LTD4及MK571对人结肠癌细胞SW480、Caco-2凋亡和增殖作用的体外研究

目的 观察半胱氨酰白三烯D4（LTD4）及半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂MK571对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;PI染色细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 12.5 ～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌SW480细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6～12.5μg/L的LTD4处理24、48 h,对SW480细胞的增殖抑制作用无明显影响,作用时间延长至72 h,可促进SW480细胞的增殖.50～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6-50 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.6.25～200 μmol/L的MK571对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8 ～ 6.25 μmol/L的MK571对SW480细胞的影响与对照组相比无明显差异.25～ 200 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8～ 25 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4对2种结肠癌SW480细胞和Caco-2细胞有促凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;而100、200 μmol/L的MK571对2种结肠癌的凋亡无明显作用.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4可以降低2种结肠癌细胞株G0/G1期比例,增加G2/M及S期比例;而100、200 μmol/L的MK571增加2种结肠癌细胞G0/G1期的比例,降低G2/M及S期比例.结论 LTD4具有促进人结肠癌SW480、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能的作用机制是抑制凋亡、增加G2/M及S期细胞比例.MK571可抑制2种结肠癌细胞株的增殖,但对凋亡无明显影响,其抑制增殖作用的可能机制是阻滞细胞于G0/G1期.

MK886对人结肠癌细胞SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响

目的:观察5-脂氧合酶活化蛋白(5-lipoxygenase activating protein,FLAP)抑制剂MK886对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L MK886作用24、48、72 h对S W480和C a c o-2细胞的抑制率;A n n e x i n V-F I T C/P I双染流式细胞术检测12.5、25、50、100μmol/L MK886作用72 h的结肠癌细胞凋亡率;流式细胞仪检测12.5、25、50μmol/L MK886作用72 h的结肠癌细胞周期.结果:50μmol/L到200μmol/L的MK886对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而12.5μmol/L到25μmol/L浓度的MK886处理24 h后,对SW480细胞无明显作用,延长时间至48、72 h后,作用有统计学意义,且同样存在时效和量效依赖性;6.25μmol/L的MK886对SW480细胞无抑制作用.25μmol/L到200μmol/L的MK886对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而6.25μmol/L到12.5μmol/L浓度的MK886对Caco-2细胞无抑制作用.200μmol/L MK886作用24h即可明显抑制SW480、Caco-2两种结肠癌细胞株的增殖,抑制率接近90%.12.5μmol/L到100μmol/L浓度的MK886对两种结肠癌SW480和Caco-2细胞有凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;12.5μmol/L到50μmol/L浓度的MK886可以增加两种结肠癌SW480和Caco-2细胞G0/G1期比例,降低S期比例.结论:MK886具有显著的抑制人结肠癌SW48-0、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能是通过阻滞细胞于G0/G1期,并诱导肿瘤细胞凋亡所致.

METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

目的:探究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/Wnt/β-连环蛋白(BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin)轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法:选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者,收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织,用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达,用Pearson法分析CRC组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480,分为sh-NC组、sh-RNASEH1-AS1组、NC组、sh-METTL组、si-NC组、si-BUD13组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2组、sh-METTL+pc-NC组、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组,用Lipofectamine?2000转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2、sh-METTL+pc-NC、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1分别转染SW480细胞,用qPCR法检测后SW480细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2的表达,细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480细胞的增殖能力,FCM术检测转染后各组SW480细胞的凋亡情况,细胞划痕实验检测转染后各组SW480细胞的迁移能力,WB法检测转染后各组SW480细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白表达,RNA免疫沉淀(RIP)法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果:数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR法检测结果均显示,与癌旁组织相比CRC组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β均呈明显高表达(均P<0.01),且RNASEH1-AS1表达与METTL3(r=0.698,P<0.01)、BUD13(r=0.784,P<0.01)的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3可抑制SW480的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达,促进其凋亡(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1则可促进SW480增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡(均P<0.05);RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达(均P<0.05);过表达ANXA2可部分逆转敲减RNASEH1-AS1对SW480细胞的影响(均P<0.05)。结论:METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。

PMS2通过ERK/ERCC1通路对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的:探讨减数分裂后分离蛋白2(PMS2)表达对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响,阐明PMS2与切除修复交叉互补组1(ERCC1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路的关系。方法:将PMS2 siRNA质粒和PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌SW480细胞(分别为PMS2敲减组和PMS2过表达组),同时设PMS2敲减对照组(siRNA-NC组)和PMS2过表达对照组(PMS2 control组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中PMS2 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PMS2蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率。通过String数据库,对PMS2、ERCC1和ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。SW480细胞分别采用3条siRNA进行PMS2和ERCC1敲减,采用RT-qPCR法验证PMS2与ERCC1的相互作用,采用Western blotting法检测各组细胞中PMS2、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),侵袭细胞数明显增加(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显降低(P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。蛋白-蛋白互作(PPI)富集P值为2.09e-07,包含ERCC1和ERK1/2等相互作用节点数共有13个,提示PMS2、ERCC1和ERK1/2之间可能存在调控作用。与siRNA-NC组比较,各PMS2敲减组细胞中ERCC1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与siERCC1-NC组比较,各ERCC1敲减组细胞中PMS2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:PMS2表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力。PMS2与ERCC1存在互相作用关系,并可通过调节ERCC1参与ERK信号转导通路。

苦参碱抑制人大肠癌SW480细胞环氧化酶-2的表达

目的探讨苦参碱(MT)对人大肠癌SW480细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响。方法采用MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,采用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting等方法检测不同浓度(0.25～2.0mg/mL)苦参碱对细胞COX-2表达的影响。结果MT抑制SW480细胞增殖呈剂量和时间依赖性,其48hIC50=0.516mg/mL。倒置显微镜下以及细胞爬片HE染色可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,形成"印戒"细胞。苦参碱可抑制SW480细胞的COX-2 mRNA、蛋白表达水平。结论MT在体外能抑制SW480细胞的增殖,其抑制作用具有明显的量效和时效关系。苦参碱具有抑制SW480细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在时间范围(8～72h)内,表现出时效关系。

青藤碱对BALB/c-nu/nu裸小鼠高侵袭性人结肠癌SW 480移植瘤增殖及环氧合酶-2表达的影响

目的观察青藤碱对高侵袭性人结肠癌细胞株SW 480移植瘤细胞周期及结肠瘤体组织中环氧合酶-2(COX-2)表达的影响,研究青藤碱防治结肠癌的机制。方法先用5只免疫功能正常的BALB/c-nu/nu裸小鼠建立高侵袭性人结肠癌瘤源,3周后取直径约2 mm的瘤块移植于20只免疫缺陷的BALB/c-nu/nu2裸小鼠回盲浆膜凹龛部,1周后再随机分为结肠癌组和青藤碱组。青藤碱组按10 m L/(kg·d)灌10%青藤碱治疗30 d,结肠癌组灌0.9%氯化钠注射液对照。测量BALB/c-nu/nu裸小鼠结肠瘤体积、瘤质量并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪检测结肠瘤体组织SW 480细胞在G1、G2、M和S期的细胞周期比例;免疫组化法检测结肠瘤体组织COX-2的表达,RT-PCR法检测COX-2 m RNA表达。结果与结肠癌组比较,青藤碱组结肠瘤体积、瘤质量及S期细胞比值明显降低、G1、G2期细胞比值提高,肿瘤抑制率为(39.75%)(P<0.05);COX-2和COX-2 m RNA低表达(P<0.05)。结论青藤碱可能在G1、G2和S期诱导SW 480细胞阻滞、抑制结肠癌细胞株SW 480细胞的有丝分裂,并通过下调COX-2表达而间接影响癌细胞的增殖,具有抗高侵袭性人结肠癌的作用。

姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究

目的:探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制。方法:通过MTT检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60μmol/L)处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60μmol/L)处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况。结果:姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达(P<0.05),而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关。

EGCG对LoVo和SW480结肠癌细胞株的作用及对Notch1与Notch2基因表达的影响

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用,研究其对Notch1与Notch2的基因表达的影响.方法:体外培养LoVo细胞和SW480细胞,采用不同浓度的EGCG(10、20、35mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞细胞凋亡和细胞周期的影响.实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的LoVo细胞和SW480细胞的Notch1与Notch2基因的表达情况.结果:MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖均具有抑制作用,且呈浓度依赖性,不具有时间依赖性.流式细胞仪检测EGCG能增强LoVo细胞和SW480细胞的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,抑制其细胞增殖.实时荧光定量PCR检测EGCG能下调两株细胞Notch2的基因表达,而SW480细胞的Notch1基因表达有下调的趋势,LoVo细胞的Notch1基因表达有上调的趋势,但差异均无显著意义.结论:EGCG对体外培养的LoVo细胞和SW480细胞的增殖有明显抑制作用,且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期,其作用机制可能与下调Notch2的基因表达及激活Notch信号转导途径有关,但是EGCG对Notch1基因表达的影响尚需要做进一步探讨.

藏药湿生扁蕾对人结肠癌SW480细胞凋亡调控因子Bcl-2及Bax的mRNA表达的影响

目的:探讨藏药湿生扁蕾对SW480细胞凋亡调控因子Bcl-2mRNA及BaxmRNA表达的影响。方法:SW480细胞接种于6孔培养板中,24 h后分别以不同浓度(250、500、1000μg/ml)的湿生扁蕾干预,继续培养24h后,提取每组总RNA,以GAPDH和β-actin基因为内参,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Bax的mRNA表达水平。结果:Bcl-2 mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而减少,而Bax mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而增加,并呈现明显的剂量依赖关系。结论:藏药湿生扁蕾干预SW480细胞凋亡与其抑制Bcl-2的表达和促进Bax的表达有关。

Peroxiredoxin 2基因慢病毒载体的构建及对结直肠癌SW480细胞增殖的影响

目的:构建Peroxiredoxin 2(Prdx2)基因慢病毒表达载体,建立能够稳定高表达Prdx2的结直肠癌SW480细胞株,研究Prdx2的高表达对SW480细胞生长增殖的影响。方法:利用PCR扩增Prdx2编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin(GV218)中,构建Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)慢病毒表达载体,包装产生慢病毒颗粒,鉴定后将其转染SW480细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测SW480细胞中Prdx2的mRNA和蛋白水平表达情况;MTT法检测细胞生长情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:构建的重组慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)经鉴定正确;慢病毒转染SW480细胞后,细胞中Prdx2在mRNA和蛋白水平高表达。MTT法及平板克隆形成实验结果显示Prdx2高表达的SW480细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:成功构建Prdx2基因慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin,筛选出稳定高表达Prdx2的SW480细胞株;高表达的Prdx2分子可显著促进结直肠癌SW480细胞增殖。

灵芪胶囊对直结肠癌SW480细胞bcl-2表达的研究

目的:针对直结肠癌相关基因bcl-2,观察灵芪胶囊抑制肿瘤作用机理。方法:SW480细胞体外培养,应用real-time PCR检测bcl-2 RNA的含量。结果:灵芪胶囊抑制bcl-2 mRNA表达。结论:灵芪胶囊具有抑制人源性直结肠癌SW480细胞作用,其作用机制可能与bcl-2有关。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

siRNA沉默RAD18抑制结肠癌SW480细胞FANCD2蛋白泛素化并增强其对丝裂霉素C的敏感性

目的:研究RAD18特异性siRNA对结肠癌SW480细胞FANCD2泛素化和对化疗药物丝裂霉素C敏感性的影响。方法 :RAD18特异性siRNA转染SW480细胞后用丝裂霉素C处理,通过Western blot检测细胞RAD18及FANCD2泛素化的表达,MTT法检测干扰RAD18后细胞对丝裂霉素C的敏感性。结果:RAD18特异性siRNA转染SW480细胞96 h后,RAD18基因的表达明显降低,导致经丝裂霉素C处理后FANCD2泛素化表达明显降低;siRAD18组细胞对丝裂霉素C的敏感性显著增强。结论 :抑制RAD18蛋白表达能延缓结肠癌细胞FANCD2泛素化表达,并增强SW480细胞对丝裂霉素C的敏感性。

消痰通腑方对结肠癌SW480细胞磷脂酶A2、环氧合酶2表达及细胞生物学行为的影响

目的观察消痰通腑方对结肠癌SW480细胞增殖、迁移的影响,探讨其分子作用机制。方法采用不同浓度消痰通腑方作用结肠癌SW480细胞,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,RT-q PCR检测磷脂酶A2(PLA2)和环氧合酶2(COX-2)m RNA表达,Western blot检测PLA2和COX2蛋白表达,RNA干扰技术沉默SW480细胞株中PLA2基因表达。结果消痰通腑方低、高剂量组较对照组结肠癌SW480细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),克隆形成率及迁移能力明显下降(P<0.05,P<0.01),PLA2、COX-2 m RNA和蛋白表达均明显下调(P<0.05),并呈浓度依赖性;与质粒对照组和对照组比较,PLA2 sh RNA干扰组细胞PLA2和COX2蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论消痰通腑方可抑制结肠癌SW480细胞增殖和迁移,其机制可能与PLA2及COX-2的表达下调有关。

miR-126对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、周期及SOX2表达的影响

目的探讨miR-126通过靶向调控SOX2表达影响结肠癌细胞的增殖和凋亡。方法脂质体Lipofectamine^(TM)2000将miR-126 mimics和miR-126 NC转入SW480细胞中,RT-PCR法检测miR-126表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR法及western blot检测细胞中SOX2蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果与miR-126 NC组比较,miR-126 mimics组miR-126表达量显著提高(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均显著提高(P<0.01),细胞周期阻滞于G1期(P<0.01),同时miR-126 mimics能够靶向下调SOX2蛋白及mRNA表达(P<0.01)。结论 miR-126 mimics通过靶向下调SOX2表达进而抑制SW480细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

低氧培养的SW480细胞中NDRG1和MMP-2的表达

目的观察低氧对结肠癌SW480细胞中NDRG1、MMP-2蛋白表达的影响。方法分别在常规(常氧组)和低氧(低氧组)条件下培养结肠腺癌SW480细胞。运用免疫细胞化学染色法检测2组NDRG1蛋白表达,并用图像分析仪测光密度值(OD值);ELISA法检测MMP-2表达。结果低氧组细胞NDRG1呈强阳性表达,而常氧组表达较弱,低氧组细胞NDRG1蛋白表达水平(0．1634-4-0．0079)显著高于常氧组(0．1358±0．0027)(P<0．05);MMP-2表达也显著高于常氧组(P<0．01)。结论低氧诱导了SW480细胞NDRG1、MMP-2表达上调。

miR-126-5p靶向Notch2对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨miR-126-5p对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法:用miR-126 mimic和pcDNA Notch2(pc-Notch2)等分别或同时转染结肠癌SW480细胞,用qPCR法检测miR-126-5p和Notch2的表达;荧光素酶报告实验观察miR-126-5p和Notch2的靶向关系;CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室法和Annexin V/PI染色流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,Western blotting检测Notch2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达。结果:转染miR-126 mimic能显著升高SW480细胞miR-126-5p的表达水平(P<0.01)和显著抑制SW480细胞Notch2的表达(P<0.01),同时证实Notch2上存在miR-126-5p的结合位点。上调miR-126-5p显著抑制SW480细胞增殖并降低PCNA的表达水平(P<0.01)、升高细胞凋亡率和cleaved Caspase-9的表达水平(均P<0.01),pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic对SW480细胞增殖和凋亡的调控作用;miR-126 mimic显著降低SW480细胞划痕愈合率和穿膜细胞数(均P<0.01)、抑制MMP-2和MMP-9的表达(P<0.01);pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic对SW480细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用(均P<0.01)。结论:miR-126-5p通过抑制Notch2表达,降低结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。

Prdx2基因表达情况对结直肠癌SW480细胞影响作用分析

目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prdx2)基因表达对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法采用慢病毒空载体(空白组)、干扰片段(Prdx2-shRNA)慢病毒载体转染结直肠癌SW480细胞(实验组),野生型结直肠癌SW480细胞作为对照组,分别于转染后培养24 h、48 h、72 h、96 h、120 h采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,采用流式细胞仪技术检测培养120 h后细胞的凋亡率,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRt-PCR)及Westernblot法检测Prdx2、Survivin mRNA及蛋白的表达,采用Transwell侵袭实验检测SW480细胞的侵袭能力。结果实验组的W480细胞凋亡率显著高于空白组和对照组(P<0.05),培养48 h、72 h、96 h、120 h,实验组的W480细胞增殖能力明显低于空白组和对照组(P<0.05),实验组的SPrdx2、Survivin mRNA及蛋白相对表达水平显著低于空白组和对照组(P<0.05);Transwell侵袭实验结果显示,实验组的转染结直肠癌SW480细胞侵袭能力强于空白组和对照组(P<0.05)。结论 Prdx2基因沉默会抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、促进凋亡,但是会增强结直肠癌SW480细胞的侵袭能力。

基于UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于泛素样修饰激活酶2(UBA2)/磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探究蔓荆子黄素对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 取对数生长期的SW480细胞,对照组细胞常规培养,蔓荆子黄素组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素培养,UBA2抑制剂组细胞加入0.5μmol/L UBA2抑制剂培养,蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素和0.5μmol/L UBA2抑制剂共培养。CCK-8实验检测细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞的单克隆形成能力,划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell实验观察细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞中UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8实验和克隆形成实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养72 h后的细胞增殖吸光度OD值明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),细胞克隆形成数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养不同时间的细胞增殖吸光度OD值和细胞克隆形成数量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。划痕实验和Transwell实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组划痕间距均明显宽于蔓荆子黄素组(P均<0.05),穿膜细胞数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。蔓荆子黄素组、UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组UBA2、PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 蔓荆子黄素可能通过抑制UBA2/PTEN/PI3K/Akt信号通路发挥抗结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞周期的阻滞作用

背景与目的:前期研究表明,二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)能有效在体内外抑制人结肠癌细胞增殖,并将细胞阻滞于G2/M期。本实验旨在进一步探讨DADS对人结肠癌SW480细胞周期阻滞作用的可能机制。方法:采用MTT、细胞计数法检测DADS对SW480细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DADS对SW480细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测DADS作用后PCNA、P53表达情况,蛋白印迹法分析P21WAF1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)表达的改变。结果:不同浓度DADS作用SW480细胞24、48、72h后,对细胞增殖的抑制作用及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加。流式细胞仪分析结果显示,DADS作用SW480细胞后,G0/G1期细胞含量降低,S期细胞比例变化不大,而G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加和处理时间的延长,其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。DADS作用后,免疫细胞化学检测显示,PCNA、P53蛋白表达明显下降。蛋白印迹分析显示,DADS作用SW480细胞后,Cyclin B1蛋白表达明显下降,P21WAF1蛋白的表达明显升高,均呈时间效应关系。结论:DADS可能通过下调PCNA、P53、Cyclin B1蛋白表达,上调P21WAF1蛋白表达引起SW480细胞G2/M期阻滞。