滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的检测及意义分析

目的 研究逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)在滑膜肉瘤石蜡包埋组织中检测SYT SSX融合基因的可行性和意义。方法 2 0例滑膜肉瘤标本均用 10 %福尔马林固定、石蜡包埋。采用RT PCR检测SYT SSX融合基因。看家基因PBGD作为内参照。结果 所有标本均可检测到PBGDmRNA的表达。 18例 (90 % )检测到融合基因SYT SSX的表达。SYT SSX1型占12例 (6 6 7% ) ,SYT SSX2型占 6例 (33 3% )。结论 在经福尔马林固定经石蜡包埋组织的滑膜肉瘤用RT PCR方法检测SYT SSX融合基因是可行的 ,有较高的敏感性。融合基因亚型可能为预后提供重要信息。

SYT-SSX融合基因亚型与滑膜肉瘤细胞增殖及凋亡的关系

目的:SYT-SSX融合基因是滑膜肉瘤的分子遗传学特征,影响滑膜肉瘤的发生发展,但作用机制不详。本研究通过分析SYT-SSX融合基因亚型与肿瘤细胞增殖及凋亡的关系,探讨SYT-SSX对滑膜肉瘤增殖、凋亡的影响。方法:选取141例SYT-SSX融合基因阳性的滑膜肉瘤,进行核分裂计数,通过Ki-67免疫组织化学染色计算Ki-67标记指数(labeling index,LI),反映肿瘤细胞的增殖情况;通过TUNEL染色计算凋亡指数(apoptosis index,AI),并结合Bcl-2和Bax免疫组织化学染色,分析肿瘤细胞的凋亡情况;最后,分析SYT-SSX亚型与核分裂数、Ki-67 LI、AT及Bcl-2、Bax表达的关系。结果:SYT-SSX1和SYT-SSX2阳性滑膜肉瘤分别为50例和91例;SYT-SSX1型和SYT-SSX2型滑膜肉瘤的核分裂数分别为(15.58±9.18)/10HPF和(11.02±8.78)/10HPF,前者显著高于后者(t=2.902,P=0.004);并且,SYT-SSX1型和SYT-SSX2型滑膜肉瘤的Ki-67 LI分别为(25.26±12.78)%和(19.77±11.44)%,前者明显高于后者(t=2.615,p=0.010)。另外,SYT-SSX1与SYT-SSX2型滑膜肉瘤的AI分别为(1.66±1.84)%和(1.65±2.22)%,两组无统计学差异(t=0.022,P=0.982);不同SYT-SSX亚型病例的Bcl-2和Bax表达情况无明显差别(分别P=0.156,P=0.321)。结论:SYT-SSX融合基因亚型可能影响滑膜肉瘤肿瘤细胞的增殖,SYT-SSX1型病例肿瘤细胞的增殖能力较强;但是,SYT-SSX1与SYT-SSX2可能在调节细胞凋亡方面的能力无明显差别。

滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX cDNA的克隆与序列分析

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法获得SYT-SSX的cDNA。克隆入PUCm-T载体后,在美国ABI DNA自动测序仪上以反向引物测序法进行核苷酸序列的测定,扩增出98 bp的特异性片段,并筛选出阳性重组克隆质粒PUCm-SYT-SSX。获得的滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的cDNA,为深入揭示滑膜肉瘤分子发生机理奠定基础,同时可进一步完成原核表达。

滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX检测(英文)

目的 :研究采用逆转录 -聚合酶链反应的方法在滑膜肉瘤石蜡包埋组织中检测SYT SSX融合基因的可行性和临床意义。方法 :收集 2 0例滑膜肉瘤标本 ,均为甲醛固定 ,石蜡包埋组织。SYT SSX融合基因采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测。看家基因PBGD作为内参照。结果 :所有标本均可检测到PBGDmRNA的表达。 18例检测到融合基因SYT SSX的表达 ,其中 ,SYT SSX1型占 12例 ,SYT SSX2型占 6例 (4例为单相型滑膜肉瘤 )。结论 :在滑膜肉瘤甲醛固定 ,石蜡包埋组织中用RT PCR方法检测SYT SSX融合基因是可行的 ,有较高的敏感性。融合基因亚型与滑膜肉瘤组织学分型有一定关系 。

滑膜肉瘤SYT-SSX融合基因转录产物的检测及其与病理表型的关系

目的检测滑膜肉瘤新鲜冰冻标本中的SYT-SSX融合基因,分析融合基因亚型与病理表型之间的关系。方法取19例2000年6月至2004年9月间在我院诊断为滑膜肉瘤新鲜冰冻标本,提取组织RNA,应用RT-PCR检测标本中SYT-SSX融合基因,明确不同融合基因亚型所占的比例;再次确认各病例的病理诊断及病理表型,分析融合基因亚型与病理表型之间的关系。结果15例(79%)标本含有SYT-SSX融合基因,其中11例为SYT-SSX1,4例为SYT-SSX2,后者中1例为罕见的SYT-SSX2变异类型。未发现其他融合基因亚型。经再次病理组织学确认,15例被确诊为滑膜肉瘤,其中双向分化型4例,单向分化型10例,分化差型1例。确诊为滑膜肉瘤的15例标本均检测到SYT-SSX融合基因。SYT-SSX2仅见于单向分化型和分化差型的病例。结论应用RT-PCR检测SYT-SSX融合基因对诊断滑膜肉瘤具有高度的敏感性及特异性。保留新鲜冰冻标本,应用恰当的引物检测融合基因,对滑膜肉瘤的基础及临床研究均具有重要意义。

应用RNA干扰技术阻断SYT-SSX表达治疗滑膜肉瘤的体外实验研究

目的研究siRNA(smallinterferingRNA)对滑膜肉瘤细胞系HS-SY-II中融合基因SYT-SSX表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成3条针对滑膜肉瘤特异性融合基因SYT-SSX的siRNA,转染HS-SY-II细胞系,分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western杂交方法检测SYT-SSX基因和蛋白的表达情况,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性,Annexin-FITC/PI双标记流式细胞计数检测细胞凋亡。结果设计的siRNA中,1条可以完全封闭SYT-SSX的转录,另2条分别使SYT-SSX基因表达降低至37.3%和70.1%。转染3条siRNA后,HS-SY-II细胞融合蛋白表达分别降低至75.03%、82.15%和16.59%。同时,细胞生长受到抑制,并发生细胞凋亡,凋亡率分别为32.51%、26.81%和47.19%。结论siRNA可以有效抑制HS-SY-II细胞系中融合基因SYT-SSX的表达,从而抑制细胞生长,并导致细胞凋亡。

SSX基因家族研究进展

SSX基因家族由9个成员组成,其中ssx-1、SSX-2和SSX-4经常出现在滑膜肉瘤t(x:18)染色体易位的SYT-SSX融合基因中。SSX基因家族可编码肿瘤/睾丸抗原,在睾丸以外的正常组织中,除甲状腺微弱表达外,没有发现它们的存在。HOM-MEL-40是最早用重组cDNA表达文库血清学分析技术确定的由SSX-2基因表达的抗原。近来的研究发现蛋白SSX-241-49是CD8+CTL免疫识别的优势表位,而SSX-237-58和SSX-219-34分别是CD4+T细胞识别相关的HLA-DR及HLA-DP限制表位。日本学者也发现SYT-SSX基因融合蛋白断裂点衍生肽是MHC工分子HLA-A24和HLA-B7限制的CTL识别的表位。所有这些研究,证明SSX基因家族编码蛋白是肿瘤免疫治疗有前景的靶标之一。

34例滑膜肉瘤分子遗传学改变的诊断学意义

目的 探讨石蜡包埋滑膜肉瘤组织中t(x ;18) (p11.2 ;q11.2 )染色体易位融合基因SYT SSXmRNA表达的诊断学意义和应用价值。方法 收集滑膜肉瘤标本 34例 ,以 14例梭形细胞肉瘤和小圆细胞肉瘤做对照 (包括 2例纤维肉瘤、2例平滑肌肉瘤、1例恶性神经鞘膜瘤、4例Ewing肉瘤、2例腺泡型横纹肌肉瘤、2例恶性黑色素瘤、1例血管外皮瘤 )。在进行免疫组织化学指标检测的基础上 ,用一步法逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 34例石蜡包埋滑膜肉瘤组织中SYT SSX的表达。结果 34例滑膜肉瘤中 30例获得有效RNA ,2 8例 (93.3% )检出SYT SSX融合基因表达。其中 14例表达SYT SSX1型者中 10例为双相型 ,9例表达SYT SSX2型者中 5例为单相分化型 ,5例SYT SSX1/ 2均未检出。对照组均未检出SYT SSX基因的表达。结论 SYT SSX融合基因表达可作为诊断滑膜肉瘤新的分子诊断指标。一步法RT PCR是一种理想而可行的用于石蜡包埋滑膜肉瘤组织SYT SSX融合基因检测的分子诊断技术。

细胞周期调控相关蛋白表达与滑膜肉瘤融合基因分型的关系

目的:研究SYT-SSX融合基因不同亚型在滑膜肉瘤中的表达情况,从蛋白质水平研究不同融合基因类型在细胞周期因子cyclinD1、cDK4、p21WAF1/CIP1、p27等表达上的差异,从而为进一步探索融合基因的作用机制提供实验依据。方法:选取天津医科大学附属肿瘤医院1974年4月～2005年8月收治的滑膜肉瘤患者中SYT-SSX融合基因表达阳性的病例54例,提取石蜡包埋组织中的RNA,通过逆转录-聚合酶链反应检测SYT-SSX亚型的表达,制作组织芯片,使用免疫组织化学染色的方法检测不同类型融合基因CvclinD1、CDK4、p21WAF1/CIP1、p27的表达情况,比较这些细胞周期相关蛋白分别在SYT-SSX1和SYT-SSX2阳性病例中的表达差异。结果:54例滑膜肉瘤患者中SYT-SSX1型患者22例(40.74%),SYT-SSX2型患者32例(59.26%),SYT-SSX1与SYT-SSX2阳性滑膜肉瘤中,CyclinD1,CDK4,p21WAF1/CIP1和p27表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SSX1型滑膜肉瘤患者与SYT-SSX2型患者相比,肿瘤具有更强的增殖能力;SSX1型的融合基因表达更多的CyclinD1/CDK4,而表达较少的抑制肿瘤的CDI家族p21 WAF1/CIP1、p27,提示可能是因为SSX1促发了某种转录机制使得细胞较SSX2型更易进入细胞周期而获得恶性表型,同时促使肿瘤细胞逃避细胞增殖的监督机制。

肺原发性滑膜肉瘤5例临床病理分析

目的探讨肺原发性滑膜肉瘤(primary pulmonary synovial sarcoma,PPSS)的临床病理学特征和影像学表现。方法回顾性分析苏州大学附属第一医院2011年7月~2019年5月确诊的5例PPSS临床病理学特征、影像学表现、免疫表型和SYT-SSX融合基因情况。结果5例PPSS年龄14~63岁,中位年龄29岁。2例因发热、不同程度的胸痛及胸闷等症状就诊,3例无明显症状,体检发现。镜检:4例为梭形细胞型,肿瘤细胞为均匀一致的梭形细胞,呈片状、束状排列,无腺体结构;1例为低分化型,由胖梭形细胞组成,具有明显异型性,核分裂象易见。免疫表型:5例vimentin、BCL-2、CD99、TLE-1和EMA均阳性,2例CD56灶状阳性,CK(AE1/AE3)、CK7、TTF-1、CD34、SMA、S-100等均阴性,Ki-67增殖指数为70%~80%。5例行FISH和SS18-SSX免疫组化检测,其中4例SS18-SSX融合基因阳性,5例均接受手术治疗,开胸术和胸腔镜术在手术时长和患者术后入院天数上无明显差异,随访期间3例死亡,1例复发。荟萃分析显示,SYT-SSX融合基因阳性明显提高PPSS的复发率(OR=2.47,95%CI:1.54~3.96,P<0.05)。结论PPSS预后差,临床特征及影像学表现特异性差,易与其他肺部肿瘤混淆,结合病理检查、免疫表型和SYT-SSX融合基因检测有助于确诊。

原发性肾脏滑膜肉瘤诊疗分析

目的探讨原发性肾脏滑膜肉瘤的临床及病理特点,提高对其诊断、治疗及预后的认识。方法回顾性分析我院2例原发性肾脏滑膜肉瘤的诊治资料并复习国内外文献。结果2例患者均行根治性肾切除术。经镜下检查及免疫组化染色后,病理诊断均考虑为原发性肾脏滑膜肉瘤,进一步应用RT-PCR方法检测出SYT-SSX融合基因mRNA表达,确诊为原发性肾脏滑膜肉瘤。例1术后予以辅助化疗,术后随访14个月未见复发转移。例2术后随访4个月,患者死于肺转移。结论原发性肾脏滑膜肉瘤临床罕见,免疫组化染色对诊断有重要价值,确诊需行分子遗传学检测SYT-SSX融合基因的表达。临床治疗上首选根治性肾切除术辅以化疗,预后极差。