群体感应系统受体SdiA对大肠杆菌生物学 特性的影响

群体感应系统能够使大肠杆菌(Escherichia coli)感知并适应环境的应激压力,对其生物被膜形成、抗逆性具有重要意义。SdiA是Ⅰ型群体感应系统的受体蛋白,能够识别信号分子并调控下游基因,提高大肠杆菌的抗胁迫能力。本文以大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)为研究对象,通过异源表达Ⅰ型群体感应系统受体蛋白SdiA,考察SdiA对细菌生物被膜形成、运动性和抗逆性等生物学特性的影响。结果表明,重组菌株E.coli BL21(DE3)pET28a sdiA的生物被膜产量较野生株显著降低了20.03%。同时,大肠杆菌中表达的受体蛋白SdiA能够对信号分子C4 HSL完成应答,并进一步抑制生物被膜形成。培养24 h后,SdiA表达菌株的运动半径相较于野生株降低了62.5%。在酸性环境中(pH=3),SdiA表达株的细菌存活率提升了9.27倍;在高渗透压环境中,SdiA表达株的细菌存活率较野生株提升了62.76%。荧光定量PCR结果显示,aphA基因在SdiA表达株中表达量上调了41.76%;lsrB基因的表达量降低30.47%;鞭毛和菌毛形成相关基因motB、csgD、fimA和fimC的表达水平分别下调了48.39%、39.57%、49.67%和23.21%。以上结果表明,SdiA蛋白通过调控群体感应以及运动性相关基因的转录,进而抑制大肠杆菌生物被膜形成和泳动性。同时,SdiA蛋白作为大肠杆菌中重要的转录因子,在其遭遇酸性条件和渗透压胁迫时具有正向调控作用。因此,本文揭示了SdiA蛋白对大肠杆菌工程菌株生物学特性的调控作用,为利用群体感应精准调控菌群行为提供了有效靶点。

不同动物源性大肠杆菌多重耐药调控基因SdiA的同源性分析

为研究大肠杆菌多重耐调控基因SdiA与不同动物源性及多重耐药水平之间的关系,选取临床分离的不同动物源性大肠杆菌5株及大肠杆菌药敏质控株ATCC25922,在对其进行主要治疗药物耐药性检测的基础上,分别以其染色体DNA为模板,通过PCR反应扩增出大肠杆菌多重耐药调控基因SdiA,将该片段分别与克隆载体pMD18-T连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,对经酶切与PCR反应鉴定为阳性的克隆质粒进行插入片段的核苷酸序列测定。测序结果表明不同动物源性大肠杆菌的SdiA基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GenBank中该基因序列的同源性较高,不同源性大肠杆菌的SdiA基因的核苷酸序列及氨基酸序列变化与其动物源性无关,该基因的核苷酸序列及氨基酸序列的个别突变位点可能影响AcrAB-TolC外排泵的表达水平,进而影响其多重耐药水平。

大肠埃希菌sdiA基因缺失株的建立

目的为研究HSL信号分子对大肠埃希氏菌的影响而建立大肠埃希菌sdiA基因缺失株。方法通过Red重组系统敲除大肠杆菌BW25113和SM10λpir的sdiA基因,PCR测序鉴定;不同时间点检测A600值,绘制细菌生长曲线;荧光定量PCR检测csgD、csgB基因水平。结果 PCR测序结果经DNAman软件比对分析,与预想结果一致;与野生株相比,sdiA基因突变对细菌生长曲线无明显影响。结论成功建立BW25113、SM10λpir的sdiA基因缺失株,为后续研究铜绿假单胞菌信号分子HSL对大肠埃希菌的影响奠定了基础。

微种植体支抗和自攻钛种植体支抗的临床应用价值比较

目的比较微种植体支抗和自攻钛种植体支抗的临床应用价值。方法选择接受口腔科正畸治疗的患者作为研究对象,随机分为接受微种植体支抗治疗的对照组及接受自攻钛种植体支抗治疗的观察组。比较两组患者的治疗后牙齿功能相关指标、X线头影测量软硬组织变化、龈沟液中炎症因子水平等差异。结果治疗后,观察组患者的牙龈、出血指数以及松动度均低于对照组,咬合力和咀嚼效率均高于对照组(P<0.05)。接受矫治后,两组患者的炎症因子水平均有上升,但是两者之间无明显统计学差异(P>0.05)。观察组患者接受矫治后的龈沟液中炎症因子水平明显低于对照组患者(P<0.05)。结论自攻钛种植体支抗可以有效减少牙齿损伤,优化口腔软硬组织指标值,不增加牙龈炎症水平,是一种安全高效的口腔矫治方式。