Pro-apoptotic Effects of OSNQ on Human Colon Cancer SW480 Cells

[Objectives] The aim was to elucidate the pro-apoptosis mechanism of naphthoquinone derivative 2-octyl sulfoxide-1,4-naphthoquinone(OSNQ) on human colon cancer SW480 cells.[Methods]The cytotoxic effect of OSNQ on colon cancer SW480 cells was detected by MTT colorimetry.The pro-apoptotic effect of OSNQ on human colon cancer SW480 cells was detected by Annexin V-FITC/PI double staining.The changes in expression of apoptosis-related proteins were detected by Western blot.[Results]The results of MTT assay showed that OSNQ had a significant cytotoxic effect on colon cancer SW480 cells.The results of Western blot showed that OSNQ induced the apoptosis in colon cancer SW480 cells through promoting the expression of pro-apoptotic caspase-3 and inhibiting the expression of apoptosis-inhibiting protein Bcl-2.[Conclusions] OSNQ has a significant cytotoxic effect on colon cancer SW480 cells,and it induces the apoptosis of colon cancer SW480 cells by AKT signaling pathway.

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬

目的:探讨异莲心碱(Iso)通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:用10、20和40μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20μmol/L的Iso和25μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果:10、20和40μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下降(均P<0.05),细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调(均P<0.05),p26蛋白表达显著下调(P<0.05)。Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05);Iso组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与740 Y-P组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05)。结论:Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。

银杏叶提取物对结肠癌患者SW480细胞增殖的影响

目的 分析银杏叶提取物对结肠癌患者SW480细胞增殖的影响。方法 选择2022年1—12月新疆五家渠第六师总医院的10份结肠癌标本为研究对象,并对SW480细胞标本进行体外培养,然后实施100、200、300、400、500 mg/L浓度的银杏叶提取物进行反应,并通过CCK-8对人结肠癌SW480细胞的增殖抑制率进行检测,对比干预不同浓度的干预效果。结果 空白对照组的吸光度为(1.125±0.139),100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的吸光度分别为(1.145±0.214)、(0.943±0.018)、(0.616±0.017)、(0.571±0.039)、(0.508±0.014),200、300、400、500 mg/L浓度时的吸光度与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=4.106、11.474、12.135、13.966,P<0.05)。空白对照组的抑制率为(0.002±0.001)%,100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的抑制率分别为(3.020±0.124)%、(12.500±1.242)%、(40.000±4.252)%、(43.100±4.626)%、(45.200±4.252)%,分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=76.963、31.821、29.747、29.461、33.614,P<0.05)。100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的活性氧(reactive oxygen species,ROS)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)mRNA表达水平与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 银杏叶提取物可对结肠癌SW480细胞的增殖表现为浓度依赖性地抑制。

蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用

目的:观察蜘蛛香提取物对体外培养人结肠癌SW480细胞增殖抑制及抗转移作用。方法:观察蜘蛛香提取物(400μg/m L)及80μg/m L的5-FU(阳性对照组)对SW480细胞的影响;通过MTT法、细胞脱落实验、病理观察、流式细胞仪检测观察蜘蛛香提取物对结肠癌SW480细胞的增殖抑制、促进凋亡等作用;通过划痕和同质性黏附实验观察其抗结肠癌SW480细胞转移作用。结果:MTT法检测显示蜘蛛香提取物及5-FU均能对SW480细胞产生明显的抑制作用;病理观察发现,经蜘蛛香提取物及5-FU作用后的SW480细胞,呈明显的凋亡状态;流式细胞仪检测发现,蜘蛛香提取物能使S期和G2/M期细胞百分比增加;细胞脱落实验进一步表明,与空白对照组相比,各药物组均能增强细胞的脱落率,抑制细胞的增殖,具有极显著性差异(P<0.01);划痕和同质性黏附实验表明,蜘蛛香提取物能显著降低结肠癌SW480细胞的移动能力(P<0.05)。结论:蜘蛛香提取物对人结肠癌SW480细胞有明显的增殖抑制和抗转移作用。

番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Western blot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果 MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。

沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭

目的探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响。划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株。免疫组化和Western blot显示,45 mg.L-1DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调(P<0.05)。划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制(P<0.05)。而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显(P<0.05)。结论沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用。

藏药湿生扁蕾提取物对人结肠癌SW480细胞增殖和周期的影响

目的:探讨藏药湿生扁蕾提取物(GPM)对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的作用机制。方法:采用MTT比色法测定GPM对SW480细胞体外细胞毒活性,采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:GPM对结肠癌SW480细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用具有明显的量效关系;用GPM处理后,SW480细胞表现出明显的G1期周期阻滞。结论:GPM能够抑制人结肠癌细胞SW480细胞的生长,并可改变细胞周期分布。

DADS下调肌动蛋白解聚因子抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor,ADF)表达及肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法:MTT、划痕愈合和侵袭实验分别检测DADS对SW480细胞增殖、迁移与侵袭的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS对SW480细胞destrin与cofilinl表达的作用。结果:MTT分析显示,不同浓度DADS处理SW4go细胞24、48、72、96 h后,可呈时间-剂量依赖性抑制SW480细胞增殖(P<0.05)。划痕愈合实验显示,20、30、40、50 mg/L DADS处理48h后,细胞迁移率分别为55.51%、34.72%、23.23%、12.87%,较对照组75.86%与DMS0组72.58%明显降低(P<0.05),表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移。Transwell侵袭显示,20、30、40、50mg/LDADS作用24 h后,穿膜细胞数呈剂量依赖性分别减少34.67%、50.54%、57.12%、64.59%(P<0.05)。45mg/L DADS处理SW480细胞24、48 h后,destrinmRNA下调24.7%、60.1%,蛋白下调30.1%、58.9%(P<0.05),而处理前后cofilinl mRNA与蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。但SW480细胞处理1、15、30、60 min后,p-cofilinl表达呈时间依赖性分别下调18.9%、53.8%、62.1%、78.2%(P<0.05)。结论:DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭可能与下调destrin和p-cofilinl有关。

天然植物单体抗结肠癌SW480细胞活性的研究进展

结肠癌是临床上常见的恶性肿瘤,当前的化学药物治疗仍具有严重的毒、副作用,开发毒性低、副作用小的抗结肠癌药物的任务十分迫切。中草药的有效活性成分是筛选抗癌药物的重要来源,从天然植物中提取的多酚类、苷类、有机硫化物及异戊二烯类等物质可通过直接杀伤肿瘤细胞、阻滞细胞周期、影响基因表达、作用于凋亡信号传导途径和诱导细胞分化等机制在体外表现出显著的抑制人结肠癌SW480细胞生长的活性。本文综述了近年来发现的具有体外抗SW480细胞活性的天然植物单体。

酪酸梭菌通过调节长链非编码RNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480的凋亡

目的人结肠癌细胞SW480与酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)共培养后,检测SW480细胞lncRNAs和mRNAs的应答变化及诱导凋亡的机制。方法 1.5×107CFU/m L酪酸梭菌处理结肠癌细胞48 h后,提取总RNA,对其逆转录RNA并作荧光标记,与安捷伦人lncRNAs/mRNAs芯片杂交。生物信息学预测表达差异的lncRNAs靶基因,并利用DAVID6.7对其进行信号通路富集度分析。双苯并咪唑Hoechst 33258(bisbenzimlde)和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡。结果与SW480对照组相比,共培养酪酸梭菌的结肠癌细胞SW480中的lncRNAs有50个表达上调和152个表达下调的基因,mRNAs中有738个表达上调和1 088个表达下调的基因。对差异表达的基因进行信号通路富集度分析,显示参与肿瘤相关的信号传导途径有MAPK信号通路、细胞因子-细胞因子、JAK-STAT信号、NF-κB的激活、VEGF信号通路和p53信号通路。酪酸梭菌能显著促进结肠癌细胞凋亡。结论酪酸梭菌通过调节lncRNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480凋亡。

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示,沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示,沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示,LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示,沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重(0.16±0.079)g较SW480组(0.86±0.165)g明显减少,瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD 34阳性表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。

人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响及其作用机制

目的观察人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期SW480细胞,分别加入含160、80、40、0μmol/L人参皂苷Rg3的储备液(分别计为A、B、C、D组)培养24 h,采用MTT法检测人参皂苷Rg3对SW480细胞增殖活性(OD值)的影响,倒置显微镜观察人参皂苷Rg3诱导SW480细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测SW480细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、闭锁蛋白(Occludin)mRNA,Western blotting法检测ICAM-1、Occludin蛋白。结果与D组比较,A、B、C组细胞OD值下降,凋亡率增加,ICAM-1 mRNA、蛋白表达降低,Occludin mRNA、蛋白表达升高(P均<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,机制可能与ICAM-1表达下调、Occludin表达上调有关。

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。

大黄酚介导AMPK依赖性信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成

目的:以体外培养SW480细胞和体内荷瘤裸鼠为研究对象,探讨大黄酚(Chr)对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成的影响。方法:分别在结肠癌细胞SW480中加入25、50和100μmol/L大黄酚,Brdu染色法检测细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达水平;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测VEGF、E-cadherin和N-cadherin等上皮间充质转化相关蛋白表达,免疫荧光法检测波形蛋白表达情况;Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1表达;建立移植瘤裸鼠模型,分别腹腔注射12.5、25和50 mg/kg大黄酚,检测荷瘤小鼠存活率、肿瘤重量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki67和PCNA表达水平,Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1活化情况。结果:体外实验表明,大黄酚能剂量依赖性地抑制人结肠癌SW480细胞增殖和Ki67、PCNA蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低细胞划痕闭合率和侵袭细胞数量(P<0.05或P<0.01),调节E-cadherin、VEGF、N-cadherin、Vimentin、AMPK、mTOR和cyclin D1在SW480细胞中的表达水平(P<0.05或P<0.01);体内实验表明,与对照组(0.45±0.09)g相比,大黄酚各剂量组肿瘤组织重量分别为(0.32±0.06)g、(0.24±0.07)g和(0.15±0.04)g,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且大黄酚剂量依赖性地抑制Ki67和PCNA表达(P<0.05或P<0.01),调控AMPK、p-mTOR和cyclin D1在肿瘤组织的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:大黄酚通过AMPK信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖、侵袭及荷瘤小鼠肿瘤形成。

抑制lncRNA TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞生物学行为影响

目的:探究抑制干扰长链非编码RNA(lncRNA)TUG1靶向上调miR-26a介导VEGF/P38MAPK/Hsp27通路对结肠癌SW480细胞的生长、侵袭和EMT的影响。方法:sh-TUG1分别与miR-26a inhibitor和通路抑制剂SB203580单独或联合转染SW620细胞,以未经处理的SW480细胞为对照组。RT-PCR检测各组细胞TUG1及miR-26a表达,荧光素酶报告基因检测TUG1及miR-26a的靶向关系,BrdU法检测细胞增殖,Tanswell检测细胞侵袭,Western blot检测蛋白表达。将SW480细胞及转染sh-TUG1的SW480细胞分别皮下注射入裸鼠体内,分别设为对照组及sh-TUG1组,正常喂养30 d后取瘤、量体积,RT-PCR检测肿瘤组织TUG1及miR-26a表达,免疫组化检测肿瘤组织中Ki67、VEGF和Vimentin表达。结果:miR-26a是TUG1的靶向基因。相较于对照组,sh-TUG1组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05);miR-26a inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显升高,而E-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05)。相较于miR-26a inhibitor组,sh-TUG1+inhibitor组细胞增殖及侵袭数、Vimentin及N-cadherin蛋白表达明显降低,而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。SB203580+LV-TUG1组细胞增殖及侵袭数、VEGF、P-P38/P38、P-Hsp27/Hsp27相对表达量高于SB203580组(P<0.05)。sh-TUG1组肿瘤体积,肿瘤组织中TUG1、Ki67、VEGF和Vimentin表达低于对照组,miR-26a表达高于对照组(P<0.05)。结论:抑制TUG1表达可靶向上调miR-26a水平,能通过抑制VEGF/P38MAPK/Hsp27通路抑制结肠癌SW480细胞的生长、运动和裸鼠成瘤。

马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及机制初探

目的研究马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖和生存活力;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测与细胞凋亡相关的Bax基因和Bcl-2基因mRNA的表达水平。结果与对照组比较,不同浓度药物组均对SW480细胞有抑制作用,且呈一定的量效和时效关系;Hoechst 33258染色可见较多凋亡细胞,流式细胞仪检测显示马钱苷能显著增加细胞凋亡率;半定量RT-PCR测得马钱苷对Bax mRNA的表达无影响,但会引起Bcl-2 mRNA的表达下调。结论马钱苷能抑制SW480细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2基因的表达有关。

DADS通过Rac1-ADF/cofilin1通路抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)通过Rac1-ADF/cofilin1通路对人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭的作用。方法:划痕愈合和侵袭实验分别检测DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响;RT-PCR与Western blot检测DADS对SW480细胞Rac1-ADF/cofilin1信号分子表达的作用。结果:40与50 mg/L DADS处理SW480细胞24 h后,穿膜细胞分别减少57.12%与64.59%(P<0.05)。处理48 h细胞迁移率分别为23.23%与12.87%,较对照组75.86%明显降低(P<0.05)。RT-PCR显示,45 mg/LDADS处理SW480细胞24、48 h后,与对照组比较Rac1、Rock1、PAK1、LIMK1和destrin mRNA分别显著下调(P<0.01);而cofilin1mRNA无显著性差异(P>0.05)。Western blot显示,45 mg/L DADS处理SW480细胞6、12、24、48 h后,与对照组比较Rac1、Rock1、PAK1、LIMK1和destrin蛋白分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但cofilin1蛋白无显著性差异(P>0.05),而p-LIMK1和p-cofilin1表达分别呈时间依赖性下调(P<0.05)。结论:DADS可通过Rac1-ADF/cofilin1通路下调Rac1、Rock1、PAK1、LIMK1、p-LIMK1、destrin与p-cofilin1抑制SW480细胞迁移与侵袭。

肠癌SW480肿瘤细胞SP亚群分析

目的分选肠癌细胞株SW480中边群细胞(SP)亚群,观察SP细胞是否具有肿瘤干细胞样生物学特性。方法将1×107个/mL对数期生长的SW480细胞进行Hoechest33342和PI染色,80μg/mL维拉帕米阻断,流式细胞仪分选SP细胞。将分选后的SP细胞和非SP细胞,采用MTT法绘制细胞生长曲线和进行细胞克隆形成实验;并将两种细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的形成情况。结果 Hoechest33342染色显示:SP细胞亚群的平均含量为(1.43±0.05)%,加入维拉帕米后SP细胞亚群比例减少为(0.01±0.01)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞生长曲线显示:非SP组细胞生长速度较SP组明显降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验表明,移植第15天后SP细胞克隆体积大,边界平滑,细胞呈巢状隆起生长,结构致密,细胞体积小,平均克隆数为49.33±8.21,显著高于非SP细胞组的31.03±5.29,两组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。在移植量为1×105个SP细胞组中有50%小鼠成瘤,而非SP细胞组小鼠均未见明显成瘤(P<0.01)。结论人肠癌细胞株SW480中存在SP亚群细胞,生长曲线和克隆形成实验表明其增殖能力较非SP细胞强;裸鼠成瘤试验提示SP细胞尚需进一步纯化。

华蟾素对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其作用机制研究

目的研究华蟾素(CINO)对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养SW480细胞,取对数期细胞以4×10~3个/孔接种于96孔板中,用培养液定容至总体积200μL,随机分为四组:空白对照组(Control组,200μL培养基)和CINO 1 mg/mL组(用培养基稀释500倍取200μL)、CINO 10 mg/mL组(用培养基稀释50倍取200μL)、CINO 100 mg/mL组(用培养基稀释5倍取200μL),采用MTT法检测CINO对SW480细胞的生长抑制作用,倒置荧光显微镜实时成像技术观察SW480细胞凋亡形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测CINO对SW480细胞血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体2(VEGF-R2)表达的影响。结果作用24、48、72 h后,MTT结果显示CINO 1、10、100 mg/mL组A540值均较Control组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。作用0、24、48 h后,倒置荧光显微镜观察CINO组(1、10、100 mg/mL)细胞凋亡数明显多于空白对照组。ELISA结果显示,CINO组能减少SW480细胞VEGF及VEGF-R2的蛋白表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CINO能抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制肿瘤细胞自分泌VEGF、VEGF-R2有关。

二甲双胍联合奥沙利铂对结肠癌SW480细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨二甲双胍(metformin,Met)联合奥沙利铂(oxaliplatin,Oxa)对结肠癌SW480细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用MTT法检测分别应用二甲双胍(0,5,10,20,40 mmol/L)、奥沙利铂(0,5,10,20,40μmol/L)对SW480细胞的增殖抑制作用。PI单染法检测分别应用二甲双胍(0,5,10,20,40 mmol/L)、奥沙利铂(0,5,10,20,40μmol/L)及二甲双胍(10 mmol/L)联合奥沙利铂(10μmol/L)对SW480细胞凋亡的影响。流式细胞术检测二甲双胍(10 mmol/L)、奥沙利铂(10μmol/L)及两者联合作用时SW480细胞周期的变化。Western blot法检测二甲双胍(10 mmol/L)、奥沙利铂(10μmol/L)及两者联合作用SW480细胞凋亡及细胞周期相关蛋白的表达。结果单独应用二甲双胍、奥沙利铂作用于SW480细胞后细胞的增殖随浓度增加而降低,二甲双胍联合奥沙利铂与单药作用相比细胞增殖抑制作用明显(P<0.05)。二甲双胍、奥沙利铂分别处理SW480细胞,细胞凋亡率随着给药浓度的增高而增加,联合用药组与单药组相比,细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。细胞周期检测显示与空白组及单药组相比,联合用药组SW480细胞在G0/G1期比例增加(P<0.05)。Western blot结果显示与空白组和单药组相比,联合用药组作用于SW480细胞后Cyclin D1及CDK4的表达降低,P21的表达增加(P<0.05)。促凋亡蛋白cleaved-caspase-3表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍联合奥沙利铂可抑制结肠癌SW480细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与细胞周期的阻滞有关。