禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立

采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的IgG。将IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心Dot-ELISA试验操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,以及各步反应时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。结果表明,所制备的AI高免血清HI效价为10log2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1∶50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1∶100;待检抗原与2种抗体的感作时间均为0.5h(37℃)。优化后的检测方法可在2.5h内诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。而且敏感性提高了3倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合症病毒液无交叉反应。

双抗体夹心Dot-ELISA诊断新疆地区皮肤利什曼病

应用双抗体夹心Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法诊断新疆皮肤利什曼病患者的循环抗原或抗原—抗体复合物获得较好的结果。实验证明，经皮肤组织病理切片，原虫确诊的３０例患者，２５例为阳性反应（８３．３％）。同时对麻风病、结核病以及疟疾患者进行交叉试验，均为阴性。

ELISA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒

用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３例，后１３例包括在前１６例中。从８４例腹泻犬粪样中随机取３８例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结果显示，在南京地区流行的犬腹泻中，ＣＣＶ感染比例有超过ＣＰＶ的趋势。

两种ELISA方法检测日本血吸虫病循环抗原的比较

[目的 ]比较两种ELISA方法检测血吸虫病患者血清中的循环抗原的效果。 [方法 ]以单克隆抗体为基础的斑点 ELISA和夹心 ELISA。 [结果和结论 ]斑点 ELISA与夹心 ELISA的阳性检出率分别为 48 0 %～ 98 8%和 12 0 %～ 93 8%。两法的特异性依次为 95 4%～ 10 0 %及 90 %。

1993-1995年南京市哨鼠疫水测定报告

在流水中进行哨鼠疫水测定，近三年共测定６次，放哨鼠１３８只，解剖１１５只，阳性１０９只，感染率９４．８％，共检获血吸虫８４１８条，阳性鼠平均每鼠感染７７．２条。在内河，哨鼠感染率９８．１％。（５２／５３），共检获血吸虫７５２６条；江滩１００％（５０／５０），８１６条；长江（南京长江大桥附近）５８·３％（７／１２），７６条。哨鼠疫水测定结果表明，血吸虫感染仍较重，疫区人民应加强防范。

检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。

应用斑点金免疫渗滤法诊断日本血吸虫病

目的：探索一种便捷的血吸虫病诊断方法。方法：在原已建立的ＥＬＩＳＡ法的基础上，应用３个针对日本血吸虫抗原的不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法。抗原与抗体通过渗滤在硝酸纤维薄膜上进行反应，数分钟用肉眼观察结果。结果：本法检测ＳＥＡ的敏感度为１６ｎｇ／ｍｌ，在６９例慢性日本血吸虫病患者血清的检测中，阳性率为６０．８％，特异性为９５．２％；同时用ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测１３７例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为５４．７％、特异性为９４．６％；夹心ＥＬＩＳＡ检测１１８例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为６１．９％、特异性为９５．７％。结论：经数理统计Ｇ检验证实斑点金免疫渗滤法的敏感性和特异性同ＥＬＩＳＡ相近，且操作更简便且快速。

双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用

目的 探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 (S- DIGFA)在现场的应用价值。方法 在原已建立的以抗 2 6 k Da GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的 S- DIGFA的基础上 ,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共 1388份 ,并以双抗体夹心EL ISA(S- EL ISA)作对照。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清30 0份 ,阳性检出率分别为 15 .7%和 17.3% ;两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清 10 88份 ,阳性检出率分别为 3.9%和 3.7%。结论 S- DIGFA检测循环抗原可在现场扩大应用和作血清流行病学调查。

组合单克隆抗体夹心斑点-ELISA检测日本血吸虫循环抗原的研究

本研究将抗不同表位单抗组合，首次用于夹心斑点-ＥＬＩＳＡ检测血吸由感染。对慢性日本血吸虫病患者的阳性检出率为８５％，１２例急性患者均阳性，１０例晚血病人４例阳性，非疫区正常人的假阳性率为２．２％。用单盲法检测的-组血清其符合率亦较满意。在基本消灭血吸虫病地区检测了１１００人，用夹心斑点-ＥＬＩＳＡ测抗原，阳性率为６．５％，以ＩＨＡ测抗体阳性率为２５．２％。在低年龄组人群，斑点ＥＬＩＳＡ与ＣＯＰＴ符合率为８８．９％，明显高于ＩＨＡ与ＣＯＰＴ的符合率（３５．７％），Ｐ＜０．０５。动物实验中，组合单抗夹心班点ＥＬＩＳＡ对低感染兔的阳性检出率高于单个单抗直接斑点-ＥＬＩＳＡ。

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测血吸虫循环抗原的研究

目的 探索一种简捷的检测血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽 - S-转移酶 (r Sjc2 6 GST)的多克隆抗体标记胶体金 ,建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法 (S- DIGFA) ,并以 S- EL ISA作对比。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测 95例慢性血吸虫病患者 ,阳性检出率分别为 81.0 5 %和 82 .11% ;正常人血清 180份 ,两者的假阳性率分别为 6 .6 7%和 7.78%。结论 经统计分析证明 S- DIGFA的敏感性和特异性与 S-EL ISA相近 ,且方法更简便快速 ,适合于基层应用。并表明 r Sjc2 6 GST抗原具有诊断血吸虫病的应用价值。

几种实验/探针系统对日本血吸虫循环抗原检出效果的比较观察

目的：比较５种试验／探针系统检测感染兔血清中循环抗原（ＳＣＡ）的效果。方法：用单雄性和单雌性尾蚴分别感染９只家兔，以复性尾蚴感染７只家兔作对照；感染后定期采血。另１５兔分３组感染２５０条尾蚴。１，２组于感染后１９ｄ和４５ｄ分别开始给予丙烯基硫脲（２９５－５９０ｍｇ／ｋｇ）以抑制虫卵形成，第３组作对照；均定期采血。检测方法计５种：１斑点－ＥＬＩＳＡ／抗成虫表膜单抗（８ＳＥ４），２斑点－ＥＬＩＳＡ／抗ＣＣＡ单抗（３Ｄ１０），３夹心斑点－ＥＬＩＳＡ／抗虫卵单抗（ＭＧ２），４夹心法－ＥＬＩＳＡ／抗虫卵单抗（２Ｈ１０），５夹心法－ＥＬＩＳＡ／抗ＣＡＡ单抗（ＩＢ１０）。结果：９只单雄性尾蚴和９只单雌性尾蚴感染兔血清１法均为阴性，２法仅１只检出雄虫１３３条的家兔出现阳性反应，５法单雌性感染均阴性、单雄性感染３／９兔阳性。服药抑制虫卵形成的兔血清，１９ｄ开始服药５兔１法及３法均未检出ＳＣＡ，４６ｄ开始服药组在感染后６－７ｗｋ二法均检出ＳＣＡ。４法服药与未服药兔均为阴性，５法感染后６ｗｋ的血清服药与未服药兔均呈阳性反应。结论：不同的试验／探针系统的检测效果不同，但所试３种方法（１，２，５种）都不能检出单雌性感染。抑制虫卵形成?

化疗用于农村常见肠道蠕虫病防治的效果研究

化疗用于农村常见肠道蠕虫病防治的效果研究安徽省血吸虫病防治研究所芜湖２４１０００朱传刚，方国仁，张洁，汪天平，葛继华和县血吸虫病防治站徐明荣，张帮炬，薛彦金，吴代刚肠道蠕虫感染在我国农村地区非常普遍。以蛔、钩、鞭虫为主。１９９１年在和县陈桥洲发现居民...

应用McAb法检测包虫病人尿液抗原

用ＭｃＡｂ－Ｓａｎｄｗｉｃｈ－ＥＬＩＳＡ（夹心法）及ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ（点免疫法）同步检测了４６例包虫病人及４２例正常人的不同抗原样品，结果表明：ＭｃＡｂ夹心法对患者血清、尿液抗原阳性检出率分别为：８０．４３％、７８．２６％，明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），且血清与尿液抗原检测结果无差别（Ｐ＞０．０５），具有相关性（Ｐ＜０．０５）；点免疫法抗原检出率分别为７３．９１％、５８．７９％。两法在检测尿液抗原上有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。提示前法优于后法。推荐检测尿液抗原（夹心法）进行包虫病的无损伤性免疫诊断。

同步检测血清和唾液中的棘球蚴抗原及其特异性抗体

应用 Mc Ab- Sandwich- EL ISA(夹心法 )及 Dot- EL ISA(点免疫法 )同步检测了包虫病病人的不同抗原、抗体样品 ,结果表明 Mc Ab夹心法对患者血清、唾液抗原阳性检出率分别为 80 .43%和 6 0 .87% ;点免疫法对血清、唾液抗体检出率为86 .96 %和 78.2 6 % ,均明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,对抗原、抗体的同步检测结果进行显著性及相关性分析 ,得出血清抗原检测可取代以往的血清抗体检测 ,唾液抗体检测可代替血清抗体进行包虫病的无损伤性免疫诊断。

383例晚期血吸虫病并发肝癌的临床分析

３８３例晚期血吸虫病并发肝癌的临床分析湖北省仙桃市血防医院仙桃４３３０００杜贤哲，杜华，钟享玲我院从１９８８—１９９５年共收治腹水型晚期血吸虫病３－８３例，并发肝癌４１例，占１０．７％。现分析如下：１临床资料１．１对象３８３例晚血患者，男３３８例，女...

检测受染小鼠血清中循环抗原以诊断旋毛虫病的研究

应用双抗体夹心-ELISA法检测了94只受染小鼠血清中的旋毛虫幼虫循环抗原。受染3d后,即有7％的小鼠显示阳性反应,受染30d后,无论受染幼虫数目多寡(50、150及300条幼虫/只),全部受染鼠(100％)均显示阳性反应。给予丙硫苯咪唑治疗后的第1周,循环抗原的阳性率仍为100％,但在治疗后第2、3及4周,则分别降为60％、20％及10％,表明循环抗原的检测对诊断旋毛虫感染及考核药物疗效起一定作用。

阿苯达唑合并噻嘧啶驱除肠道线虫效果观察

阿苯达唑合并噻嘧啶驱除肠道线虫效果观察四川简阳市卫生防疫站简阳６４１４００魏良君，赖三波，卿明虎，段斌阿苯达唑系高效驱虫药物［１］，但驱虫作用缓慢，可导致胆道蛔虫等严重付反应［２］。噻嘧啶则能阻断虫体神经肌内传导，使虫体迅速痉挛性麻厚而死亡［１］。我...

Monoclonal antibody-based serological methods for maize chlorotic mottle virus detection in China

Maize chlorotic mottle virus (MCMV) infects maize plants and causes significant losses in corn production worldwide. In this study, purified MCMV particles were used as the immunogen to produce monoclonal antibodies (MAbs) and polyclonal antibodies (PAbs). Four murine MAbs (4B8, 8C11, 6F4, and 9G1) against MCMV were obtained through the hybridoma technology. The triple antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (TAS-ELISA), dot-immunobinding assay (DIBA), and immunocapture reverse transcription-polymerase chain reaction (IC-RT-PCR) using the MAb 4B8 were then developed for sensitive, specific, and rapid detection of MCMV in fields. MCMV could be detected in infected leaf crude extracts at dilutions of 1:327 680, 1:64000, and 1:3276800 (w/v, g/ml) by TAS-ELISA, DIBA, and IC-RT-PCR, respectively. One hundred and sixty-one maize field samples showing virus-like symptoms and sixty-nine symptomless maize field samples from ten different provinces of China were collected and screened for the presence of MCMV using the established serological methods. A phylogenetic tree was constructed based on the full length CP genes and Chinese MCMV isolates formed one branch with Thailand isolates. The detection results demonstrated that MCMV is one of most prevalent viruses infecting maize in the Yunnan and Sichuan provinces of China.

凤果花叶病毒高灵敏度血清学检测技术

目的:建立基于单克隆抗体的检测番茄等植物中凤果花叶病毒(PepMV)的血清学方法,为PepMV的田间调查和诊断及其科学防控提供快速实用的检测技术。创新点:首次制备了抗PepMV的高度特异和灵敏的单克隆抗体,并利用制备的单抗建立了3种能特异且灵敏地检测PepMV的血清学方法。方法:以差速离心方法提纯的PepMV粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了能稳定传代并分泌PepMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株;杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔获得单克隆抗体腹水,并以制备单抗为核心,根据血清学原理建立检测植物中PepMV的双抗夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA)三种血清学检测方法;利用田间番茄样品分析建立的血清学方法检测PepMV的有效性。结论:利用杂交瘤技术获得了6株能分泌高度特异灵敏PepMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以分泌的单抗为核心建立了检测植株中PepMV的DASELISA,Dot-ELISA和Tissue print-ELISA三种高度灵敏的血清学新技术。三种建立的血清学技术检测感染PepMV的番茄植株均呈强阳性反应,而检测健康番茄及感染其他5种植物病毒的植株呈阴性反应,且DAS-ELISA和Dot-ELISA血清学技术检测番茄病叶粗提液的灵敏度分别达到1:1310720和1:20480倍稀释(质量体积比,g/mL)。田间样品检测结果发现,建立的血清学技术的检测结果与反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的检测结果一致,表明建立的血清学方法可有效地用于植物中PepMV的检测。同时,本研究首次发现PepMV己在我国云南番茄作物上发生流行。PepMV单克隆抗体的制备及其灵敏血清学检测方法的建立有益于PepMV的田间调查和诊断及其科学防控。