5.33,95%CI=1.282～22.192)。未发现STK15Phe31Ile基因多态与膀胱癌病理特征相关。结论 STK15Phe31Ile基因多态可能是膀胱癌的遗传易感因素。

STK15mRNA在不同肿瘤组织和肿瘤细胞株表达的定量检测

目的:探讨STK15mRNA在不同癌组织中的定量表达及其对肿瘤的诊断价值。方法:利用定量RT-PCR法检测多种癌组织和细胞株中STK15mRNA的表达量。结果:STK15在子宫体癌、肝癌、肾癌、肺癌、胃癌和前列腺癌组织标本和(或)细胞株中有过表达,在脑胶质细胞瘤中的表达与正常组织相比没有明显变化。结论:STK15mRNA在不同癌组织中的表达情况不同,在子宫体癌、肝癌、肾癌、肺癌、胃癌和前列腺癌等肿瘤组织中表达增高,对肿瘤的诊断有一定参考价值。

STK15在肺鳞癌、腺癌中的表达及意义

背景与目的丝氨酸/苏氨酸激酶15(serinethreoninekinase15,STK15)是一种有丝分裂激酶。它的过表达出现在许多恶性肿瘤中,并与肿瘤的发生、发展有关,但其在肺癌组织中的表达和意义尚不清楚。本研究的目的是探讨STK15在肺鳞癌、腺癌中的表达及其与各临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测80例肺鳞癌、腺癌及20例癌旁肺组织标本中STK15的蛋白表达,采用Westernblot和RT-PCR方法检测40例新鲜肺鳞癌、腺癌及癌旁肺组织标本中STK15蛋白及STK15mRNA的表达。结果免疫组化结果显示STK15蛋白在肺癌中的表达率为68.75%(55/80),明显高于癌旁肺组织(0/20)(P<0.001);STK15表达与肺癌的分化程度有密切关系(P=0.011),而与肺癌的TNM分期、组织学类型、淋巴结转移等均无明显关系(P>0.05)。肺癌组织中STK15蛋白(P<0.001)和STK15mRNA(P<0.001)的相对表达量明显高于癌旁肺组织。结论STK15蛋白及STK15mRNA在肺鳞癌、腺癌中的表达明显高于癌旁肺组织。STK15蛋白的表达与肺癌的分化程度有密切关系,高分化者明显低于低分化者。

STK15基因单核苷酸多态性与结直肠癌风险的Meta分析

目的综合评估STK15基因单核苷酸多态性与结直肠癌易感性的关系。方法以"STK15"、"polymorphism"、"aurora-A"、"colorectal cancer"、"colorectal carcinoma"、"结直肠癌"、"STK15基因"和"基因多态性"等为主题词检索Pubmed、EMbase、SCI、Web of Science、CNKI、VIP、万方等中英文数据库,并未进行语种限制。对所获文献进行质量评价、筛选和异质性检验,要求所纳入文献均为非相关的病例对照研究,并以OR值为效应指标,基因型在对照群体中的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。利用Stata10.0软件进行Meta分析。结果共纳入6篇研究文献,累计病例5 158例,对照4 608例,Phe/Ile和Ile/Ile基因型同Phe/Phe基因型相比较,OR值及其95%可信区间分别为1.01(95%CI:0.93～1.10)和1.18(95%CI:0.98～1.42);对应的P值分别为0.81和0.081。结论 STK15Phe31Ile基因单核苷酸多态性与结直肠癌的发病风险无关,中国人群中STK15 Phe31Ile多态性与结直肠癌易感性关系需要进一步的研究证实。

RNA干扰STK15基因对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

STK15（serine／threonine kinase15）是一类广泛存在于真核细胞中的丝氨酸／苏氨酸激酶，通过磷酸化下游特定底物影响G2／M期转换，促进中心体成熟、双极纺锤体建立以及染色体的分离。许多研究表明，多种肿瘤中STK15呈高表达状态，在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。

STK15基因多态性和前列腺癌危险性的病例-对照研究

目的探讨丝氨酸苏氨酸激酶15T基因(STK15)多态性和前列腺癌发生的关系。方法采用病例对照研究方法,以聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测275例前列腺癌患者和500例正常对照者STK15 Phe31 Ile基因型,比较不同基因型与前列腺癌危险性及其病理特征的关系。结果STK15 Phe31 Ile三种基因型(Phe/Phe、Phe/Ile、Ile/Ile)在病例组的分布频率分别为21.4%、24.6%和54.0%,在对照组分别为25.6%、39.7%和34.7%,分布差异具有显著性(P=0.024)。携带STK15 Ile/Ile基因型者患前列腺癌的风险比携带STK15 Phe/Phe基因型者增加174%(OR=2.67,95%CI=1.143～6.593),此种风险的增加在吸烟患者中更为显著(OR=5.429,95%CI=1.478～24.542)。未现STK15 Phe31 Ile基因多态与前列腺癌病理特征相关。结论 STK15 Phe31 Ile基因多态可能是前列腺癌的遗传易感因素。

STK15 mRNA在胃癌组织中表达的实验研究

目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)mRNA在胃癌组织中的表达情况。方法:采实时荧光定量PCR法分别对70例胃癌组织、35例胃癌旁正常组织、30例不典型增生胃组织中的STK15的mRNA表达进行检测。并探讨STK15mRNA水平和胃癌临床病理特征间的关系。结果:胃癌组织中STK15 mRNA表达明显高于胃癌旁正常组织、不典型胃增生组织(P<0.05);胃癌旁正常组织与不典型胃增生组织比较,STK15mRNA表达差异不显著(P>0.05);STK15 mRNA胃癌中表达在浸润程度T3~T4、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者中表达较高,与T1~T2、Ⅰ~Ⅱ期患者比较差异有统计学意义(P<0.05);STK15 mRNA胃癌中表达在性别、年龄、分化程度、肿瘤大小组内比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:STK15 mRNA在胃癌组织中表达较高,可以成为胃癌细胞特异性指标;STK15mRNA高表达与胃癌恶性程度及进展有关。

STK15基因RNA干扰真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞侵袭的影响

目的构建STK15基因特异的RNA干扰(RNAi)真核表达质粒,将其转染人结肠癌细胞SW480后,观察对STK15基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法设计并合成能表达小发夹结构RNA(shRNA)的DNA序列,退火后与载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建重组表达载体pGPU6/GFP/NeoSTK15 shRNA,转化DH5α菌株后挑选阳性克隆,提取质粒进行序列测定。脂质体介导重组质粒转染人结肠癌SW480细胞,于转染后24 h和48 h通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法分别在mRNA和蛋白水平检测STK15基因的表达,并通过细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭能力。结果测序证实插入pGPU6/GFP/Neo载体的DNA序列、方向和位点均正确。与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15 shRNA质粒转染细胞24 h和48 h后,STK15基因的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,且呈现时间依赖性,STK15 mRNA水平分别下调80%和98%,蛋白水平分别下调40%和80%。与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15shRNA质粒转染细胞的侵袭能力分别下降约67%和89%。结论成功构建了针对STK15基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制STK15基因的表达和细胞的侵袭能力,为进一步研究STK15基因功能以及探讨结肠癌治疗的新途径奠定了基础。

STK15基因在胃癌中高表达的研究

目的研究胃癌中STK15基因的mRNA表达水平。方法提取52例胃癌组织样本及相应癌旁正常组织的RNA,反转录合成cDNA,以β-actin为内对照,进行PCR扩增,产物进行电泳,应用软件分析电泳结果。结果在检测的52例胃癌中,有31例(60%)存在STK15基因的高表达,经统计学分析,肿瘤组与对照组差异显著(P<0.01)。结论胃癌中存在STK15基因mRNA的高表达,这可能是导致胃癌发生的多因素之一。

喉鳞状细胞癌中STK15蛋白和BUBR1蛋白的表达及相互作用

目的探讨STK15和BUBR1蛋白的表达与喉癌发生、发展的相关性以及喉癌组织中STK15和BUBR1蛋白的相互作用。方法选取40例病理诊断为喉鳞状细胞癌组织标本及癌旁正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测STK15和BUBR1蛋白的表达水平,应用免疫荧光双标实验判定STK15和BUBR1蛋白的共定位。结果 STK15蛋白平均光密度值喉癌组织高于癌旁正常组织(P<0.05),BUBR1蛋白平均光密度值喉癌组织低于癌旁正常组织(P<0.05),即喉癌组织中STK15蛋白表达水平高于癌旁正常组织,而BUBR1蛋白表达水平低于癌旁正常组织。免疫荧光双标结果表明STK15蛋白和BUBR1蛋白均在细胞质及细胞核中表达,且2种蛋白标记的荧光可以重叠,提示两者可能存在相互作用。结论 STK15蛋白高表达、BUBR1蛋白表达下调可能与喉癌的发生、发展相关。STK15和BUBR1蛋白可能相互作用,共同影响喉癌的发生、发展。

STK15转基因小鼠模型的建立

STK15基因是丝/苏氨酸激酶家族成员之一,其扩增和高表达能引起中心体复制扩增,染色体不稳定性增加,最终导致细胞的恶性转化,从而诱发恶性肿瘤。而且,STK15基因在多种恶性肿瘤组织中都具有高表达。目前,研究者们都是通过取人体不同部位的肿瘤组织来研究STK15基因与恶性肿瘤发生发展的关系,本次实验首次以建立STK15转基因小鼠模型,来进一步研究STK15基因与恶性肿瘤的关系,为今后的基因诊治提供理论基础。实验方法是首先提取人胚肺细胞总RNA作为模版,根据GenBank中STK15基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术扩增出1200bp的STK15基因片段,克隆到pTZ57R/T载体,通过测序证实序列的正确性。用BamH1和XbaI双酶切载体pcDNA3.1和pTZ57R/T载体-STK15,然后回收、连接pcDNA3.1-STK15、转化、鉴定,从而成功构建了pcDNA3.1-STK15表达载体。然后对小鼠进行超排获得其原核期胚胎,应用显微注射法进行转基因操作,结果是注射成功率77%(701/907),移植鼠共30只,新生小鼠为106只,PCR检测转基因阳性为3只,经过Southern杂交检测有1只转基因阳性鼠,从而建立了转STK15的转基因小鼠模型。通过建立STK15肿瘤动物模型,找出与人类肿瘤相近的病理生理变化以及控制这些变化的遗传基础,为今后所有的恶性肿瘤的基因诊治提供坚实、有力的理论依据。

STK15在乳癌组织中的表达

目的探讨乳癌组织中癌基因STK15的表达情况。方法应用免疫组化SP法检测41例乳癌及30例乳腺纤维瘤组织中STK15蛋白的表达。结果 STK15蛋白在乳癌和乳腺纤维瘤组织中的阳性表达率分别为68.3%(28/41)、36.7%(11/30),二者之间差异有显著性(χ2=6.999,P<0.05)。STK15蛋白表达与乳癌的TNM分期及组织学分级有关(χ2=8.794、8.261,P<0.05),且STK15蛋白阳性表达强度与乳癌病人的TNM分期有关(χ2=5.895,P<0.05)。结论乳癌组织中存在STK15基因高表达,STK15基因可能是导致乳癌发生的因素之一。

STK15在喉鳞状细胞癌中的表达

目的:研究癌基因STK15在喉鳞状细胞癌中的表达,探讨STK15与喉鳞状细胞癌的相关性。方法:应用SP免疫组织化学法检测40例喉鳞状细胞癌及30例声带息肉中STK15的蛋白表达。结果:STK15在喉鳞状细胞癌和声带息肉中的阳性率分别为67.5%(27/40)、33.3%(10/30),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。STK15蛋白表达与喉鳞状细胞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与喉鳞状细胞癌病理学分级、原发部位及患者的性别、年龄无关(P>0.05),且STK15蛋白阳性表达强度与喉鳞癌患者的TNM分期有关(P<0.05)。结论:STK15在喉鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为喉鳞状细胞癌基因治疗的新靶点。

STK15在恶性肿瘤中的研究进展

中心体这一微小的细胞器，在有丝分裂中对维持细胞的极性及染色体分离具有重要的调节作用。目前的研究表明中心体异常在人类恶性肿瘤中普遍存在。作为一种中心体相关激酶，STK15与恶性肿瘤的发生之间存在着极其密切的联系，其活性的改变会引起中心体扩增、染色体不稳定及细胞的转化。本文主要介绍目前STK15在部分人类恶性肿瘤中的研究进展。

STK15的表达对NIH3T3细胞的影响

目的构建pcDNA3.1-STK15表达质粒,探讨STK15基因对小鼠成纤维细胞(NIH3T3)的影响。方法构建pcDNA3.1-STK15质粒,将其转染NIH3T3,应用RT-PCR、免疫细胞化学和Western印迹方法检测STK15的表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力。结果转染pcDNA3.1-STK15质粒的NIH3T3细胞在48 h有STK15的表达,而且该细胞的增殖速度和穿透Matrigel胶的细胞数均明显高于对照组(P<0.05)。结论STK15基因具有增加细胞增殖和细胞侵袭力的功能,进而形成肿瘤。