硒硫比值对钝顶螺旋藻有机化硒的影响及藻体中硒的形态、价态构成

在培养基中添加亚硒酸钠、硫酸钾培养钝顶螺旋藻 ,研究硒、硫不同克分子比 (Se∶S)对钝顶螺旋藻有机化硒的影响 ,用2,3 二氨基萘荧光分光光度法测定藻体中总硒、有机硒、4价硒及6价硒含量 ,分析藻体中硒的形态、价态构成。结果显示 ,一定范围内Se∶S对钝顶螺旋藻产率影响不大 ,但硒浓度为3.80mmol/L、Se∶S=0.812时螺旋藻产量、总硒及有机硒含量均最高 ,富硒钝顶螺旋藻中以有机硒为主 。

富硒螺旋藻培养技术研究

采用富硒技术对钝顶螺旋藻培养进行强化 ,对硒 (IV)浓度和亚硫酸盐的影响 ,以及硒的生物富集及其对藻细胞分子官能团结构的影响等进行了较为详细的研究 ,并对相关的可能机理进行了讨论。研究发现 ,硒对钝顶螺旋藻生长具有刺激或抑制的双重作用。在0 0 2mg/L～ 41 1 0 0mg/L浓度范围内 ,硒不仅可以加快钝顶螺旋藻的生长 ,而且还可以提高其生物量 ;同时 ,钝顶螺旋藻对硒的生物富集随着硒浓度的增加而增加 ,较为缓慢的生长利于钝顶螺旋藻对硒的富集。研究还证实 ,Na2 SO3会减轻高浓度Na2 SeO3对钝顶螺旋藻生长的毒性 ,富硒培养不会对藻细胞分子官能团结构产生损害。实验得出钝顶螺旋藻富硒培养较佳的硒处理浓度在 1 0mg/L～ 40mg/L。

钝顶螺旋藻中蛋白质结合硒的研究

目的 :研究富硒培养的钝顶螺旋藻干藻 (含硒 :4 62 .6μg·g- 1)中蛋白质含硒量及差异 .方法 :采用硫酸铵分级、DEAE - 52纤维素及SephadexG - 10 0柱层析分离纯化蛋白质 ;经紫外吸收光谱和SDS梯度凝胶电泳检测蛋白质纯度及亚基组成 ;以 2 ,3-二氨基萘 (DAN)荧光分光光度法测定含硒量 .结果 :蛋白质结合的硒占藻体总硒的 58.7% ;不同饱和度 ( 2 5%、50 %、10 0 % )硫酸铵分级沉淀蛋白质中的硒占总硒的情况分别为 4 .6%、18.7%、6.5% ;DEAE - 52柱层析蛋白洗脱峰蛋白含硒量依次为 2 58、4 31、2 0 4、4 84 μg·g- 1;分离纯化的含硒藻蓝蛋白有较高的含硒量 ( 2 67μg·g- 1) ,两个亚基相对分子质量为α =1950 0 ,β =2 150 0 ,两亚基含硒量相对之比为 1.65.结论

富硒极大螺旋藻整细胞、藻胆体及藻蓝蛋白的光谱特性

对培养富硒极大螺旋藻的最佳硒处理浓度作了研究。结果表明 ,40mg/L的硒可促进该藻的生长。与对照组相比 ,富硒极大螺旋藻的整细胞、藻胆体及藻蓝蛋白的光谱特性无显著差异 ,这表明硒没有影响到极大螺旋藻光能的吸收与传递。

Se(IV)与藻蓝蛋白相互作用的谱学研究

用吸收、荧光、红外等谱学方法研究了藻蓝蛋白(PC)与Se(IV)的相互作用.结果表明,SeO2-3加入后,藻蓝蛋白在620nm处的特征光吸收减弱,并随Se(IV)浓度和时间的增加而降低,而278和347nm处的光吸收增强;荧光发射和荧光激发也逐渐减弱,而599和629nm处的2个激发峰的相对强度与对照相反.PC在475和662nm处分别出现共振散射峰.Se(IV)与PC的作用后,在595nm处出现强的共振散射峰,被指认为液相纳米硒粒子与PC生成的缀合物的共振散射峰.红外光谱图中,PC的酰胺I带为1653 2cm-1,为α螺旋,而PC-Se(0)生物缀合物的酰胺I带为1647 0cm-1,属无规则卷曲.

螺旋藻硒多糖组分的提纯及其体外抗肿瘤作用

目的:研究螺旋藻硒多糖(polysaccharide from Se-enriched spirulina platensis,Se-PSP)各组分对肿瘤细胞生长的影响。方法:超声波法从富硒螺旋藻(Se-enriched spirulina,Se-SP)中提取Se-PSP总糖和各组分(Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4),DEAE-纤维素层析对各组分进行分离纯化。MTT法检测10μg/ml时Se-PSP总糖及不同组分对卵巢癌SKOV-3细胞生长的影响;观察不同质量浓度的Se-PSP2对卵巢癌SKOV-3细胞、肝癌HepG-2细胞、胃癌BGC-803细胞、鼻咽癌CNE细胞和舌鳞癌Tca-8113细胞生长的影响。结果:Se-SP分离纯化得到4个不同组分(Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4),其中Se-PSP2质量分数最高。10μg/mlSe-PSP总糖及其4个组分对SKOV-3细胞生长的抑制率分别为(33.393±5.437)%、(22.290±8.399)%、(44.881±4.878)%、(45.354±4.931)%和(46.203±4.455)%,其中Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4抑制率显著大于Se-PSP总糖及Se-PSP1(P<0.05),但前3者无明显差别(P>0.05)。Se-PSP2能剂量依赖性抑制SKOV-3、HepG-2、BGC-803和Tca-8113肿瘤细胞的增殖(均P<0.05),抑制作用具有肿瘤广谱性。结论:Se-PSP2是Se-PSP的主要成分,对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用,有望成为治疗肿瘤的辅助药物。

螺旋藻富集同化无机硒研究

以亚硒酸钠做为螺旋藻富硒的来源，研究了亚硒酸钠梯度浓度对钝顶螺旋藻（Spirulinaplatensis）生长及其富硒量的影响，并采用^(75)Se标记的Na_2SeO_3示踪方法，对富硒螺旋藻含硒成分进行了研究。结果表明，当硒浓度超过360μg／mL时，螺旋藻的生长即受抑制，硒浓度为46μg／mL时，表现出促进螺旋藻生长的趋势，而硒浓度为184μg／mL时，螺旋藻可达到最高富硒量，平均为659.9ng／mg。富硒螺旋藻中结合在大分子上的有机硒达到70％以上，其中主要是含硒蛋白质，含量可达50％以上，主要以硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸形式存在，分别占含硒蛋白的40％和20％。

环境因素对螺旋藻富集硒和锌及生长的影响

研究了光照强度、ｐＨ、锌盐等３种环境因素对富锌和硒的钝顶螺旋藻生长和富集量的影响，表明光照强度对藻生长和富集量的影响具有同步增长的态势，而锌盐、ｐＨ对藻生长和富集量的影响却出现不同步性。根据实验结果，调整培养条件，得到新的培养条件，使藻的生长速度加快，对硒富集量提高２０．７％，锌富集量提高２５．２％。

硒化螺旋藻对实验诱发大鼠肝癌过程的作用

目的:观察硒化螺旋藻(Se-spirulina)对黄曲霉毒素B1(AFB1)致肝癌作用的影响。方法:实验动物按随机区域分组法分为A、B、C组,每组15只,A、B、C组分别为高剂量组、低剂量组、对照组,各组动物腹腔注射AFB1两周,A、B组大鼠在接受AFB1期间分别喂食含量分别为9.3×10-3和2.3×10-3的硒化螺旋藻混合饲料,8周后处死动物,观察各组动物肝组织内γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生灶(-γGT灶)的数量(个/cm2)和大小(mm2/个)。结果:高、低剂量硒化螺旋藻均能抑制AFB1诱发的-γGT灶的数量和大小,高剂量组、低剂量组-γGT灶的数量分别为(0.90±1.07)个/cm2和(3.72±4.72)个/cm2,均低于对照组(6.10±6.30)个/cm2,高剂量组与对照组相比有显著意义(P<0.05),抑制率分别为85%和39%;高剂量组、低剂量组-γGT灶大小分别为(0.24±0.28)mm2/个和(1.94±2.32)mm2/个,均低于对照组(2.36±3.76)mm2/个,但无显著意义(P>0.05),抑制率分别为90%和17%。结论:硒化螺旋藻有抑制AFB1诱发大鼠肝癌前病变的作用,而高剂量硒化螺旋藻的抑制作用更优。

钝顶螺旋藻对硒的富集和有机化作用

目的 :研究钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis ,S .P)对硒的富集和有机化作用 .方法 :培养基中添加无机硒亚硒酸钠培养S .P ,2 ,3-二氨基萘 (DAN)荧光分光光度法测定不同增殖期藻体含硒量 .结果 :①S .P生长的迟缓期富集硒较快 ,而在快速期则有机硒增量较明显 ;②在高浓度无机硒条件下培养 ,藻体的总硒、有机硒、有机化率均呈现下降趋势 ;③S .P对硒的生物有机化率在培养第 3d时较低 ,第 6d时较高 ;添加 15 0mg·L- 1硒培养的富硒螺旋藻 ,第 6d时硒主要与水溶性蛋白质结合 ,占 65 .5 %.结论 :S .P中总硒含量、有机硒含量、硒的有机化率及硒在藻体中的分布均呈现动态变化 .

富硒、富锌钝顶螺旋藻培养优化研究

以钝顶螺旋藻为载体,以硒浓度、锌浓度和添加方法为因素,通过单因素和正交试验,确定富锌、富硒钝顶螺旋藻的最佳培养条件.结果表明:在钝顶螺旋藻培养液中加入硒浓度为8 ug/mL、锌浓度为7 ug/mL,加入方法为低水平培养4天(加入浓度的一半)、高水平培养4天(加入剩余一半),为富锌、富硒钝顶螺旋藻的最佳添加浓度和添加方法.

环境因素对富硒锌钝顶螺旋藻生化特性的影响

研究３ 种环境因素ｐＨ、光照强度、锌盐对富硒锌钝顶螺旋藻叶绿素ａ、硝酸还原酶的影响．实验结果表明，在实验的光强范围内随着光强度的增大，硝酸还原酶和叶绿素ａ 呈同步增加的态势；等量不同种类锌盐对硝酸还原酶和叶绿素ａ 含量影响较小； ｐＨ 对硝酸还原酶和叶绿素ａ

硒添加方法对螺旋藻生长及富集转化硒的影响

本文比较了在标准培养液中不同硒添加方法对钝顶螺旋藻生长及富集转化硒的影响。结果表明，于培养液中加入低浓度Na2SeO3（50μg／ml）培养，第五天将藻液浓缩5倍后再添加Na2SeO3，使浓缩藻液中Na2SeO3浓度达到400μg／ml，继续培养3天采收，可获得有机硒含量稳定在400μg／g藻粉左右水平的富硒螺旋藻，按该方式添加Na2SeO3对螺旋藻产率无明显影响。

海水钝顶螺旋藻富硒及其含硒藻蓝蛋白的研究

研究了亚硒酸钠梯度浓度对海水钝顶螺旋藻Spirulina platensis生长及藻胆蛋白含量的影响,对含硒藻蓝蛋白进行分离纯化,得到含硒藻蓝蛋白纯品。结果表明,硒添加浓度小于100mg.L-1时,对藻体生长有一定的促进作用,其生物量、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量有增加,藻体硒含量及富硒系数明显高于文献报道的相似条件下的淡水螺旋藻;纯化的含硒藻蓝蛋白溶液在弱光照、低温、pH4—8的范围内稳定性较好;含硒藻蓝蛋白的光谱特性与藻蓝蛋白相比几乎没有差异,紫外与可见光吸收光谱特征吸收峰在280nm和620nm,荧光激发峰在558nm,室温条件下最大荧光发射峰在655nm,说明海水钝顶螺旋藻富集硒后及海水的胁迫对其藻蓝蛋白的光谱特性没有明显影响。

海水螺旋藻C-藻蓝蛋白富硒及其抗氧化特性

对海水钝顶螺旋藻Spirulina platensisC-藻蓝蛋白的富硒能力及含硒C-藻蓝蛋白对超氧阴离子(O2-.)和羟基自由基(.OH)的清除作用进行了研究。结果表明,在添加低浓度硒(40—80mg.L-1)培养时,海水钝顶螺旋藻C-藻蓝蛋白对硒的富集效果显著强于淡水螺旋藻C-藻蓝蛋白。硒浓度为40mg.L-1时,C-藻蓝蛋白对硒的利用率最高,富硒系数最大(0.9%);硒浓度为60mg.L-1时,C-藻蓝蛋白含硒量最高(402mg.kg-1)。含硒C-藻蓝蛋白比C-藻蓝蛋白对超氧阴离子和羟基自由基的清除作用都有所加强,清除效应与C-藻蓝蛋白的含硒量及蛋白浓度呈正相关。C-藻蓝蛋白含硒量最高组(402mg.kg-1)在浓度为180μg.ml-1时,对超氧阴离子和羟基自由基的清除率分别可达到83%和35%,远高于同样条件下其他淡水种类相应蛋白的清除作用。研究结果显示,利用海水培养的螺旋藻能显著提高C-藻蓝蛋白的富硒能力和含硒C-藻蓝蛋白清除超氧阴离子的活性。此研究对开发具有抗氧化功能的含硒C-藻蓝蛋白显示出独特的技术优势和较大的应用潜力。

螺旋藻转化纳米元素硒的制备及其体外清除自由基活性的初步研究

研究利用高密度富硒螺旋藻(Se-SP)细胞通过生物转化制备纳米元素硒(Nano-Se)的可行性,观察Nano-Se在体外对氧自由基的清除作用。用梯度离心分选Nano-Se,原子力显微镜(AFM)、透射电镜(TEM)及X-射线能谱(EDX)联用表征纳米粒中的元素硒形态,电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)测定Nano-Se中的硒含量,化学发光方法检测Nano-Se在体外对超氧自由基和羟自由基的清除作用。结果发现,Nano-Se主要由元素硒构成,形态呈球形,73%的纳米粒子直径大小分布在(61±17)nm范围。Nano-Se在体外对两种氧自由基的最大清除率分别为:30.1%和27.6%,相应的EC50分别为:0.8μg/ml和2.2μg/ml。相同剂量时,Nano-Se对氧自由基的清除作用比硒代蛋氨酸(Se-Met)及Se-SP中其它含硒活性成分更强。结果提示,利用高密度Se-SP可诱导Nano-Se的大量生成,Se-SP转化的Nano-Se可能是一种新的抗氧化硒形态,其作用机制和体内生物活性有待深入研究。

螺旋藻富硒转化含硒蛋白质的鉴定及其抗氧化活性研究

研究富硒螺旋藻(Se SP)培养生物转化含硒蛋白质(Se P)中硒的含量及分布,观察Se P在体外对氧自由基的清除效应。藻体总蛋白(TP)用SDS-PAGE电泳分离后,用电感偶合等离子体质谱技术(ICP-MS)对不同分子量范围蛋白质中的硒含量进行精确定量;通过激光烧蚀(LA)-ICP-MS对纯化含硒藻蓝蛋白(Se PC)硒含量在电泳胶上进行原位检测;用制备SDS-PAGE凝胶电泳分离纯化不同分子量的Se P组份,化学发光方法检测Se P在体外对超氧自由基和羟自由基的清除作用。结果发现,与未富硒培养的螺旋藻(SP)相比,Se SP总蛋白中硒含量提高了32倍,可达805.48μg/g,其中75.81%分布于25 ku以下小分子量含硒蛋白质(LMWSe P)中,LA-ICP-MS证明纯化Se PC亚基含有稳定共价结合活性硒元素,LMWSe P对自由基的直接最大清除率在70%以上。结果提示,利用Se SP培养可转化生产活性Se P,Se SP中低分子量Se P组份是一种具有较高抗氧化活性的天然活性硒资源,其中硒的存在形态、合成转化机制和体内生物活性有待深入研究。

双道原子荧光光谱法同时测定螺旋藻粉中硒和碲

[目的]建立湿法消化-氢化物双道原子荧光光谱法同时测定螺旋藻粉中硒(Se)和碲(Te)的新方法。[方法]用硝酸、高氯酸分解样品,消化完全后在室温条件下加入浓盐酸将Se6+/Te6+还原成Se4+/Te4+,与硼氢化钾反应,采用标准曲线法测定硒和碲。[结果]测定结果表明,硒的线性范围为2.70-20.00μg/L,相关系数(r)=0.9997,最低检出限(DL)=0.77μg/L,回收率为93.5%-102.9%,精密度(相对标准偏差)为1.22-4.44;碲的线性范围为0.16-2.00μg/L,r=0.999 8,DL=0.042μg/L,回收率为100.0%-101.2%,精密度为1.45-5.70。双元素同时测定法与单元素测定法差异无统计学意义。[结论]用湿法消化和氢化物发生—双道原子荧光光谱法可以同时测定螺旋藻粉中的硒和碲,方法简单快捷,结果准确,能满足测定要求。

钝顶螺旋藻变株FAM的研究

钝顶螺旋藻经Nd:YAG激光辐照和Zn、Se生物富集驯化作用,获得钝顶螺旋藻突变株FAM,研究该突变株的生化组成与细胞超微结构等的变化情况。实验结果表明,与对照藻相比,FAM对Se和Zn的积累量分别为460μg/g和110μg/g;β 胡萝卜素含量提高22.77%;蛋白质含量基本保持不变,氨基酸的含量下降8.52%;细胞超微结构发生变化,突变藻细胞壁表面比较光滑,排列着许多电子密度较深的颗粒体,细胞壁4层结构电子密度较深,藻细胞的羧化体增多。