目的 构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 (Sj Yol Fer)的真核表达重组质粒 p L Yol Fer,转染 Hela细胞进行表达 ,并对表达产物进行鉴定。 方法 用 PCR法从日本血吸虫大陆株成虫 c DNA文库中扩增目的基因片段 ,经 RNA斑点杂交显示转录差...目的 构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 (Sj Yol Fer)的真核表达重组质粒 p L Yol Fer,转染 Hela细胞进行表达 ,并对表达产物进行鉴定。 方法 用 PCR法从日本血吸虫大陆株成虫 c DNA文库中扩增目的基因片段 ,经 RNA斑点杂交显示转录差异 ,然后定向克隆入表达载体 p L XSN。转染重组体到 Hela细胞中进行表达 ,并用 SDS- PAGE和 Westernblot分析表达产物。 结果 PCR扩增产物大小约 6 0 0 bp左右 ,与雌虫 RNA的杂交信号明显强于雄虫。获得重组质粒p L Yol Fer,特异性表达产物约为 2 1ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别。 结论 为进一步免疫原性实验奠定了基础。展开更多
文摘目的 构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 (Sj Yol Fer)的真核表达重组质粒 p L Yol Fer,转染 Hela细胞进行表达 ,并对表达产物进行鉴定。 方法 用 PCR法从日本血吸虫大陆株成虫 c DNA文库中扩增目的基因片段 ,经 RNA斑点杂交显示转录差异 ,然后定向克隆入表达载体 p L XSN。转染重组体到 Hela细胞中进行表达 ,并用 SDS- PAGE和 Westernblot分析表达产物。 结果 PCR扩增产物大小约 6 0 0 bp左右 ,与雌虫 RNA的杂交信号明显强于雄虫。获得重组质粒p L Yol Fer,特异性表达产物约为 2 1ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别。 结论 为进一步免疫原性实验奠定了基础。
