施氏鲟水霉病病原的初步研究

从患水霉病的施氏鲟(Acipenser schrenckii)幼鱼肌肉中分离获得一株优势水霉菌株XJ001。大麻籽上水霉XJ001培养物的形态观察表明,菌丝透明无间隔,分枝少;新孢子囊以层出方式产生或从旧孢子囊根部长出,游动孢子按水霉属方式释放;在7℃、15℃和25℃条件下不能产生有性器官,但能够产生大量的厚垣孢子。电镜观察发现第二孢孢子表面具有大量弯曲的长毛,其在25%GY培养液中呈现出间接萌发。根据形态及生理学特征将水霉XJ001鉴定为寄生水霉(Saprolegnia parasitica)。水霉XJ001的最适生长温度为25℃,对NaCl敏感,当PDA培养基中NaCl质量分数为1%和2%时,水霉生长抑制率分别为37.4%和75.6%;质量分数大于3%时,生长被完全抑制。用水霉XJ001对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)进行人工感染,结果表明XJ001有较强的致病力,异育银鲫感染严重,体表出现棉花状白毛,感染率为83.3%,感染后的死亡率为100%,可见XJ001是施氏鲟水霉病的病原菌。

壳聚糖对草鱼人工感染水霉的影响

水霉病给水产养殖业造成巨大经济损失[1,2],水霉是引起鱼类发生水霉病的主要病原,其适应温度范围广（5-26℃）,分布范围亦很广[3]。水霉对宿主无严格的选择性[4,5],除鱼卵外,鱼类水霉病均非原发性疾病,而是继发性疾病[6,7]。当鱼类皮肤或鳃受到机械损伤及其他病原体的伤害时,水霉孢子会在伤口处侵染萌发。目前国内市场上还没有一种药物可有效防治水霉病,防治水霉病成为水产养殖行业的一个重要难题。如何减少水霉病的发生成为水霉病研究的重要部分。由于水霉是腐生性的,未受伤的鱼不受感染[8,9],所以促进鱼体伤口愈合成为减少水霉病发生的一条重要途径。

松萝酸对3种水霉病致病菌的抑菌作用

水霉、绵霉和腐霉可感染许多水产养殖动物,导致水霉病等多种疾病,对水产养殖产业造成巨大的经济损失.研究不同质量浓度的松萝酸丙酮溶液对3种水霉病致病菌寄生水霉(Saprolegnia parasitica)、两性绵霉(Achlya bisexualis)和腐霉属下的Pythium capillosum菌株的影响,以期为防治水霉病提供新的资料和方法.结果表明:不同质量浓度的松萝酸丙酮溶液对寄生水霉和两性绵霉均有抑制作用;而低质量浓度松萝酸丙酮溶液(2,4mg/L)对P.capillosum的生长有促进作用,其余质量浓度的松萝酸丙酮溶液则对P.capillosum的生长有抑制作用.松萝酸丙酮溶液有望成为防治水霉病的新型药剂.

拮抗水霉菌株的筛选及抑菌蛋白的分离纯化

水霉病是一种广泛存在于水体中的真菌性病原菌,无寄主选择性,目前渔业生产上主要依赖化学药物防治,导致病原菌的抗药性增强.本研究通过平板对峙培养法,筛选到5株具有拮抗活性的菌株.通过硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶和离子交换树脂等方式进行分离纯化,从Bacillus subtilis strain TCCC11201发酵液中分离得到一个对水霉病菌具有抑制活性的蛋白,经SDS-PAGE电泳检测,其相对分子质量为2×104.菌株TCCC 11201代谢产生的活性蛋白具有防治水霉病的潜在应用价值.

抗水霉菌菌株的分离鉴定与应用

水霉病(saprolegniasis)是危害淡水养殖鱼类的重要疾病,其相关防治策略尤其是环境友好的绿色生物防治制剂研制与应用是近年来科研与养殖一线的关注点。本研究通过分子扩增、测序以及生化鉴定等方法,从患水霉病的异育银鲫中分离鉴定了一株寄生水霉(Saprolegnia parasitica)JY1,并从正常淡水养殖环境中分离获得一株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)JD;2个菌株与寄生水霉菌株SP/OM/UK/H4/2021和荧光假单胞菌菌株L321的序列相似度分别为99.85%和100%。荧光假单胞菌JD与寄生水霉JY1的体外对峙试验结果显示,JD可在长满寄生水霉的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板上缓慢而持续抑杀JY1,直至JY1菌丝全部降解;菌株JD和JY1在液体沙氏培养基中共培养时则显示,共培养的寄生水霉JY1出现菌丝管壁破损,菌丝折断、脱落,孢子囊壁破损,菌丝和孢子囊内孢子逸出等现象,最后大量菌丝降解、死亡。结果表明,荧光假单胞菌菌株JD或其分泌成分具有开发成防治淡水鱼水霉病制剂的潜力。

生物表面活性剂鼠李糖脂对寄生水霉的体外抑制作用

为研究生物表面活性剂鼠李糖脂(rhamnolipid)对寄生水霉Saprolegnia parasitica的体外抑制作用,开发水生动物水霉病的新型绿色防控制剂,采用倍比稀释法、菌丝生长速率法、菌丝干质量法和孢子萌发试验对鼠李糖脂抑制寄生水霉的活性进行检测,通过测定寄生水霉菌体电导率,研究鼠李糖脂对寄生水霉菌体细胞膜通透性的影响,并用光学显微镜、电子显微镜观察鼠李糖脂对寄生水霉菌丝体形态学的影响。结果表明:鼠李糖脂对寄生水霉菌丝和孢子的最小抑制浓度(MIC)分别为125、15.625 mg/L;当鼠李糖脂质量浓度为15.625 mg/L时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为59.84%、85.70%,且鼠李糖脂对寄生水霉菌丝生长抑制率和孢子萌发抑制率均随鼠李糖脂质量浓度的增加而升高;电导率试验显示,鼠李糖脂使寄生水霉菌体细胞膜通透性增加,以15.625 mg/L鼠李糖脂处理寄生水霉孢子10 h后,电导率升高了39.57%,以125 mg/L鼠李糖脂处理寄生水霉菌丝体6 h后,电导率升高了68.10%;形态观察显示,鼠李糖脂对寄生水霉菌丝体具有一定的破坏作用。研究表明,鼠李糖脂对寄生水霉具有良好的抑制效果,本研究结果可为研制绿色新型水生动物水霉病防控制剂提供新的思路。

感染水霉病的黑斑原[鱼兆]皮肤的组织结构和Toll-like受体及其相关信号通路基因在皮肤中的表达

为探讨黑斑原[鱼兆](Glyptosternum maculatum)水霉病的致病机理,采用组织学、分子生物学以及转录组学方法研究体质量为(58.16±26.65)g的黑斑原[鱼兆]感染水霉病后皮肤组织形态结构变化、Tolling-like受体及其相关信号通路基因在皮肤中的表达。结果表明,人工感染水霉菌后,黑斑原[鱼兆]体表伤口处可明显观察到菌丝,随着感染时间的增长,病灶迅速扩大,菌丝体的长度不断增长,呈棉絮状;菌丝周围裸露的真皮出现红肿甚至溃烂,感染个体大量死亡。基于转录组数据,共获得黑斑原[鱼兆]Tolls样受体基因7种,分属于不同的Tlr家族。实时荧光定量PCR结果显示,感染水霉菌48 h后,皮肤中tlr3和tlr13基因的表达量显著上调,tlr2和tlr6基因的表达量则显著下调,Toll-like受体信号转导通路中关键细胞因子myd88、asc、rac1、traf6、fadd、mip和il8等基因的表达量降低。综上所述,黑斑原[鱼兆]感染水霉菌可导致皮肤损伤和炎性病变,水霉菌通过下调tlr2、tlr6、myd88等基因的表达,使TLR/Myd88/NF-κB信号通路传递受限,皮肤免疫功能降低,增加水霉菌的易感性。