SVLBP重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断的研究

目的研究日本血吸虫极低密度脂结合蛋白重组抗原(reSVLBP)在血吸虫病诊断中的应用价值及现场推广前景。方法以reSVLBP为抗原建立reSVLBP-ELISA,检测血吸虫病人及其它寄生虫感染者血清中特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行平行检测和比较。结果reSVLBP抗原和SEA对血吸虫的敏感性分别为90.5%和97.3%(P>0.05),两者对血吸虫的特异性分别为100%和77.0%(P<0.05);reSVLBP与肺吸虫、姜片虫血清未见交叉反应,与华支睾吸虫、蛔虫、鞭虫感染者血清的交叉反应率分别为20.0%、20.0%、10.0%。SEA对肺吸虫和姜片虫病人血清的交叉反应率分别为29.4%和16.7%,与华支睾吸虫、蛔虫、鞭虫感染者血清的交叉反应率分别为26.7%、30.0%、20.0%。结论reSVLBP作为诊断抗原具有很高的特异性,与其它寄生虫的交叉反应少,敏感性与SEA相近,在血吸虫病诊断中具有一定的应用前景。

日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究

目的探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白(SVLBP)重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原,以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原;将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠,每隔2周免疫1次,在第3次免疫后10d,经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条,感染后45d剖杀,计数检获虫数和每克肝虫卵数(LEPG)。小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血,用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平。结果相对于佐剂对照组,免疫组小鼠的减虫率为33.4%,减卵率为47.6%;免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG(>1:6400);抗体亚类检测结果显示,免疫组小鼠IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组。结论日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子。

重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白 (SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法 SVLBP基因亚克隆入pQE - 30表达载体 ,克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白 ;非变性条件下制备克隆菌裂解液 ,用亲和层析法纯化重组蛋白 ;用Westernblot鉴定其抗原性 ;纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清 ;以SVLBP重组蛋白为抗原 ,ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果 克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白 ;该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体 ,抗体滴度为 1∶6 4 0 0 ;SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应 ;以该蛋白为抗原检测 36人份血吸虫感染者血清 ,阳性率为 83.3% ,5 0人份健康人血清 ,假阳性率为 2 % (1/5 0 ) ,10人份肺吸虫病人血清 ,1例阳性 ,交叉反应率为 10 % (1/10 )。结论 SVLBP重组蛋白有较好的抗原性 ,以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体 ,敏感性和特异性均较高 ,具有一定的诊断价值。