NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达。同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响。结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01);同时抑制细胞周期进程(P<0.05)。细胞迁移率显著降低(P<0.01),细胞侵袭数量显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力。结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能。

FGFR4在结直肠癌组织中表达及其对SW620细胞生物学功能的影响

目的探究成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)在结直肠癌组织中的表达情况及其对SW620细胞生物学功能的影响。方法利用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中结直肠癌的数据分析FGFR4 mRNA在结直肠癌组织中的表达。使用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)进行生物信息学分析寻找FGFR4影响的相关信号通路。构建pcDNA3.1-FGFR4过表达载体,分为实验组与对照组。分别采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、流式细胞凋亡检测、细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达FGFR4对SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果TCGA数据库数据分析结果显示FGFR4 mRNA在结直肠癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),GSEA结果显示FGFR4高表达在碱基切除修复、谷胱甘肽代谢、磷酸戊糖途径、核糖核酸聚合酶、硒氨酸代谢等通路富集(P<0.05)。CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验结果表明,与对照组相比,实验组中SW620细胞的增殖、迁移、侵袭能力均明显得到促进(P<0.05)。流式细胞凋亡检测结果显示,过表达的FGFR4可以抑制结直肠癌SW620细胞凋亡(P<0.05)。结论FGFR4在结直肠癌组织中存在高表达,且与预后相关。过表达FGFR4促进结直肠癌SW620细胞的增殖、迁移及侵袭等特性并抑制SW620细胞的凋亡。FGFR4有可能成为结直肠癌诊断和治疗的潜在靶点。

重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.

大蒜提取液抑制人结肠癌细胞SW480和SW620的增殖和扩散

研究了天然大蒜提取液对人结肠癌细胞SW 480和SW 620的扩散、粘附和增殖的影响.结果表明:将SW 480和SW 620加入1μL/孔大蒜提取液的DMEM中,癌细胞扩散率降低了40%;培养96 h,增殖率分别降低8.6倍和10.8倍.表明大蒜提取液能抑制人结肠癌细胞SW 480和SW 620的增殖和扩散.

萝卜硫素对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:观察萝卜硫素(SFN)对结直肠癌SW620细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测0、5、10、15、20μmol/L SFN处理48、72 h对SW620细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测0、5、10、15、20μmol/L SFN处理24、48 h对SW620细胞凋亡的影响,采用细胞划痕实验观察20μmol/L SFN处理24 h对SW620细胞迁移的影响,并采用Western blot法检测细胞中STAT3、NF-κB、p-STAT3、p-NF-κB及MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果:随着SFN浓度的升高,SW620细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05)。同时20μmol/L SFN可明显减弱SW620细胞的迁移能力,降低p-STAT3、p-NF-κB与MMP-2及MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。结论:SFN抑制SW620细胞增殖、促进其凋亡的机制可能与降低p-STAT3、p-NF-κB的表达有关,抑制侵袭及转移的机制可能与其降低MMP-2及MMP-9蛋白的表达有关。

三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响

目的:研究三棱、莪术提取物联合热疗对结肠癌SW620细胞凋亡及迁移、侵袭能力的影响。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的三棱提取物(1.25、2.5、5、7.5、10μg/mL)、莪术提取物(5、10、15、20、25μg/mL)对SW620细胞的毒性,计算其30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和50%细胞生长抑制浓度(IC_(50))。采用CFSE/PI双荧光染色法、Annexin V/PI双染色法+流式细胞术考察IC50三棱提取物、IC_(50)莪术提取物分别单用或联合热疗(42℃条件下处理90 min)对SW620细胞死亡情况和凋亡率的影响;采用划痕实验和Transwell侵袭实验考察IC_(30)三棱提取物、IC_(30)莪术提取物分别单用或联合热疗对SW620细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:三棱提取物IC_(30)为3.24μg/mL,IC_(50)为4.69μg/m L;莪术提取物IC_(30)为11.27μg/mL,IC_(50)为16.81μg/m L。与IC_(50)三棱提取物组或IC_(50)莪术提取物组比较,IC_(50)三棱提取物+热疗组或IC_(50)莪术提取物+热疗组的死亡细胞显著增多,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与0 h时比较,IC_(30)三棱提取物组、IC_(30)莪术提取物组、IC_(30)三棱提取物+热疗组、IC_(30)莪术提取物+热疗组细胞划痕实验的愈合间距均未见明显变窄。与IC30三棱提取物组或IC_(30)莪术提取物组比较,IC_(30)三棱提取物+热疗组或IC_(30)莪术提取物+热疗组侵袭实验的跨膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论:联用热疗能显著增强三棱或莪术提取物对SW620细胞的杀伤作用,并能显著提高两种提取物对SW620细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。

lncRNA SNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的:探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。方法:收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞(SW480、SW620、HT-29和LoVo)及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。结果:SNHG10在结直肠癌组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.01),其表达水平与TNM分期和远处转移有关(均P<0.05);miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05或P<0.01),SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.225,P=0.048)。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调SNHG10或上调miR-532-3p的表达后,SW620细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低(均P<0.05)。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P<0.05)。结论:lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNA SNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。

麦冬皂苷B对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨麦冬皂苷B(OPB)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用含100 kU·L^-1青霉素、100 mg·L^-1链霉素、体积分数10%胎牛血清的RMPI-1640培养液体外培养结肠癌SW620细胞,取对数生长期细胞接种于96孔板中,细胞培养24 h后分为空白对照组、OPB低剂量组(5μmol·L^-1)、OPB中剂量组(10μmol·L^-1)和OPB高剂量组(20μmol·L^-1),然后将各组细胞培养板移入培养箱中继续培养。取各组培养24、48、72 h的SW620细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW620的细胞抑制率。取各组培养48 h的SW620细胞,采用流式细胞术检测SW620细胞周期及凋亡情况,酶联免疫吸附试验法检测SW620细胞中TGF-β1蛋白的表达,Western blot法检测SW620细胞中磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果OPB低、中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞抑制率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例下降,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组G 2/M期SW620细胞比例降低,G 0/G 1和S期SW620细胞比例升高(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB低剂量组(P<0.05),OPB高剂量组SW620细胞凋亡率显著高于OPB中剂量组(P<0.05)。OPB低、中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于空白对照组(P<0.05),OPB中、高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB低剂量组(P<0.05);OPB高剂量组细胞培养基中TGF-β1水平低于OPB中剂量组(P<0.05)。与空白对照组比较,OPB低、中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB低剂量组比较,OPB中、高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与OPB中剂量组比较,OPB高剂量组SW620细胞中p-Smad3、Cyclin D1蛋白相对表达量显著下降,Smad4蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论OPB可明显抑制人结肠癌SW620细胞增殖,其机制可能与OPB阻滞TGF-β1/Smad信号通路有关。

结直肠癌及人结肠癌细胞系SW620中CD44^+/Ki-67^-癌细胞的表达及意义

目的探讨结直肠癌及人结肠癌细胞系SW620中CD44+/Ki-67-癌细胞的形态特点、数量及分布特征。方法利用组织芯片技术、免疫组化染色、免疫组化双重染色和HE染色,连续切片,同部位观察。结果正常肠黏膜中CD44蛋白不表达,Ki-67蛋白低表达;腺瘤中CD44蛋白低表达,Ki-67蛋白表达率为5.06%,CD44+/Ki-67-细胞数为0.58%。结直肠癌中CD44+/Ki-67-癌细胞数平均为5.82%,主要分布在腺体基膜缘或腺体共壁侧,分布有统计学意义(P<0.05)。癌细胞主要有两种形态,一种是大核细胞,另一种细胞核较小,形似淋巴细胞;在SW620中CD44+/Ki-67-主要表达在小圆细胞和单极细胞中,其它细胞中表达少;细胞数比率与组织学相比,差异无显著性(P>0.05)且比值接近;Ki-67-的癌细胞中,CD44+癌细胞占67%,CD44-癌细胞占33%,两者差异有显著性(P<0.05),说明大多CD44+癌细胞处于G0期或静息期,只有少数细胞处于细胞G1、S、G2、M期。结论 CD44+/Ki-67-癌细胞特征和从癌干细胞理论方面考虑,更适合作为癌干细胞的标记,为癌干细胞的分离、靶向治疗和个体化治疗提供可靠的分子生物学指标。

miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响

目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性(F=4152,P<0.001),细胞增殖能力组间有显著性差异(F=10220,P<0.001)。平板克隆实验的结果为SW620空白对照组、GV209-SW620对照组和mir101-SW620组的克隆形成率分别为:44.33%、48.17%、35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义(F=73.015,P<0.001)。细胞周期分析发现SW620各组细胞间其G1、S、G2/M期存在着统计学差异(F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000)。除了SW620和GV209-SW620的G2期分布无统计学差异外(P=0.441),其余各组G1、G2/M期均有统计学差异(P<0.01);与SW620和GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=6115,P<0.001),各组进行两两比较,均有统计学差异(P<0.01)。与SW620空白细胞组、GV209-SW620对照组相比,mi R-101过表达组细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论 mi R-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/M期周期阻滞及促进细胞凋亡。

以KRAS启动子G-四链体DNA为靶点的血根碱对人结肠癌细胞SW620作用及其机制

目的研究血根碱与KRAS启动子G-四链体DNA的相互作用,探究以KRAS G-四链体DNA为靶点的血根碱对人结肠癌细胞SW620的作用及机制。方法采用MTT法检测血根碱对人结肠癌细胞SW620增殖的影响。采用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、圆二色谱等方法研究血根碱与KRAS启动子G-四链体DNA的相互作用。采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测血根碱对SW620细胞KRAS mRNA表达的影响。结果血根碱能够抑制人结肠癌SW620细胞的增殖。血根碱与KRAS启动子G-四链体DNA的结合能力较强,结合计量比接近1∶1,结合分子机制为生成了不发光的复合物。血根碱可维持G-四链体DNA的平行构型及热稳定性。血根碱能抑制人结肠癌SW620细胞KRAS mRNA的表达。结论血根碱可能通过与KRAS启动子区域G-四链体结合并维持其结构的稳定,抑制KRAS mRNA表达,进而抑制人结肠癌细胞SW620的增殖,发挥抗癌作用。

藏红花素抑制音猬因子信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究藏红花素抑制音猬因子(Shh)信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年1月至2022年7月体外培养人结直肠癌细胞SW620,使用不同浓度(5、10、20、40、60、80 mg/L)的藏红花素处理SW620细胞24 h后,CCK-8法检测藏红花素对SW620细胞的细胞毒性作用。将SW620细胞分别用不同剂量藏红花素(10、20、40 mg/L,藏红花素L/M/H组)、40 mg/L藏红花素+1μmol/L Purmorphamine(藏红花素H+Shh通路激活剂组)、1μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理,另设置未经处理的对照(Control)组,检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及Shh信号通路相关蛋白Shh、平滑蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因-1(Gli-1)表达。结果 藏红花素以剂量依赖性方式降低SW620细胞活力。与对照组相比,Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、Shh(1.47±0.09比1.27±0.08)、Smo(1.38±0.12比1.15±0.09)、Gli-1(1.25±0.09比0.98±0.07)蛋白表达增加,细胞凋亡率减少(P<0.05),藏红花素L组、藏红花素M组、藏红花素H组SW620细胞活力下降,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少,凋亡率增加,Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比1.32±0.14)、Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比1.19±0.12)、Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比0.96±0.11)蛋白表达减少(P<0.05);与藏红花素H组相比,藏红花素H+Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加,凋亡率减少,Shh(0.84±0.08比0.52±0.08)、Smo(0.81±0.09比0.43±0.06)、Gli-1(0.70±0.08比0.37±0.06)蛋白表达增加(P<0.05)。结论 藏红花素可抑制SW620细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,可能与抑制Shh信号通路有关。

TF/Ⅶa活化PAR2后经钙信号促进SW620细胞的增殖和迁移

目的探讨钙信号参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶活化受体2(PAR2),从而促进结肠癌SW620细胞增殖、迁移的可能机制。方法Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2激动剂(PAR2-AP,100μmol/L)作用负载fluo-4/AM的SW620细胞,激光共聚焦显微镜测定细胞内钙离子荧光强度的变化;钙抑制剂EGTA(1 mmol/L)和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG,1μmol/L)预处理细胞后,Ⅶa(10 nmol/L)、PAR2-AP(100μmol/L)再分别处理细胞,western blot检测p-ERK1/2、t-ERK1/2蛋白的表达;MTT法及流式细胞术检测SW620细胞的增殖情况、transwell法检测细胞迁移的变化。结果Ⅶa(10 nmol/L)和PAR2-AP(100μmol/L)处理SW620细胞后,胞内钙离子荧光强度瞬时升高后降低,分别在60、30 s达到峰值;EGTA和TG预处理细胞,能明显降低Ⅶa、PAR2-AP对p-ERK1/2蛋白的活化作用(P<0.05),抑制其对细胞增殖和迁移的促进作用。结论 TF/Ⅶa激活PAR2后,经钙信号通路活化下游ERK1/2信号,促进SW620细胞的增殖和迁移。

miR-138靶向调控PDK1基因抑制人结肠癌SW620细胞侵袭

目的探讨人结肠癌SW620细胞中miR-138和PDK1基因的表达,阐明miR-138对PDK1基因的靶向调控作用以及对SW620细胞侵袭性的影响。方法培养SW620细胞并应用免疫荧光检测PDK1基因在细胞中的表达。采用生物信息学方法对miR-138和PDK1基因的靶向匹配关系进行预测并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。脂质体2000转染miR-138模拟物后,qRT-PCR检测miR-138和PDK1基因的表达,Western blot检测PDK1蛋白的表达,Transwell小室检测SW620细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见人结肠癌SW620细胞均匀分布,形态规则均一;细胞免疫荧光显示细胞内有PDK1蛋白的表达,显示红色荧光。靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示miR-138和PDK1基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-138能够结合PDK1 m RNA 3’UTR并有效抑制其表达。qRTPCR和Western blot检测结果表明过表达miR-138能够导致PDK1基因表达的下降。Transwell实验表明miR-138的过表达能够抑制SW620细胞的侵袭。结论 miR-138通过靶向作用于PDK1 m RNA 3’UTR能够负性调控PDK1基因的表达,并能够抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭。

RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响

PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.

HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。

桑椹汁对结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

为证实桑椹的抗肿瘤功能,以不同浓度桑椹汁处理结肠癌细胞株SW620,应用MTT法对比绘制生长曲线,调查SW620细胞的增殖情况,通过荧光定量PCR、SDS-PAGE检测SW620细胞凋亡相关基因p53的转录及蛋白质表达变化,分析桑椹汁对SW620细胞增殖、凋亡的影响机制。结果显示,桑椹汁对SW620细胞增殖的抑制作用随着桑椹汁浓度的升高而明显增强,以花青素质量浓度为6.267 3×10-3mg/mL的桑椹汁处理24 h后SW620细胞发生了以下变化:细胞的生长明显受到抑制,细胞脱落、变形与贴壁性下降,出现凋亡现象;细胞基因组DNA发生较明显的降解;荧光定量PCR检测细胞中p53基因的转录水平较对照组增加约6.5倍,SDS-PAGE检测p53蛋白的表达量也明显高于对照组。研究结果表明,桑椹汁对结肠癌细胞株SW620的增殖有抑制作用,其抑制机制可能是通过其活性物质诱导SW620细胞中p53基因上调表达导致细胞凋亡。

Id1和Id3协同诱导结肠癌SW620细胞EMT并影响其侵袭与迁移

目的:探讨分化抑制因子1基因(inhibitor of differentiation-1, Id1)和Id3是否协同促进结肠癌SW620细胞EMT和细胞的侵袭迁移能力及其可能的机制。方法:利用慢病毒载体构建Idl和Id3单或双基因敲减的结肠癌SW620细胞,实验分为4组:SW620-Sh-Id1组(转染shRNA-Id1)、SW620-Sh-Id3组(转染shRNA-Id3)、SW620-Sh-Id1-Id3组(共转染shRNA-Id1和shRNAId3)、SW620-NC组(转染阴性空载慢病毒)。用qPCR法和Western blotting法分别检测敲减效果,显微镜下观察稳定下调Idl和Id3后SW620细胞形态的变化,划痕愈合实验和Transwell小室法检测SW620细胞迁移和侵袭的变化,Western blotting检测EMT标志分子及迁移、侵袭相关蛋白的表达。结果:成功构建了Idl和Id3单基因敲减与双基因敲减的结肠癌SW620细胞株。(1)Idl和Id3的敲除诱导SW620细胞形态由上皮样向间质样转变;(2)与对照组相比,SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组SW620细胞侵袭和迁移的能力显著下降(均P<0.05);SW620-Sh-Id1-Id3组细胞侵袭和迁移的能力较SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组也明显下降(均P<0.05);(3)与对照组相比,SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组β-catenin、snail1及MMP2蛋白表达降低,上皮黏蛋白及TIMP2蛋白表达增高(均P<0.05);SW620-Sh-Id1-Id3组与SW620-Sh-Id1组和SW620-Sh-Id3组相比,β-catenin、snail1及MMP2蛋白表达也下降,同时上皮钙黏蛋白及TIMP2蛋白表达也增高(均P<0.05)。结论:Id1和Id3可能通过诱导EMT协同影响结肠癌SW620细胞侵袭与迁移的能力。

Kiss-1基因过表达对直肠癌SW620细胞增殖的影响

目的探讨Kiss-1基因表达与过表达对直肠癌细胞SW620增殖的影响。方法培养人直肠癌SW620细胞,随机将其分为3组:空白对照组(未转染)、实验组(转染p IRES2-Kiss-1)、阴性对照组(转染p IRES2空载体)。采用免疫荧光染色和免疫细胞化学染色观察直肠癌SW620细胞中Kiss-1的表达情况;Western blot检测转染p IRES2-Kiss-1基因后直肠癌SW620细胞中Kiss-1的表达;采用CCK-8法、MTT法检测转染对SW620细胞增殖的影响。结果免疫重组质粒pIRES2-Kiss-1成功转染至直肠癌SW620细胞,与空白对照组和阴性对照组相比较,实验组中Kiss-1蛋白高表达,差异有显著性(P<0.05);3组细胞培养48、72h后,与空白对照组和阴性对照组SW620细胞数相比较,实验组明显降低(P<0.05)。结论Kiss-1基因在直肠癌SW620细胞中能高效、稳定地表达;Kiss-1基因可有效降低直肠癌SW620细胞的增殖。

罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的实验研究

目的探究罗哌卡因通过线粒体通路诱导人结直肠癌SW620细胞株凋亡的机制。方法体外培养人结直肠SW620细胞,使用罗哌卡因处理人结直肠SW620细胞,采用CCK-8实验检测癌细胞活力。将结直肠癌SW620细胞分为:结直肠癌细胞组、低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组和高剂量罗哌卡因组;参考CCK-8实验结果,分别使用20,50和100μg/mL浓度的罗哌卡因处理低、中、高罗哌卡因组的结直肠癌细胞;采用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位;使用蛋白质印迹检测凋亡蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3和Caspase-9表达情况;采用流式细胞仪检测结直肠SW620细胞周期及凋亡情况。结果CCK-8结果显示随着使用罗哌卡因剂量的增加,人结直肠SW620细胞的抑制率显著升高,半数致死浓度约为:69.36μg/mL。结直肠癌细胞组细胞凋亡率为(1.52±0.11)%显著低于低、中、高剂量罗哌卡因组[(35.91±5.69)%、(46.27±6.57)%、(69.36±8.01)%;F=559.203,P<0.001];相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组线粒体膜电位、G2/M期细胞比例、S期细胞比例、Bax蛋白相对表达水平均显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.001);相比结直肠癌细胞组,使用罗哌卡因处理各组G0/G1期细胞比例、Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Caspase-9蛋白相对表达水平显著升高,且呈剂量依赖性(P<0.001)。结论罗哌卡因可以通过线粒体途径促进人结直肠SW620细胞的凋亡,其作用机制可能与Caspase-3及Bcl-2信号传导相关。