内蒙古地区传统发酵酸马奶不同发酵时期乳清蛋白SDS-PAGE分析

[目的]探究内蒙古地区传统酸马奶发酵过程中乳清蛋白的变化情况。[方法]以从内蒙古锡林郭勒盟镶黄旗采集的马奶为原料制备传统发酵酸马奶,发酵温度为(22±2)℃,人工捣拌频率5次/d,每次300下;每隔12 h采集1次发酵0~96 h的酸马奶样品;离心提取酸马奶乳清蛋白样品,利用条件优化后的SDS-PAGE电泳技术分析酸马奶乳清蛋白在发酵过程中变化情况。[结果]优化后的SDS-PAGE电泳分析条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,分离胶电泳电压180 V、电泳时间300 min,上样浓度0.5μg/μL,上样体积16μL,改良考马斯亮蓝法染色、脱色各12 h。在发酵0~12 h内,酸马奶乳清蛋白含量增加,在12 h时达到最高值(5.12μg/μL),之后随发酵时间延长呈下降趋势,发酵96 h时降低至3.92μg/μL。SDS-PAGE电泳图谱分析显示,在分子量10~70 kDa区间内共获得乳清蛋白有效条带13个。在发酵过程中,β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白3种蛋白质含量呈现不同程度的波动,发酵72 h时三者含量之和最高,占乳清蛋白总含量的85.73%,并且在发酵过程中始终保持较高水平,是传统发酵酸马奶发酵96 h内乳清蛋白的主要组分,其中,β-乳球蛋白含量最高,平均占乳清蛋白总含量的38.92%。分子量在20~40 kDa的酪蛋白含量在发酵24 h之后开始下降,至60 h时条带消失。分子量为10.33 kDa的蛋白质在发酵12 h内被消耗,60 h时再次出现且含量随发酵时间延长逐渐增加,在84 h时达到峰值,占乳清蛋白总含量的9.84%。分子量为49.80 kDa的蛋白质在发酵72 h之后开始出现,含量在96 h时达到乳清蛋白总含量的4.11%。与其他乳清蛋白组分相比,β-乳球蛋白和免疫球蛋白含量在发酵过程中变化较小。[结论]内蒙古地区传统发酵酸马奶在发酵96 h内,分子量为10~70 kDa的乳清蛋白含量表现出有规律的消长,主要被消化分解的蛋白质是酪蛋白。不同发酵阶段酸马奶乳清蛋白组成及含量存在一定差异,但原有主要组分β-乳球蛋白、溶酶菌C和α-乳白蛋白始终保持较高水平。自发酵中期开始,酸马奶乳清蛋白中相对分子质量较小的肽(10.33 kDa)所占比例逐渐升高,由此可见,传统发酵酸马奶中不仅保留马奶中乳清蛋白原有的营养价值,而且通过发酵还增添了易吸收的小分子量蛋白质。

SDS-PAGE凝胶电泳对驴皮胶及常见伪品胶中的蛋白分析研究

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为。方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20~30μg。垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色。结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带。结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析。

SDS-PAGE analysis of whole cell protein and outer memrbane protein patterns of clinical isolates of Burkholderia pseudomallei

Objective:To investigate the banding patterns of whole cell protein(WCP) and outer membrane protein (OMP) of Burkholderia pseudomallei(B.pseudomallei) in clinical isolates from patients with melioidosis. Methods:WCP and OMP of of B.pseudomallei in 50 clinical isolates,from 47 patients with melioidosis were prepared and separated by polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) using 10%gels and stained with Coomassie brilliant blue.The banding patterns were compared by using a laser densitometer and dendrogram. Results:There were 6 different banding patterns of WCP and 2 types of OMP.Type 1 -5 WCP had 8 common protein bands at 19.0 - 45.0 kDa with identical OMP pattern.The banding patterns of WCP in type 6 were distinct from the others and also its OMP profile.The majority of clinical isolates(37/50,74%) were in type 1 WCP.Of the remaining isolates,8 were in type 2,2 in type 3,and one each was in type 4 to 6.There was no significant association between the WCP typing and the demographic or clinical features of the investigated patients.Conclusion:Despite the wide variation of clinical features of melioidosis,the results of this study show that B.pseudomallei had a few differences in the WCP and OMP profiles.Therefore typing of WCP and OMP,using SDS-PAGE analysis,could be an alternative method for phenotypic differentiation in clinical isolates of B.pseudomallei.

Characterization of seed storage protein patterns of four Iranian Pistachios using SDS-PAGE

We used SDSPAGE to evaluate and characterize the protein patterns of seed storage proteins in four pistachios cultivars (Akbari, Ahmad Aghaei, Fandoghi, and Kaleghouchi). Total protein content of pistachio seeds in all cultivars did not show any significant difference. Results of SDS PAGE pattern of a few protein bands were up regulated whereas some other bands showed down regulation. The identified protein patterns may be used protein marker for pistachio cultivars.

多倍体麦类作物Wx蛋白检测的SDS-PAGE方法

本文通过对小麦蜡质蛋白的实验和研究 ,详细论述了蜡质蛋白的特性、提取原理、电泳原理和检验原理。对多倍体麦类作物Wx蛋白亚基的检测 ,提出了应用效果良好的电泳系统 ,并就提取方法、凝胶配方和操作步骤进行了描述。本文还列出了部分麦类作物蜡质蛋白亚基基本模式示意图和实验例证 ,具有很好的参考价值。

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良

对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较,确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol·L1,pH8.0Tris-HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白,提取效率高,蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法—改良丙酮沉降法,电泳结果显示,条带清晰、数量多、分辨率高。

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析

以白果为原料,采用不同的原料处理及蛋白质提取方法,运用单因素和正交设计的方法,以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH值为考察因素,研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件,并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。结果表明:经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl提取法获得的白果蛋白含量较高;Tris-HCl法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h,白果蛋白质的提取率达到75.01%。白果蛋白SDS-PAGE分析表明,白果蛋白中约含13条亚基,主要为21kD和32kD的两种亚基,白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD,占亚基总数的77%。

木本植物蛋白提取和SDS-PAGE分析方法的比较和优化

在几种木本植物上对４种常用蛋白提取方法、４种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳的因素进行了比较研究，发现：利用改良丙酮沉降法提取蛋白，不仅提取效率高，而且杂质干扰少，得到的电泳结果，蛋白条带清晰，数量多；将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果，获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究，发现了与高水平盐胁迫有关的６６ｋＤ蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的２８ｋＤ蛋白，获得了满意的蛋白ＳＤＳＰＡＧＥ分析结果。

小麦waxy蛋白亚基1D-SDS-PAGE分离方法改良

对小麦waxy蛋白的提取技术和电泳后胶片的银染方法进行了改良∶将无胚的半粒种子研磨成粉 ,用洗液浸泡 2h代替蒸馏水浸泡过夜 ,并且去掉了用洗液反复洗涤和离心的程序 ;电泳后胶片的染色采用快速银染法代替常用的银染法 .改良后的单向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 (1D SDS PAGE)具有省时、方便、经济和有效的特点 ,可适用于大批小麦材料的waxy蛋白亚基的分析 .图 1参

应用SDS-PAGE显示小分子多肽技术的探讨

为探讨显示小分子多肽技术 ,应用SDS PAGE寻找更简单、快捷的分析小分子多肽的方法。采用 8%T ,3%C的丙烯酰胺浓缩胶和含 6mol/L脲 (或含 2 4 %的甘油 )的 16%T ,6%C的丙烯酰胺分离胶的双层不连续SDS PAGE和三羟基甘氨酸电泳缓冲液显示蛋白分子量标准 ( 2 512～16 94 9kD)和待测样品 ,并对蛋白分子量标准在这两种分离胶中进行了回归分析。结果表明在这两种条件下均能显示分子量小至 2 512kD的多肽 ;多肽样品在含脲和在含甘油的 2L T SDS PAGE中均有较好的显带 ;蛋白分子量标准的直线回归系数分别为r =- 0 966和r =- 0 964。它们是显示小分子多肽和估测其相对分子质量及对多肽分子进行进一步分析的更为简便易行的方法。

燕麦麸蛋白质的Osboren分类及SDS-PAGE电泳分析

根据微量凯氏定氮法测定了燕麦麸中蛋白质含量,40～60目之间的燕麦麸蛋白质含量最高,平均为19.42%;并对其进行Osboren蛋白质分类以及分类后各类蛋白质组分含量的测定,结果表明,燕麦麸中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白占蛋白质总量依次为63.40%、15.18%、8.18%、13.24%。SDS-PAGE电泳分析各类蛋白的组成结果表明,燕麦麸中清蛋白含量最高且蛋白质亚基分布广泛。清蛋白必需氨基酸含量高,溶解性好,易于消化吸收,为优质的营养蛋白。

大豆原料及其分离蛋白的SDS-PAGE图谱研究

将大豆原料制备成脱脂豆粕、“碱提酸沉”分离蛋白和超滤法分高蛋白，采用SDS－PAGE技术研究其中的电泳图谱变化。在所有样品的SDS－PAGE图谱中共分离出17种蛋白组分。其分子量（Mr）分别是：1号带，22840：(2，3)号带，26020：4号带，30080：5号带，32820：（6、7）号带，36850；8号带，46500：9号带，5143010号带，5692011号带，65790：12号带，70740；13号带，76060：（14、15、16）号带，9050017号带，104620。大豆原料中有16个蛋白质组分，制备成脱脂豆粕和分高蛋白后出现17号新带，同时消失11、12、13号带。用热处理和β-巯基乙醇处理样品证明了17号新带是由对热切感的蛋白质以二硫键的形式聚合而成。11、12、13号带是对热最敏感的蛋白质，一经加热都会消失，（14、15、16）这一组蛋白组分以及5号带、7号带，对热的敏感性不如11、12、13号带，但随着加热时间的延长，在SDS－PAGE图谱上也会逐渐消失。脱脂豆粕中，还消失了1号带，“碱提酸沉”大豆分离蛋白中消失了4、7号带，超滤法的大豆分离蛋白消失了1、2号带。这些SDS－PAGE图谱的变化，与三种制品各自的工艺特点有关。

苹果实生树阶段转变特异蛋白质的SDS-PAGE分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（SDS—PAGE）分析了6株苹果实生树（‘红玉’ב金冠’）叶片中蛋白质随节位升高的动态变化。结果表明，随节位升高蛋白质带发生变化，共发现了3条阶段转变特异蛋白质带，分子量分别为55kD、19kD和17kD。其中55kD蛋白质表现为定性变化，有5株实生树在36～75节出现，到101～126节消失；19kD蛋白质在实生树低节位含量高，在86—100节之后含量突然降低；17kD蛋白质在实生树低节位含量低，随着植株的发育蛋白质在36—50节含量突然增加并保持稳定，到91～105节后含量突然下降。认为这3种蛋白质是苹果实生树阶段转变的特异蛋白质。

SDS-PAGE电泳技术分析蛋白质的研究

SDS-PAGE是分析蛋白质的一项技术,重点介绍了其原理、凝胶制备及染色方法,并对双向电泳(2-DE)和电泳后蛋白质鉴定方法进行了简单的介绍。

利用A-PAGE研究谷子籽粒蛋白质多态性

研究谷子贮藏蛋白多态性对谷子品种选育和鉴定评价具有重要的意义。本文利用A-PAGE方法对来自不同生态区的24份谷子品种籽粒的水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白和醇溶蛋白的多态性进行了研究。结果发现,不同谷子品种之间籽粒水溶蛋白、酸溶蛋白谱带相似,基本没有差异;每个谷子品种的盐溶蛋白谱带有20多条,仅有4个品种出现多态性谱带,多态性也较低。说明谷子品种水溶蛋白、盐溶蛋白和酸溶蛋白A-PAGE谱带不适用于谷子鉴定研究。谷子醇溶蛋白谱带存在一定的异质性,每个品种有7~10条醇溶蛋白谱带,其中5条为公共条带,2~5条为多态性谱带,醇溶蛋白A-PAGE谱带可以作为谷子品种鉴定评价的依据。结果说明,和玉米、小麦等禾谷类作物相比,不同生态区谷子栽培品种蛋白质变异较小,遗传背景变化较小,因此需要不断丰富谷子品种的遗传基础,为谷子品种选育提供更加丰富的材料。

牛初乳、常乳和免疫乳乳清中主要蛋白的SDS-PAGE分析

采集荷斯坦奶牛初乳、常乳和免疫乳，通过SDS—PAGE电泳对其乳清中的主要蛋白进行分析。结果表明：从SDS—PAGE电泳图谱上可见有5个清晰的条带，自上而下分别为乳铁蛋白、牛血清白蛋白、IgG重链、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白。其中32d免疫乳和0～3d初乳可见有IgG轻链，其他乳样IgG轻链条带较弱。0-7d初乳乳清蛋白含量随泌乳天数的增加而逐渐下降，0～5d初乳乳清蛋白含量差异显著，并维持较低水平。免疫乳15和32d各乳清蛋白含量均高于常乳。

不同SDS-PAGE分离胶浓度条件下大豆贮藏蛋白亚基的分辨效果

采用SDS-PAGE浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度分别为9%、10%、11%、12%、13%的凝胶系统,探讨不同分离胶浓度条件下大豆籽粒主要贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基的分辨效果。结果表明,分离胶浓度大小对大豆贮藏蛋白(7S和11S组分)亚基电泳图谱分辨率的影响非常明显。分离胶浓度为9%和10%时,7S组分亚基(α′、α和β)分辨效果较好;分离胶浓度为13%时,11S组分各亚基(A3、A4A2、A1aA1b、A5、B3、B1aB1bB2和B4)分辨效果较好。如需获得较好的7S和11组分亚基综合分辨效果,以分离胶浓度为12%的凝胶系统为佳。

美国白蛾核型多角体病毒多角体蛋白的SDS-PAGE分析

Hyphantria cuea nucleopolyhedrovirus(HcNPV) and several other nucleopolyhedrosis was extracted by differential centrifugation,and purified with sucrose gradient centrifugation method.Polyhedrin was gotten and analysed by SDS-PAGE.It indicated that most of those proteins had 32 KD protein band,and with 64 KD protein,and might be the main protein dimer with the structure and found Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus protein in 18 KD department had a specific band.

利用SDS-PAGE法检测火腿肠中大豆蛋白的含量

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结合凝胶成像来分析测定火腿肠中大豆分离蛋白的含量.试验得出电泳分离肉制品中大豆分离蛋白的优化条件为：浓缩胶为5%、分离胶为12%、上样量为20μL、初始电压为80 V,进入分离胶层后电压100 V.大豆蛋白含量在06%范围内与其酸性A3亚基线性相关,回归方程为Y=2.760 9X-0.383 8,相关系数为0.994 1.

肉苁蓉属4种肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE电泳分析

目的对肉苁蓉属4个种进行鉴别。方法采用可溶性蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳。结果肉苁蓉属4个种的SDS-PAGE图谱存在显著差异,其多态性条带为81.82%。结论各个种的电泳图谱可以相互区别,肉苁蓉属可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱可作为种间鉴定的蛋白指纹图谱。