三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响

目的:探讨三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响,探究三物白散抗胃癌的作用机制。方法:将28只SPF级雄性大鼠随机分为4组,每组7只,分别予以0.03125、0.0625、0.1250 g/(kg·d)三物白散及相同体积生理盐水灌胃,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养AGS细胞,设置空白对照组(空白组)、三物白散低剂量含药血清组(低剂量组)、三物白散中剂量含药血清组(中剂量组)、三物白散高剂量含药血清组(高剂量组)。采用CCK-8法检测不同浓度(5%、10%、15%、20%)三物白散含药血清对AGS细胞活性的影响;倒置显微镜下观察三物白散含药血清对AGS细胞形态的影响;RT-qPCR法检测Beclin1 mRNA、LC3 mRNA、p62 mRNA表达;Western blotting法检测Beclin1、LC3、p62蛋白表达。结果:与空白组比较,5%、10%、15%、20%三物白散高剂量含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制AGS细胞活性;随着含药血清浓度升高,细胞形态逐渐不规则,细胞数量逐渐减少;中、高剂量组Beclin1 mRNA、LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量均高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01);低剂量组LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01)。高剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均高于空白组,p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01);中剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高于空白组(P<0.05或P<0.01),p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01)。结论:三物白散对胃癌细胞的增殖有抑制作用,上调Beclin1、LC3表达、下调p62的表达、诱导胃癌细胞自噬可能是其抗胃癌作用机制之一。

三物白散加味方影响胃癌相关基因表达的实验研究

目的 观察三物白散加味方对胃癌相关基因表达的影响。方法 以三物白散加味方含药血清加入人胃癌SGC 790 1细胞中 ,观察P5 3、Bcl 2、rasp2 1、CD4 4基因表达的变化。结果 三物白散加味方可降低人胃癌SGC 790 1细胞的P5 3、Bcl 2、rasp2 1、CD4 4基因表达率。

三物白散加味方影响肿瘤多药耐药基因表达实验研究

观察三物白散加味方对肿瘤多药耐药(MDR)基因表达的影响。以三物白散加味方含药血清加入人胃癌SGC-7901细胞中,观察MDR基因表达的变化。结果:三物白散加味方可降低人胃癌SGC-7901细胞MDR基因表达率。提示三物白散加味方临床不易产生多药耐药,并可作为MDR逆转剂使用。

三物白散含药血清对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡及survivin基因表达的影响

目的研究三物白散含药血清对人胃癌MGC-803细胞株的增殖、凋亡及survivin基因表达的影响。方法体外实验选择MGC-803细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照,采用MTT比色及吖啶橙、EB染色法检测低、中、高3组三物白散大鼠含药血清对MGC-803细胞增殖、凋亡的影响,运用RT-PCR法检测survivinmRNA的表达。结果三物白散含药血清作用MGC-803细胞后,随着三物白散含药血清药物浓度的增加及作用时间的延长,细胞增殖率逐渐降低,细胞抑制率、凋亡率逐渐升高,survivin蛋白的表达相应的降低。结论三物白散含药血清能够抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,对细胞有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及sur-vivin基因表达下降。

三物白散对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的通过体外实验观察三物白散大鼠含药血清对人胃癌SGC-7901细胞的增殖、凋亡抑制作用及其机制。方法选择雄性SPF级大鼠随机分成4组,分别予以0.035、0.07、0.14g/（kg.d）三物白散及生理盐水灌胃,按＂通法＂制备三物白散大鼠含药血清。体外实验选择SGC-7901细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝比色及吖啶橙、EB染色法检测低、中、高3组三物白散大鼠含药血清对SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。结果不同剂量组的三物白散含药血清处理细胞12~72h后,各组OD比值均有不同程度的下降。且随三物白散含药血清质量浓度的增大、作用时间的延长,OD比值及存活率逐渐下降,且抑制率以高剂量三物白散含药血清作用48h为最高,可达69.2%。三物白散含药血清处理48h后的细胞中,低、中、高剂量三物白散含药血清作用SGC-7901细胞48h后各组的凋亡率依次为25%、32%、54%,并随质量浓度的升高、时间的延长而增加。高质量浓度的三物白散作用后,细胞凋亡率随作用时间的延长而增加。结论三物白散在一定剂量、时间范围内,能够抑制SGC-7901细胞增殖,并呈一定的剂量、时间依赖性。三物白散可诱导细胞凋亡,该作用呈一定的剂量、时间依赖性。

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞凋亡、迁移的影响

目的探讨三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞凋亡、迁移的影响。方法将实验分成6组:空白对照组、LV-RNAi组、Survivin-RNAi-LV组、空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组、Survivin-RNAi-LV+中药组;采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,划痕实验检测各组细胞的迁移能力。结果细胞凋亡率:Survivin-RNAi-LV组明显高于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较明显较高(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组高于Survivin-RNAi-LV组,差异具有统计学意义(P<0.05)。胃癌细胞的24 h迁移率:Survivin-RNAi-LV组明显低于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较,其结果明显低于后两组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与Survivin-RNAi-LV组比较,细胞迁移率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Survivin基因沉默转染,增强了三物白散诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和抑制其迁移的作用。

三物白散加味方癌化学预防作用实验研究

目的:观察三物白散加味方癌化学预防作用。方法:进行三物白散加味方抗变、影响rasP21基因表达、抗氧化三项研究。结果:三物白散加味方中、大剂量组有抗变和降低rasP21基因表达作用;小剂量组有抗氧化作用。结论:从初步研究认为,三物白散加味方具有癌化学预防作用。

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞的影响

目的观察中药三物白散对含存活素(Survivin)基因沉默的慢病毒颗粒(Survivin-RNAi-LV)转染人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法分别采用RT-PCR(聚合酶链式反应)、Western blot方法检测人胃癌SGC-7901细胞中Survivin m RNA和蛋白的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况、流式细胞仪检测凋亡率及三物白散对其增殖抑制率及凋亡率的影响。结果重组慢病毒颗粒介导的Survivin基因沉默转染人胃癌SGC-7901细胞可有效使Survivin m RNA和蛋白的表达沉默;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡;Survivin基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞组应用三物白散,其细胞增殖弱于、细胞凋亡率高于三物白散+空白对照组和三物白散+阴性对照组(P<0.05)。结论含Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞,能够抑制SGC-7901细胞Survivin的表达,三物白散对Survivin基因沉默转染后胃癌细胞的杀伤力较未转染细胞有明显的提高。

三物白散对Ana-1巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SWB中小剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05);吞噬实验,SWB大剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05),并呈现剂量依赖关系;趋化实验,SWB各剂量组与空白组相比差异显著,呈现剂量依赖关系;与空白对照组相比,SWB各剂量组IL-1β水平升高,大剂量组IL-1β表达差异显著(P<0.05);IL-6、TNF-α的表达无显著差异。结论:SWB体外可显著活化巨噬细胞,促进增殖、提高吞噬能力,上调Th1型细胞因子IL-1β的表达。

《伤寒论》中的泻下剂及其配伍规律浅析

《伤寒论》中的泻下剂有以下几首:十枣汤、三物白散、大承气汤、大柴胡汤、大陷胸汤、大陷胸丸、小承气汤、小陷胸汤、抵挡丸、抵挡汤、桃核承气汤,调胃承气汤和麻子仁丸。综合上述13首方子,均可看到承气汤的影子。热与水谷互结治以承气汤加减;热与湿相结治以承气汤配伍化湿逐水之药;热与血结成瘀血而致病治以承气汤配伍化瘀逐血痹之药。故凡是有热为患即可用承气汤为底方酌情加减。可见承气汤在下法中占有非常重要的地位。

重型和危重型新型冠状病毒肺炎经方治疗探讨

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)具有极强的流行性和传染性,临床主要表现为发热、干咳、乏力,重症者可有呼吸困难,严重者则快速进展为呼吸窘迫综合征、脓毒血症休克等,甚至死亡。本文结合COVID-19的临床表现和国家卫生健康委颁发的诊疗方案,从六经传变的角度分析COVID-19的病情特点,探讨重型和危重型COVID-19的经方治疗,为疫情的临床防治提供参考。

基于网络药理学探讨三物白散治疗胃癌的分子机制及初步验证

目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散潜在靶点与胃癌靶点相匹配,获得三物白散抗胃癌的作用靶点,使用STRING数据库对作用靶点进行蛋白互作分析,构建PPI网络,并进行拓扑分析筛选核心靶点;用R语言对作用靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析;采用Auto Dock Vina软件对核心靶点与对应活性成分进行分子对接;运用qPCR验证三物白散对胃癌细胞SGC-7901中Caspase-3、Caspase-7作用靶点的调控作用。结果经筛选获得三物白散活性成分17个,三物白散作用靶点84个,经拓扑分析得到12个核心作用靶点,包括TP53、AKT1、MAPK1、JUN、CASP3等。三物白散作用靶点涉及PI3K-AKT、p53、HIF-1、IL-17等多条信号通路,通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、调节缺氧及炎性微环境发挥抗肿瘤作用。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点有良好的结合能力。体外实验结果证实,三物白散可上调凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-7的表达,这在一定程度上证实了网络药理学预测及指导实验设计的可靠性。结论本研究结果体现了三物白散多成分、多靶点、多通路的治疗特点,系统地揭示了其抗胃癌的药效物质、核心靶点和信号通路,为后续深入研究作用机制提供参考。

中医药治疗胃癌实验研究简况

胃癌发病机制仍不明确,中医药对胃癌具有较好的防治作用。刺五加皂苷、南蛇藤提取物、左金丸醇提物,三物白散,菝葜、红藤、藤梨根三药联合可有效促进胃黏膜细胞凋亡减少、增殖增加;吴茱萸碱、蛇六谷提取物、通莲汤、人参皂苷、重楼总皂苷、蟾毒灵可有效调控信号传导通路;半夏泻心汤、消痰散结方有改善细胞微环境功能;君子扶正汤和环磷酰胺联合应用及灵芝合剂、健脾复方、紫草素具有调节免疫功能作用;粉防己碱、贝母素乙、柳茶水提物、温郁金正丁醇提取物等可以逆转胃癌多耐药。中医药治疗胃癌实验研究多为套用现代医学模式、低水平重复、多向性、分散研究,创新不足;中西医结合研究较少,中医药与现代研究关联性不足,相关因子及信号通路选择与中医证候缺乏关联性,未突出中医药理论指导与特色。中医药防治胃癌机制研究前景广阔。

《伤寒论》三物白散抗肿瘤作用研究进展

三物白散为《伤寒论》温下攻邪之代表方。基于三物白散的临床抗肿瘤效应,本课题组一直致力于其作用机制研究,发现该方能有效抑制肿瘤细胞增殖,下调肿瘤细胞释放相关免疫抑制因子,拮抗肿瘤细胞多药耐药,防止肿瘤的复发转移,从不同层次阐明了该方"祛邪"的科学内涵。同时,该方在一定浓度范围及作用时限内还能直接诱导胸腺细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞等的活化增殖,释放相关细胞免疫正相调节因子,证实了该方体现的以"祛邪"之体实现"扶正"之用治则。

基于祛痰作用的三物白散配伍机制的拆方研究

目的拆方研究三物白散各药味组合对"寒痰证"的祛痰作用,探讨方中药味配伍机制。方法通过冰水浴和灌胃冰水的方法制备小鼠"寒痰证"模型,通过气管酚红排泌实验模型,比较各组合的祛痰作用,并利用计算机辅助层级聚类分析,探讨三物白散拆方后各药味组合机制。结果三物白散全方、巴豆配伍桔梗和巴豆配伍贝母具有显著祛痰作用(P<0.05),单用巴豆则无明显祛痰作用。层级聚类结果显示含巴豆与不含巴豆的组合为不同的作用类型,配伍巴豆的实验组祛痰作用明显增强。结论三物白散方中巴豆需配伍桔梗或贝母后表现出较强的祛痰作用。

三物白散通过影响FXR表达逆转Th1/Th2漂移发挥抗肝癌免疫应答作用

目的:探讨三物白散干预肝癌原位移植瘤小鼠Th1/Th2细胞因子水平、回肠组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的表达及其和肠道菌群间的关系。方法:将ICR小鼠随机分为5组,即空白组、模型组、三物白散(56.47 mg·kg^(-1))组、万古霉素(5 mg·kg^(-1))组、消胆胺(2%消胆胺饲料)组,除空白组外,其余组采用肝内注射H22细胞复制肝癌模型,连续给药3周后,HE染色观察肿瘤细胞病理变化;ELISA法检测小鼠血清和肝脏组织中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)水平;运用q-PCR和Western Blot法检测小鼠回肠组织中FXR的表达;通过16S rRNA法检测小鼠肠道菌群表达。结果:与模型组比较,三物白散组和万古霉素组Th1细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ水平升高,Th2细胞因子IL-4和IL-10水平降低;回肠组织FXR表达降低;肠道中梭状芽孢杆菌丰度降低。结论:三物白散可能通过调节肠道菌群结构,下调回肠组织FXR的表达,逆转Th1/Th2漂移,发挥抗肝癌免疫应答作用。

巴豆及其应用

巴豆攻坚散结、泻下通腑,因其作用峻猛,故现今医者少用,患者畏惧,但巴豆有其独特作用,每能起沉疴痼疾。巴豆在《伤寒杂病论》中多用于救急,共出现5次,见于4首方剂,分别为三物白散(《金匮要略》为桔梗白散)、走马汤、九痛丸与三物备急丸,所治疾病分别为寒实结胸、肺痈、中恶、九种心痛、心腹诸卒暴百病等。巴豆炮制之后既可减少巴豆中植物蛋白的毒性作用,又可避免有效成分巴豆霜的流失,故临床应在掌握其适应证、适应剂量与急救方法的情况下,大胆使用,但应注意巴豆主要针对体质壮实者,需中病即止,勿过量使用。