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Distribution of bone morphogenetic protein receptors in human scleral fibroblasts cultured in vitro and human sclera 被引量:3
1
作者 Zhen-Ya Gao Li-Jun Huo +3 位作者 Dong-Mei Cui Xiao Yang Wen-Juan Wan Jun-WenZeng 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2012年第6期661-666,共6页
AIM: To investigate the distribution of bone morphogenetic protein receptors (BMPRs) in human scleral fibroblsasts (HSFs) and in human sclera. METHODS: Primary HSFs were cultured in vitro. The mRNA levels of BMP-2 and... AIM: To investigate the distribution of bone morphogenetic protein receptors (BMPRs) in human scleral fibroblsasts (HSFs) and in human sclera. METHODS: Primary HSFs were cultured in vitro. The mRNA levels of BMP-2 and BMPRs in HSFs were assayed by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The protein distributions of BMP-2 and BMPRs in HSFs were further detected by immunocytofluorescence and western blot. Their protein expression was also detected in frozen human posterior scleral sections by immunohistofluorescence. RESULTS: BMP-2 and BMPRs were expressed in both HSFs and human sclera not only at mRNA level but also at protein level. The expressions of BMPRIA and BMPRII were higher than that of BMPRIB in the cytoplasm and cell membrane of HSFs in vitra Western blot further verified the results of immunocytofluorescence. In human sclera, BMP2, BMPR IB and BMPR II were found to be expressed in the cytomatrix of HSF, and weak signal was detected about BMPRIA. CONCLUSION: BMP-2 and all three subtypes of BMPRs were found in HSFs and may play a role in scleral remodeling. 展开更多
关键词 human scleral fibroblasts BMP-2 BMPRs
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磁刺激对巩膜成纤维细胞生长的影响
2
作者 黄小洁 王子健 +1 位作者 张敏 戴盈盈 《玻璃搪瓷与眼镜》 CAS 2024年第7期13-20,共8页
近视的发病机制之一是巩膜因素介导,巩膜成纤维细胞是眼球壁最外层组织巩膜的重要组成部分。通过共价沉淀法制备磁/石墨烯(MNP/G)复合纳米材料,将其导入巩膜成纤维细胞进行磁刺激,观察磁刺激对细胞生长的影响,用CCK-8法检测巩膜成纤维... 近视的发病机制之一是巩膜因素介导,巩膜成纤维细胞是眼球壁最外层组织巩膜的重要组成部分。通过共价沉淀法制备磁/石墨烯(MNP/G)复合纳米材料,将其导入巩膜成纤维细胞进行磁刺激,观察磁刺激对细胞生长的影响,用CCK-8法检测巩膜成纤维细胞的增值状态,采用倒置相差显微镜观察细胞的生长状态,最后通过测定羟脯氨酸的浓度推测巩膜组织的韧性情况。研究结果表明:磁刺激能够像正常状态一样促进细胞生长,还可以促进胶原蛋白合成。磁刺激可能成为促进巩膜韧性增强的一种手段,为近视的预防和矫正提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 近视 巩膜成纤维细胞 磁刺激
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FGF2通过PERK/EIF2α/ATF4信号通路调节缺氧诱导的巩膜成纤维细胞增殖和胶原代谢
3
作者 翟瑜如 白艳 李云云 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第10期22-28,共7页
目的研究FGF2对缺氧诱导的巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts,SF)增殖和胶原的影响并探讨其可能调节的下游信号通路。方法用5%O2刺激SF 24 h诱导近视SF模型,RT-qPCR检测FGF2 mRNA表达,Western blot检测FGF2蛋白表达。细胞计数试剂盒8(... 目的研究FGF2对缺氧诱导的巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts,SF)增殖和胶原的影响并探讨其可能调节的下游信号通路。方法用5%O2刺激SF 24 h诱导近视SF模型,RT-qPCR检测FGF2 mRNA表达,Western blot检测FGF2蛋白表达。细胞计数试剂盒8(Cell Count Kit-8,CCK-8)、流式细胞术和Western blot分别检测细胞增殖活力、细胞凋亡和胶原代谢相关蛋白collagenⅠ、MMP2以及通路蛋白PERK、p-PERK、EIF2α、EIF2α、ATF4表达。结果缺氧刺激可促进FGF2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01)并激活PERK/EIF2α/ATF4通路(P<0.001),抑制SF细胞增殖(P<0.001)和collagenⅠ表达(P<0.001),诱导MMP2表达(P<0.001)及细胞凋亡(P<0.001)。敲降FGF2或经PERK抑制剂GSK2606414处理可逆转缺氧对SF细胞的作用,促进细胞增殖活力(P<0.001)和collagenⅠ表达(P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01)。结论FGF2通过调节PERK/EIF2α/ATF4通路的激活,影响缺氧诱导的SF增殖及胶原代谢。 展开更多
关键词 巩膜成纤维细胞 缺氧 FGF2 增殖 胶原代谢
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阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制
4
作者 吴劲松 李姝蓉 熊伟伟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第4期266-269,共4页
目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组:对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0... 目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组:对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0 g·L^(-1)阿托品处理组(正常巩膜成纤维细胞分别加入三种不同浓度阿托品溶液),每组5只大鼠原代培养细胞。加药后24 h, CCK-8法检测各组巩膜成纤维细胞活力,流式细胞仪检测各组巩膜成纤维细胞凋亡率,Western blot法检测各组巩膜成纤维细胞光蛋白聚糖、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-14和MMP抑制剂(TIMP)-2蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示:与对照组相比,0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0 g·L^(-1)阿托品处理组细胞活力均增高,其中以1.0 g·L^(-1)阿托品处理组增高最显著,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明:阿托品处理组各组的巩膜成纤维细胞凋亡率与对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组相比,阿托品处理组巩膜成纤维细胞中光蛋白聚糖、TIMP-2蛋白相对表达量均升高,其中以5.0 g·L^(-1)阿托品处理组上升最明显(均为P<0.05);与对照组相比,阿托品处理组巩膜成纤维细胞中MMP-2、MMP-14蛋白相对表达量均降低,其中以5.0 g·L^(-1)阿托品处理组下降最明显(均为P<0.05)。结论 阿托品处理能增强体外培养大鼠巩膜成纤维细胞活力,这种效应的产生可能与光蛋白聚糖、MMPs、TIMPs等细胞因子有关。 展开更多
关键词 阿托品 巩膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 光蛋白聚糖 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂 大鼠
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人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对PI3K-Akt信号通路的调控作用
5
作者 张悦之 邓燕 +2 位作者 殷小龙 熊伟伟 于春红 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第6期444-448,共5页
目的探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的调控作用。方法利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼(实验眼)近视模型,右眼为对照眼,采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜... 目的探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的调控作用。方法利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼(实验眼)近视模型,右眼为对照眼,采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184以及PI3K-Akt信号通路相关mRNA的表达水平,采用Pearson相关分析豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)mRNA表达水平的相关性。体外培养人巩膜成纤维细胞,并分为对照组(mimics对照组)、高表达组(转染miR-184 mimic)、低表达组(转染anti-miR-184)和PI-103组(加入PI3K通路抑制剂PI-103)。采用Western blot检测各组人巩膜成纤维细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达水平,流式细胞检测技术检测细胞增殖,Annexin V-FITC染色观察细胞凋亡。结果豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均明显低于对照眼(均为P<0.05),且实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈正相关性(均为P<0.05)。体外实验中,培养24 h、48 h、72 h、96 h时,高表达组人巩膜成纤维细胞增殖倍数>对照组>低表达组>PI-103组;培养24 h时,4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h、72 h、96 h时,4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数整体比较以及组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养24 h时,4组人巩膜成纤维细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),PI-103组>低表达组>对照组>高表达组,组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养72 h时,4组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平差异均有统计学意义(均为P<0.05),高表达组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平>对照组>低表达组>PI-103组,组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论近视眼的发生、发展与巩膜组织中miR-184表达下调有关,其作用机制可能为miR-184表达下调导致PI3K-Akt信号通路调控受阻,进而抑制巩膜成纤维细胞增殖以及促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 近视 巩膜组织 人巩膜成纤维细胞 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 细胞凋亡
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巩膜生物力学改变与青光眼性视神经损伤 被引量:2
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作者 狄冠州 原慧萍 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2023年第1期105-108,113,共5页
青光眼的主要病理特征是视网膜神经节细胞(RGC)的丧失,从而导致进行性、不可逆性的视力丧失。目前已有研究表明,巩膜的生物力学性质会影响视神经的生物力学变化,并且在RGC损伤和视力丧失的病理过程中起重要作用。因此,巩膜生物力学与青... 青光眼的主要病理特征是视网膜神经节细胞(RGC)的丧失,从而导致进行性、不可逆性的视力丧失。目前已有研究表明,巩膜的生物力学性质会影响视神经的生物力学变化,并且在RGC损伤和视力丧失的病理过程中起重要作用。因此,巩膜生物力学与青光眼关系的研究对深入了解青光眼的发病机制有着重要的意义。本文就巩膜的生物力学特性、巩膜胶原纤维结构、巩膜重塑、巩膜刚度及通透性与青光眼性视神经损伤的关系进行综述,以利于更深入地了解青光眼性视神经损害的机制,为青光眼的预防和治疗提供新思路。 展开更多
关键词 巩膜生物力学 青光眼 刚度 胶原纤维 成纤维细胞
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实验性近视眼巩膜成纤维细胞黏弹性研究 被引量:7
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作者 陈维毅 王超英 +3 位作者 张全有 李阳阳 陈静 董江峰 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2007年第1期26-29,58,共5页
目的研究豚鼠镜片诱导型近视眼(lens induced myopia,LIM)后极部巩膜成纤维细胞黏弹性特性的变化。方法取2周龄豚鼠10只制备LIM动物模型,对侧眼为自身对照眼,再随机选取10只正常2周龄豚鼠作为正常对照眼。将各组豚鼠后极部巩膜成纤维细... 目的研究豚鼠镜片诱导型近视眼(lens induced myopia,LIM)后极部巩膜成纤维细胞黏弹性特性的变化。方法取2周龄豚鼠10只制备LIM动物模型,对侧眼为自身对照眼,再随机选取10只正常2周龄豚鼠作为正常对照眼。将各组豚鼠后极部巩膜成纤维细胞作体外培养,并传1代,行光镜观察与免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,采用微管吸吮技术表征巩膜成纤维细胞的黏弹性特性。结果经45天凹透镜诱导,实验眼与自身对照眼比较,诱导出(-8.95±0.60)D的相对近视,眼轴延长了(0.60±0.12)mm,两组有显著性差异,P<0.05;实验组凹透镜诱导前后变化差异有显著意义。凹透镜诱导45天后巩膜成纤维细胞粘弹性测定正常对照组(E_∞=0.30055±0.07713kPa,E_0=0.52553±0.14053kPa,μ=1.94124±1.03281kPa.s,n=52)和自身对照组(E_∞=0.34792±0.09709kPa,E_0=0.59722±0.18118kPa,μ=2.17855±1.22801kPa.s,n=49)均显著低于LIM组(E_∞=0.43555±0.13043kPa,E_0=0.76691±0.21674kPa,μ=4.17255±1.59239kPa·s, n=58)P<0.05,而正常对照组和自身对照组的各项黏弹性参数差异无显著意义(P>0.05)。结论凹透镜诱导可以引起明显轴性近视。LIM组后极部巩膜成纤维细胞的黏弹性参数明显高于正常对照组和自身对照组。 展开更多
关键词 近视 动物模型 豚鼠 巩膜成纤维细胞 微管吸吮 黏弹性
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利用后巩膜加固术治疗家兔近视眼后成纤维细胞生物力学性能变化 被引量:6
8
作者 田海霞 王超英 +2 位作者 陈维毅 王国辉 张全有 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2010年第3期190-194,共5页
目的研究后巩膜加固术后家兔眼球不同时期成纤维细胞力学特性的变化,从生物力学的角度探讨后巩膜加固术的作用机制。方法 3周龄新西兰家兔45只随机选取一侧眼球用眼睑缝合方法制备近视动物模型,建模60天后,眼球随机分为两组,A组行后巩... 目的研究后巩膜加固术后家兔眼球不同时期成纤维细胞力学特性的变化,从生物力学的角度探讨后巩膜加固术的作用机制。方法 3周龄新西兰家兔45只随机选取一侧眼球用眼睑缝合方法制备近视动物模型,建模60天后,眼球随机分为两组,A组行后巩膜加固术(PSR),B组行相似手术(不放置加固条带)。分别于术后3个月和6个月取材培养培养巩膜加固区及过渡组织的成纤维细胞。用免疫细胞化学法对培养的细胞进行鉴定。利用微管吸吮方法结合半无限体细胞力学模型测定各组成纤维细胞的力学特性(包括成纤维细胞的平衡弹性模量E肄和表观黏性μ)。结果经统计学分析,两组巩膜成纤维细胞的平衡弹性模量及表观黏性均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术6个月,经统计学分析,两组巩膜成纤维细胞的平衡弹性模量及表观黏性均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术后3月组与6月组的巩膜成纤维细胞比较,E肄和μ的差异均无统计学意义(P>0.05)。后巩膜加固术后3个月与6个月组的过渡区成纤维细胞的力学特性,E肄分别为(289.2依84.3),(276.9依113.9)Pa;μ分别为(1575.2依459)Pa·s,(1492.2依562.6)Pa·s,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论后巩膜加固术的增强作用并不是原位巩膜成纤维细胞本身生物力学的加强,而是由于加固条带及引起过渡区的存在。 展开更多
关键词 近视 后巩膜加固术 细胞培养 巩膜成纤维细胞 微管吸吮 弹性模量 表观黏性
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极低频电磁场作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞的分子病理改变 被引量:6
9
作者 王洁 崔杰锋 +3 位作者 朱煌 赵立全 冯婕妤 叶胜龙 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期403-407,共5页
背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场(ELF.EMFs)下是否会导致巩膜的病理改变,从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成... 背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场(ELF.EMFs)下是否会导致巩膜的病理改变,从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)的分子病理改变及其在近视发生发展中的可能机制。方法对HFSFs进行体外培养和传代,根据细胞是否暴露于50Hz电磁场分为暴露组和对照组,应用实时定量聚合酶链反应(real—timePCR)法检测不同磁场强度(0、0.1、0.2、0.5、1.0mT)、不同暴露时间(0、6、12、24、36、48h)下HFSFs中I型胶原蛋白(COL1A1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的基因表达水平变化,同时应用CCK18法检测两组HFSFs的细胞增生情况,并以细胞免疫荧光法对HFSFs中COL1A1和MMP-2蛋白的表达进行确认。结果与对照组相比,暴露组在磁场强度0.2mT下作用6h可见HFSFs中COL1A1mRNA的表达下调,差异有统计学意义(对照组:0.099±0.008,暴露组:0.050±0.004;P=0.009),且表达量随着磁场强度的增加而减少;在磁场强度O.1mT下暴露24h,HFSFs细胞中的MMP-2mRNA表达上调,差异有统计学意义(对照组:0.009+0.001,暴露组:0.018±0.003;P=0.038),并随着暴露时间的延长表达增强。磁场强度0.2mT下暴露24h,HFSFs细胞增生的吸光度(A450)值明显下降,差异有统计学意义(P=0.009);免疫荧光分析也显示暴露组HFSFs细胞中COL1A1表达下调,MMP-2表达上调。结论ELF—EMFs暴露可在一定范围内影响体外培养的HFSFs的增生及COL1A1的合成,可能是诱导巩膜发生病理性重塑进而导致近视发生、发展的危险因素之一。 展开更多
关键词 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 近视 I型胶原蛋白 基质金属蛋白酶2
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EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响 被引量:11
10
作者 郑瑾 佘振珏 周国民 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期301-304,共4页
目的研究表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后,取第3~4代细胞加入不同... 目的研究表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后,取第3~4代细胞加入不同浓度的EGF(0.1~200ng/mL)、bFGF(0.1~50ng/mL)。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0.1~100ng/mL的EGF和0.1~50ng/mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用,且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。 展开更多
关键词 巩膜成纤维细胞 表皮生长因子 碱性成纤维生长因子
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力学刺激对巩膜成纤维细胞增殖活性及结缔组织生长因子表达的影响 被引量:5
11
作者 王国辉 陈维毅 谢永芳 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2010年第3期186-189,共4页
目的研究力学刺激对巩膜成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法组织块培养法获取新西兰大白兔巩膜成纤维细胞并培养,利用免疫细胞化学法进行细胞鉴定,通过FX-4000柔性基底拉伸加载系统对细胞进行正弦波(3%、6%拉伸幅... 目的研究力学刺激对巩膜成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法组织块培养法获取新西兰大白兔巩膜成纤维细胞并培养,利用免疫细胞化学法进行细胞鉴定,通过FX-4000柔性基底拉伸加载系统对细胞进行正弦波(3%、6%拉伸幅度,0.1Hz,48h)拉伸力学环境的培养,采用ATP-生物荧光检测法检测细胞的增殖活性,应采用ELISA法检测细胞CTGF的表达。结果 3%拉伸组的增殖活性(2.352依0.123)和6%拉伸组的增殖活性(2.784依0.119)与静态组(1.901依0.092)比较有明显提高(P<0.05),且6%拉伸组细胞的增殖活性明显高于3%拉伸组(P<0.05);与各自静态对照组CTGF的表达比较,3%拉伸组(静态组:(0.291依0.118)μg/L,拉伸组:(1.623依0.276)μg/L和6%拉伸组(静态组:(0.260依0.112)μg/L,拉伸组:(3.205依0.287)μg/L)有显著提高(P<0.05)。结论力学刺激是影响巩膜成纤维细胞增殖活性和CTGF表达的重要因素。 展开更多
关键词 力学 刺激 巩膜 成纤维细胞 增殖活性 结缔组织生长因子
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豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞前部及后极部MMP-2 mRNA及蛋白表达变化的研究 被引量:3
12
作者 陈博宇 王超英 +5 位作者 安慧琴 马景学 陈维毅 郝岚 刘迎庆 仝春梅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第9期807-811,共5页
目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)... 目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用组织块培养法培养豚鼠的前部及后极部GSF,利用免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western blot蛋白印迹法检测前部及后极部GSF中MMP-2表达变化。结果 MMP-2的表达定位于细胞浆和细胞核。实验组中前部GSF饲养15d阳性表达率较高,30d阳性表达率最高;后极部GSF饲养6d表达率开始较高,至15d阳性表达率最高,以后保持较高的阳性表达率,各诱导时间点之间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);自身对照组各组自身前部及后极部比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论体外培养的豚鼠GSF稳定表达MMP-2 mRNA及其蛋白,且前部GSF于诱导15d开始阳性表达率较高,后极部GSF于诱导6d开始阳性表达率较高,后极部GSF较前部表达明显增多。 展开更多
关键词 豚鼠 巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶 2 免疫细胞化学 实时荧光定量PCR Western blot蛋白印迹法
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胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响 被引量:2
13
作者 胡守龙 崔冬梅 +2 位作者 于刚 吴倩 曾骏文 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第6期501-504,共4页
目的观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,... 目的观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,CCK-8检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平的影响。结果成功进行了人巩膜成纤维细胞的原代培养。人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA及蛋白水平的表达。胶原相关整合素α1β11mg·L-1和4mg·L-1抗体组细胞存活率分别为(86.3±4.5)%和(74.3±6.8)%,与对照组的100%相比,细胞存活率均显著下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且呈浓度依赖性的抑制作用。胶原相关整合素α2β1抗体在1mg·L-1时有抑制作用,细胞存活率为(89.3±12.1)%,但与对照组的100%相比差异无统计学意义(P>0.05),4mg·L-1抗体组细胞存活率下降为(74.5±6.6)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。胶原相关整合素α1β1(4mg·L-1)抗体组Ⅰ型胶原mRNA表达明显减低,是对照组的0.48倍(P<0.05)。胶原相关整合素α2β1抗体1mg·L-1组和4mg·L-1组Ⅰ型胶原mRNA表达分别是对照组的0.94倍和0.87倍,与对照组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位的表达。胶原相关整合素α1β1和α2β1影响人巩膜成纤维细胞的增殖。胶原相关整合素α1β1参与人巩膜成纤维细胞胶原的合成。 展开更多
关键词 近视眼 人巩膜成纤维细胞 胶原相关整合素 增殖 胶原合成
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巩膜及巩膜成纤维细胞的生物力学研究进展 被引量:2
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作者 王国辉 陈维毅 李晓娜 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2010年第3期230-234,共5页
巩膜在维持眼球结构和功能等方面起着重要的作用。巩膜成纤维细胞胞外基质的代谢、细胞因子的表达及自身生物力学性质等决定巩膜的生物学和生物力学性质。在近视的发生及治疗过程中,伴随有巩膜及巩膜成纤维细胞的力学-生物学特性的变化... 巩膜在维持眼球结构和功能等方面起着重要的作用。巩膜成纤维细胞胞外基质的代谢、细胞因子的表达及自身生物力学性质等决定巩膜的生物学和生物力学性质。在近视的发生及治疗过程中,伴随有巩膜及巩膜成纤维细胞的力学-生物学特性的变化。从力学-生物学耦合角度对巩膜及巩膜成纤维细胞进行生物力学研究,能够深入、全面地揭示视觉器官的生理功能、病理变化及相关治疗机理。本文对巩膜及巩膜成纤维细胞的生物力学研究进行了综述和讨论。 展开更多
关键词 生物力学 巩膜 巩膜成纤维细胞 后巩膜加固术
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MMPs激动剂和抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1/2以及Ⅰ型胶原表达的作用研究 被引量:9
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作者 邹蕾蕾 刘睿 +3 位作者 刘红 黄莉雯 周行涛 周浩 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2013年第2期91-95,共5页
目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用。方法应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂... 目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用。方法应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1和MMP-2活性的影响;实时荧光定量反转录聚合酶链反应以及免疫印迹蛋白定量法检测比较激动剂组与抑制剂组对MMP-1/2以及Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的变化;最后用siRNA干扰敲除MMP-1、MMP-2或MMP-1/2后,检测巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平的变化。结果 MMPs激动剂引起MMP-1/2活性显著增加,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达下降,MMPs抑制剂引起MMP-1/2活性显著下降,相应的Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达增加(均P<0.01)。激动剂可引起MMP-1mRNA表达增加(P<0.01),对MMP-2mRNA表达无明显影响(P>0.05),而抑制剂能引起MMP-2mRNA表达下降(P<0.01),但对MMP-1mRNA表达无显著影响(P>0.05)。应用siRNA干扰方法敲除MMP-1、MMP-2或两者同时被敲除后,MMP-1蛋白表达均显著降低(均P<0.01),MMP-2除在MMP-1siRNA干扰敲除组无明显变化外(P>0.05),其余各组均显著下降(均P<0.01);Ⅰ型胶原的表达在各敲除组中显著增加,当MMP-1和MMP-2均干扰敲除时,Ⅰ型胶原的表达增加最为显著(均P<0.01)。结论在人巩膜成纤维细胞系中,MMP-1/2激动剂和抑制剂均能引起MMP-1/2活性改变及相应的MMP-1/2蛋白表达变化,并最终导致Ⅰ型胶原表达的变化;MMP-1和MMP-2是调控人巩膜Ⅰ型胶原重塑的关键因子。 展开更多
关键词 人巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶2 胶原 I型
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碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究 被引量:10
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作者 傅亚娜 周翔天 +4 位作者 付小莹 王教 吕帆 胡诞宁 瞿佳 《眼视光学杂志》 2008年第3期186-189,共4页
目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-β影响近视的作用部位及可能机制。方法取角膜移... 目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-β影响近视的作用部位及可能机制。方法取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系,取第3~5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml、300ng/ml的bFGF以及0.1ng/ml、0.3ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、10ng/ml、30ng/ml的TGF-β,两组均设空白对照。6d后进行细胞计数,选用t-test进行统计分析。每株细胞重复3次,共重复3株细胞,观察bFGF和TGF-β对巩膜成纤维细胞的生长调控作用。结果bFGF能明显促进人巩膜成纤维细胞的生长,随浓度增加呈明显剂量效应关系。bFGF大于10ng/ml时(包括10ng/ml),和无bFGF的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05)。TGF-β能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,抑制细胞生长的作用亦呈明显的剂量效应关系。TGF-β大于0.3ng/ml时(包括0.3ng/ml),和无TGF-β的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论本实验结果显示,bFGF对人巩膜成纤维细胞生长具有明显促进作用,而TGF-β则表现为明显抑制作用。进一步证实外源性bFGF和TGF-β可能作用于巩膜组织,并通过调控巩膜成纤维细胞的生长及巩膜细胞外基质合成代谢单独或协同作用参与巩膜重塑过程。 展开更多
关键词 巩膜成纤维细胞 碱性成纤维细胞生长因子 转化生长因子-Β 近视
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TGF-β_2对豚鼠实验性近视眼后极部巩膜成纤维细胞的增殖和超微结构的影响 被引量:3
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作者 陈博宇 王超英 +4 位作者 马景学 陈维毅 安英杰 郝岚 刘迎庆 《临床误诊误治》 2011年第9期1-4,F0003,共5页
目的明确转化生长因子β2(TGF-β2)对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞的增殖和超微结构的影响。方法选择2周龄豚鼠10只,随机选取一只眼(实验组)用镜片诱导法制备近视动物模型,对侧眼为自身对照组。造模30 d后对两组进行屈光... 目的明确转化生长因子β2(TGF-β2)对豚鼠镜片诱导型近视眼后极部巩膜成纤维细胞的增殖和超微结构的影响。方法选择2周龄豚鼠10只,随机选取一只眼(实验组)用镜片诱导法制备近视动物模型,对侧眼为自身对照组。造模30 d后对两组进行屈光度和眼轴检测。培养豚鼠后极部巩膜成纤维细胞。将每只眼培养的细胞分为空白对照及TGF-β21、10、100 ng/ml浓度组,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组光吸收值(OD)和细胞增殖的程度;利用电镜观察TGF-β210 ng/ml时细胞的超微结构并对结果进行统计分析。结果凹透镜诱导后实验组屈光度和眼轴与诱导前比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验组和自身对照组TGF-β2 100 ng/ml时OD值与空白对照比较差异无统计学意义(P>0.05),TGF-β2 1、10 ng/ml和空白对照两两比较差异有统计学意义(P<0.05),同浓度TGF-β2组间OD值和增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度TGF-β2时细胞增殖率组内比较差异有统计学意义(P<0.05)。在10 ng/ml TGF-β2作用下巩膜成纤维细胞核外形不规则,粗面内质网扩张,细胞器减少,细胞界膜不清,部分界膜消失。结论 TGF-β2可有效地抑制豚鼠巩膜成纤维细胞的增长,其中10 ng/ml的刺激作用最强,可使细胞的超微结构发生变化。 展开更多
关键词 豚鼠 转化生长因子Β2 巩膜成纤维细胞 增殖 超微结构
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TGF-β_1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响 被引量:5
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作者 潘红卫 曾骏文 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第3期232-234,共3页
目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、... 目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S+G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 巩膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞周期
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胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞增生的影响及其机制 被引量:1
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作者 高岩 韩明磊 +1 位作者 牟丽丽 刘桂香 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期915-918,共4页
背景胰高血糖素与近视的发生密切相关,在一定浓度范围内可抑制近视的发展,但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞(GSFCs)生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织,采用组织... 背景胰高血糖素与近视的发生密切相关,在一定浓度范围内可抑制近视的发展,但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞(GSFCs)生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织,采用组织块培养法进行GSFCs的培养和传代,采用免疫组织化学法检测培养的细胞中波形蛋白抗体、细胞角蛋白抗体及S-100抗体的表达。用完全随机法将培养的细胞分组,分别在不同组的培养孔中加入5、10、50、100、200μg/L胰高血糖素培养GSFCs24h,不加胰高血糖素培养的为对照组。利用MTT比色法观察各质量浓度胰高血糖素作用后及50btg/L胰高血糖素作用1、2、3、5、7dGSFCs的生长情况,酶联免疫检测仪测量波长490nm处各孔细胞的吸光度(A490)值,并用ELISA法检测培养72h不同质量浓度胰高血糖素对GSFCs中基质金属蛋白酶2/组织金属蛋白酶抑制剂2(MMP-2/TIMP-2)表达水平的影响,以酶标仪测定450nm波长处各孔细胞的A450值。结果GSFCs传代培养后密度较低时呈枝状排列,密度较高时呈束状或漩涡状排列,波形蛋白抗体反应阳性。随着胰高血糖素质量浓度的增加,细胞的A490值逐渐升高,差异有统计学意义(F=32.340,P=0.013),胰高血糖素质量浓度〉10μg/L时,细胞的A490值较对照组明显升高,差异均有统计学意义(t=5.575、6.627、16.074、12.003,P〈0.05)。培养孔中加入50μg/L胰高血糖素后随着培养时间的延长,细胞的A450值升高,差异有统计学意义(F时间=10.610,P=0.024),且与对照组比较细胞的A490值升高,差异有统计学意义(F。=9.068,P=0.039)。胰高血糖素质量浓度在5~200μg/L时,随胰高血糖素质量浓度的增加,MMP-2含量逐渐减少,差异有统计学意义(F=153.639,P=0.036),但TIMP-2含量的变化差异无统计学意义(F=24.770,P=3.250)。结论胰高血糖素可促进体外培养的GSFCs的增生,其作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是下调MMP-2在GSFCs中的表达,MMP-2/TIMP-2失衡所致。 展开更多
关键词 巩膜成纤维细胞 胰高血糖素 基质金属蛋白酶2/组织金属蛋白酶抑制剂2
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两种材料后巩膜加固术后碱性成纤维细胞生长因子的表达 被引量:3
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作者 马代金 刘双珍 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1192-1193,1197,共3页
目的比较以胎儿脐带和巩膜为材料行后巩膜加固术后碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的表达,选择一种更为理想的手术材料。方法对24只家兔左右眼分别以人巩膜和胎儿脐带为材料行后巩膜加固术,于术后2,4,12和24... 目的比较以胎儿脐带和巩膜为材料行后巩膜加固术后碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的表达,选择一种更为理想的手术材料。方法对24只家兔左右眼分别以人巩膜和胎儿脐带为材料行后巩膜加固术,于术后2,4,12和24周取材进行免疫组织化学染色检查。结果两种材料后巩膜加固术后炎症细胞、成纤细胞均有bFGF表达,但脐带加固材料组bFGF表达明显强于巩膜加固材料组,且持续时间长。结论胎儿脐带是一种更为理想的后巩膜加固术材料。 展开更多
关键词 材料 后巩膜加固术 碱性成纤维细胞生长因子
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