BMP2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的 研究BMP2在室管膜前下区 (SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用 ,提高SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。方法 体外分离培养SVZa神经干细胞 ,以不同浓度的BMP2诱导SVZa神经干细胞 ,采用免疫荧光和流式细胞仪技术 ,检测SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果 BMP2浓度为 1～ 10ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例均高于 0ng ml ,10ng ml时达到最高峰 ,2 0～ 10 0ng ml时SVZa神经干细胞分化为神经元的比例亦高于 0ng ml,但呈下降趋势。结论 BMP2可以促进SVZa神经干细胞向神经元分化 。

BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的调控作用

目的研究BMP2在SVZa神经干细胞向γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化中的调控作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠室管膜下区(SVZa)神经干细胞,纯化传代培养3代后,使用不同浓度BMP2诱导SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测不同浓度BMP2作用下SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例;另外利用活体荧光GFP标记GAD67特异性启动子,动态地研究BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用。在此基础之上,采用RT-PCR检测不同浓度BMP2作用下Mash1的表达。结果不同浓度BMP2作用组分化为GABA能神经元的比例均高于空白对照组,10 ng/ml浓度的BMP2组比例最高;10 ng/ml浓度BMP2组,GAD67-GFP标记阳性细胞数目明显高于对照组;10ng/ml浓度BMP2组Mash1表达高于其他组。结论BMP2促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元的分化;10 ng/ml浓度的BMP2显著促进Mash1的表达。

Id2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠SVZa神经干细胞,正义Id2、反义Id2真核表达质粒转染SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Id2作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。采用Western blot检测不同浓度的骨形成蛋白2(bonemorphogenenticprotein2,BMP2)诱导下Id2蛋白的表达变化。结果正义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例小于空白对照组,反义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;随着BMP2浓度的增加,Id2的表达增加。结论Id2抑制体外培养的P0SVZa神经干细胞向神经元方向分化,BMP2可以促进SVZa神经干细胞Id2的表达,它们共同参与调控SVZa神经干细胞向神经元分化的过程。

人参皂甙Rg1、Rb1对SVZa-NSCs增殖的影响及其与STAT3的关系

目的:研究人参皂甙Rg1、Rb1对体外培养大鼠SVZa-NSCs(室管膜前下区神经干细胞)增殖的影响及其与STAT3(信号转导与转录激活因子3)的关系。方法:采用体外细胞培养法对大鼠SVZa-NSCs分离、培养,用细胞计数法和MTT法测定人参皂甙Rg1、Rb1对NSCs增殖的影响,并寻找促进NSCs增殖的人参皂甙Rg1、Rb1最佳浓度和最佳时间;用免疫细胞化学法检测STAT3的表达和阳性细胞百分比,NSCs增殖与JAK/STAT通路的关系。结果:人参皂甙Rg1、Rb1能够促进SVZa-NSCs的增殖,其最佳浓度为40μM、最佳时间为4d。与对照组比较,人参皂甙Rg1、Rb1明显促进STAT3的表达和阳性细胞百分比增加(P<0.01)。结论:人参皂甙Rg1、Rb1对内源性NSCs的增殖、分化有较大价值,为中枢神经系统损伤修复提供实验基础理论。

Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达

目的:研究Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况。方法:取P0昆明小鼠全脑组织,冰冻切片,切片厚度为20μm,行免疫荧光双标检测Nestin和Wnt1在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况,行免疫荧光单标检测β-catenin小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况。结果:Nestin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间;Wnt1在OB表达最高,在RMS表达最低,在SVZa的表达介于OB和RMS之间;β-catenin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间。结论:随着SVZa神经干细胞从SVZa向OB迁移,Nestin和β-catenin表达逐渐减低;Wnt1在迁移终点OB高表达,在RMS迁移途中表达最低;Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的不同表达可能与SVZa神经干细胞增殖、分化有关。

Mash-1在大鼠SVZa神经干细胞迁移流的发育学表达

目的了解在大鼠脑发育过程中,mash-1在SVZa神经干细胞迁移流通路中三个不同脑区内的表达模式。方法用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察在胚胎14d(E14),出生后0d(P0),生后7d(P7)3个不同发育阶段大鼠SVZa、RMS、OB3个区域mash-1的表达情况。结果RT-PCR显示在大鼠脑发育过程中SVZa、RMS、OB三个区域mash-1的mRNA均有不同程度的表达,在出生前后(P0)表达最高;免疫组化显示在大鼠脑发育成熟过程中,mash-1表达水平呈现复杂的时空表达模式,在胚胎期SVZa神经干细胞迁移流通路中表达密集,P0时期在嗅球有较高的表达,P7以后mash-1的表达水平普遍下降。结论mash-1可能主要参与调节大鼠SVZa神经干细胞分化过程,对其迁移和增殖也可能具有积极影响。

碱性成纤维细胞生长因子促进脑室管膜前下区细胞增殖的实验研究

目的:观察从室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)沿喙侧迁移流(rostralmigratorystream,RMS)至嗅球通路上碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的表达情况。方法:应用地高辛标记的酶标原位杂交技术显示新生7d大鼠脑内室管膜前下区经迁移流至嗅球区域中bFGFmRNA的表达情况。结果:新生7d大鼠的脑内广泛表达bFGFmRNA,尤以SVZa,RMS和嗅球区域最为明显,其强度又以SVZa最强,阳性细胞数量最多,密度最大,嗅球最弱。在嗅球区阳性产物主要沉积在细胞质内,而在SVZa和RMS区则以核内较多。结论:bFGF对于维持SVZa区神经干细胞(neuralstemcell,NSC)的增殖状态密切相关,而NSC为了保持自身的增殖状态则表达了较高含量的bFGF。在SVZa区bFGF主要以促进细胞增殖为主,而在嗅球区bFGF则以促进细胞分化为主。

人参皂甙Rg1对大鼠室管膜前下区神经干细胞的保护作用研究

目的:探讨人参皂甙Rg1对大鼠室管膜前下区神经干细胞(SVZa NSCs)的保护作用及其与STAT3关系。方法:采用体外细胞培养法对胚胎大鼠SVZa NSCs分离、培养,建立SVZa NSCs谷氨酸中毒模型,相差显微镜下观察细胞形态变化,用台盼蓝排斥试验和MTT试验检测存活率,用TUNEL试验检测凋亡率;用免疫细胞化学法检测STAT3阳性细胞百分比表达。结果:人参皂甙Rg1能够明显提高谷氨酸损伤SVZa NSCs的存活率;可以提高损伤细胞STAT3阳性细胞百分比的表达。结论:人参皂甙Rg1对谷氨酸兴奋性中毒的SVZa NSCs有保护作用,其作用机制可能与增加STAT3表达有关。

DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达

目的探讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用。方法运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式。结果从空间上看,Id2在RMS表达始终最高,SVZa次之,在OB表达最弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱。结论Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用。

Wnt-1对室管膜前下区神经干细胞体外分化的影响

目的探讨室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞体外分化过程中,Nestin和Wnt-1表达的变化,以及Wnt-1对SVZa神经干细胞体外分化的影响。方法以免疫荧光染色方法观察在SVZa神经干细胞体外分化过程中,Nestin和Wnt-1在不同时间点的表达水平,同时以基因转染方法增强SVZa神经干细胞Wnt-1表达,观察Nestin、Wnt-1和Mash-1的表达以及神经元分化比例的改变。结果⑴Nestin主要表达于SVZa神经干细胞分化的早期阶段,随着细胞的分化和成熟,Nestin的表达迅速减弱。⑵SVZa神经干细胞贴壁分化2h即有Wnt-1表达,其表达高峰在细胞分化开始后12h,以后随着细胞分化的进行而迅速降低。⑶SVZa神经干细胞转染Wnt-1基因后,Nestin的表达减弱,Mash-1的表达增强,神经元的分化比例增高,Mash-1的增强与神经元分化之间有很高的一致性。结论⑴Wnt-1表达于SVZa神经干细胞分化过程之中,在细胞分化成熟后则不表达,Wnt-1可能参与调节SVZa神经干细胞的体外分化,并可作为神经干细胞处于分化状态的标志。⑵SVZa神经干细胞转染Wnt-1后表达Mash-1增强,并更多分化为神经元,Wnt-1可能通过Mash-1途径促使SVZa神经干细胞向神经元方向分化。

Mash1在室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究Mashl在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,原位杂交检测Mashl在SVZa神经干细胞的表达;构建Mashl与绿色荧光蛋白(GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP活体荧光标记SVZa神经干细胞;采用细胞计数和流式细胞仪检测在Mashl作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。结果体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞Mashl原位杂交检测阳性;Mashl-GFP+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;Mashl-GFP-组 SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组。结论体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞表达Mashl;Mashl可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化。