多光谱法与分子模拟研究亥茅酚苷与人血清白蛋白的结合特性

本实验利用荧光光谱法、紫外光谱法及圆二色光谱法,结合分子对接和动力学模拟研究亥茅酚苷(SOG)与人血清白蛋白(HSA)相互作用。结果表明SOG静态猝灭人血清白蛋白固有荧光且伴随非辐射能量转移,同时通过疏水作用、氢键和静电力与HSA结合形成复合物,与HSA的主要结合位为IIA亚域。随着SOG与HSA反应地进行,HSA的二级结构α-螺旋含量减少,肽键伸展,疏水基团裸露,构象发生变化。分子对接及分子动力学模拟证明,SOG与HSA形成的复合物体系紧密稳定。

亥茅酚苷对脂多糖诱导巨噬细胞一氧化氮和白介素6表达的影响

目的:探讨亥茅酚苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7炎症介质及细胞因子(NO、IL-6)释放的影响。方法:应用LPS(1μg/ml)刺激RAW264.7细胞,采用不同浓度亥茅酚苷(20、40、80μg/ml)干预,Griess试剂法测定NO释放量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-6释放,用免疫印迹法(Western blot)检测细胞一氧化氮合酶(i NOS)的表达,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析i NOS、IL-6 mRNA的表达。结果:亥茅酚苷各剂量组(20、40、80μg/ml)均能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO、IL-6的释放(P<0.01),并下调i NOS蛋白、i NOS mRNA、IL-6 mRNA的表达。结论:亥茅酚苷对LPS诱导的巨噬细胞NO、IL-6释放和i NOS表达有抑制作用,具有一定的抗炎活性。

高效液相色谱法同时测定玉屏风汤剂中6种成分

目的建立以高效液相色谱法同时测定玉屏风散中2类化合物(黄酮类和色原酮类)6种有效成分升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷、芒柄花素含量的分析方法。方法采用AgilentExtend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温25℃;流动相为甲醇-1%乙酸水溶液,梯度洗脱,流速0.8mlmin;检测波长254nm。结果升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷、芒柄花素分别在90～1810ng、97～1940ng、190～1906ng、105～3144ng、88～2625ng、109～3279ng范围内标准曲线呈良好的线性关系,相关系数均在0.9999以上;平均加样回收率分别为98.2%,99.1%,97.3%,97.8%,98.8%,99.2%。结论方法简便快速,结果准确,重复性好,线性范围宽,灵敏度高,可用于玉屏风制剂中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷和芒柄花素含量的同时测定,为玉屏风散质量监控及新剂型研究提供了更加合理、可靠的检测方法。

RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量

目的建立防风药材中4种有效成分含量同时测定的方法，以比较不同产地防风药材及不同部位中有效成分的含量，为防风药材质量标准的制定及防风的资源开发提供科学依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1．0mL·min^-1；检测波长：254mm；柱温：30℃。结果升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷能够达到基线分离；升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度在1．92～400mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9998，n=5），平均加样回收率分别为97．5％、97．7％，RSD分别为1．3％、2．8％（n=9）；升麻素、亥茅酚苷质量浓度在0．96～200mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999，n=5），平均加样回收率分别为99．3％、97．7％，RSD分别为2．0％、1．7％。结论本方法为防风药材的资源开发提供了参考，可用于防风药材的质量控制。

防风化学成分的研究

从防风甲醇提取物中分离得到11个结晶,分别鉴定为β-谷甾醇,香柑内酯,亥茅酚,胡萝卜甙,sec-O-glncosylhamaudol,5-O-甲基维斯阿米醇,升麻素,蔗糖,4-O-β-glucopyranosyl-5-O-methylvisamminol,prim-O-glucosylcimifugin,甘露醇。

响应面法优化防风中升麻素和亥茅酚苷的提取工艺

目的:采用Box-Behnken响应面法,优选防风中升麻素和亥茅酚苷的提取工艺。方法:采用回流方法,以乙醇浓度、提取时间、料液比为自变量,采用Hassan方法计算升麻素与亥茅酚苷含量的总评“归一值(OD)”,建立总评归一值与自变量之间的数学关系,用响应面法预测最佳工艺条件。结果:最佳提取工艺为:乙醇浓度为76%、提取时间为45 min、料液比为2 mL∶43 mL;此条件下升麻素和亥茅酚苷含量理论值分别为0.309、0.833 mg/g。结论:模型预测值与实验观察值接近,表明采用Box-Behnken响应面法优化后得到的提取工艺参数可用于防风药材中升麻素与亥茅酚苷的提取。

HPLC波长切换法同时测定藤药中5种成分的含量

目的建立同时测定藤药中5种成分含量的HPLC方法。方法采用Phenomene C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)。流动相采用甲醇(A)-水(B)梯度洗脱:0~15 min(45.0%A),15~27 min(45.0%→56.0%A),27~42 min(56.0%→70.0%A),42~50 min(70.0%→45.0%A)。流速0.8 m L/min;柱温25℃;检测波长:0~15 min(248 nm,α-玉柏碱),15~50 min(254 nm,升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷)。结果测得α-玉柏碱、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的平均加样回收率及对应的RSD分别为98.63%(1.60%)、97.82%(1.45%)、99.18%(1.48%)、97.18%(1.29%)和98.19%(1.80%),且在5.15~103.00、8.13~162.60、4.74~94.80、4.09~81.80、4.35~87.00μg/m L内,线性关系良好(r≥0.999 1)。结论采用HPLC波长切换法能有效分析藤药中的5个成分,方法准确可靠,重复性良好,结果稳定,可以作为藤药产品质量控制的方法。

防风色原酮类成分的近红外光谱定量分析

目的:本文建立了能快速测定防风中升麻素、4种色原酮含量之和的近红外光谱定量模型。方法:用高效液相色谱法测定55批防风饮片的4种色原酮的含量作为参考值,结合偏最小二乘回归法(PLS)建立回归模型。筛选了不同的光谱预处理方法、波段及最佳因子数,最终模型通过相关系数(R2)、预测均方根误差(RMSEP)和校正均方差(RMSEC)来评估其稳健性。结果:升麻素的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 025 0、0. 024 0、0. 949 9,4种色原酮含量总和的最佳RMSEP值、RMSEC值、R2分别为0. 2460、0. 1720、0. 9110。结论:本研究建立的近红外光谱定量模型较准确,可用于对防风质量的快速检测。

HPLC测定不同产地防风中4种有效成分的含量

目的：建立防风中4种有效成分的含量测定方法,并比较不同产地防风4种成分的含量.方法：色谱柱：Agilent HC C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;甲醇-水（45：55）为流动相;检测波长为254 nm;柱温35℃.结果：升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷4种色原酮类成分的加样回收率均在95%-105%,其RSD均＜3%.结论：不同产地防风药材4种有效成分的含量差别较大;所建立的同时测定升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷4种有效成分的测定方法准确度、重复性好,专属性强,可有效评价不同产地防风药材的质量.

防风中亥茅酚及亥茅酚苷的不对称合成

色原酮类化合物作为中药防风中的主要成分具有广泛的生物活性,其中代表性化合物亥茅酚和亥茅酚苷分别具有抗过敏和抗炎活性.报道了一条亥茅酚及亥茅酚苷的不对称合成路线,该路线主要利用Ca(OH)2促进酚烯醇与异戊烯醛发生aldol/环化串联反应,高区域选择性地构建6/6/6三环核心骨架,利用Jacobsen不对称环氧化反应实现3'位手性中心的构建,以线性6步21%总收率实现亥茅酚的不对称合成,以线性8步15%总收率完成了亥茅酚苷的不对称合成.

防风药材质量标准研究

目的对防风药材进行质量标准提高研究。方法TLC法检定防风药材中5个色原酮类成分,HPLC法测定防风中4个主要有效成分的含量。结果防风药材中可同时鉴定出防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷、防风色原酮Ⅰ和防风色原酮Ⅱ。结论防风药材中含防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷不得少于0.11%,防风色原酮Ⅰ不得少于0.01%和防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷不得少于0.02%,4种成分的总量不得少于0.40%。

关防风HPLC特征指纹图谱研究及4个色原酮类成分一测多评法分析研究

目的:建立指纹图谱及一测多评法测定关防风中4个化学成分含量。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～10min,20%A→40%A;10～30 min,40%A→65%A;30～40 min,65%A;40～60 min,65%A→80%A;60～70min,80%A),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温30℃;采用高效液相色谱法测定12批关防风的指纹图谱,建立指纹图谱共有模式。以5-O-甲基维斯阿米醇苷为内参物,建立升麻素、升麻素苷、亥茅酚苷的相对校正因子,并进行含量计算,实现一测多评。同时采用外标法测定12批关防风中4个色原酮类成分的含量,比较计算值与实测值的差异,验证一测多评法的准确性。结果:12批关防风指纹图谱标定了共20个共有峰,指认了其中7个化学成分。12批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。建立的相对校正因子重现性良好,采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著差异(P>0.05);通过聚类分析,栽培品和野生药材能有效区分。结论:所建立的方法准确、可行,可用于关防风中4个化学成分的定性定量分析。

消风止痒颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素的HPLC法测定及其化学计量学综合评价

目的建立HPLC法同时测定消风止痒颗粒中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素,并采用化学计量学方法对检测结果进行综合评价。方法采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:330 nm(0~14 min检测毛蕊花糖苷和焦地黄苯乙醇苷B1)、254 nm(14~31 min检测升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷)、270 nm(31~55 min检测苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素);体积流量0.9 mL/min;柱温25℃;进样量10μL。采用SPSS26.0统计软件对消风止痒颗粒中9种成分进行聚类分析和主成分分析。结果毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、苍术素醇、白术内酯Ⅱ和苍术素分别在2.53~63.25、1.09~27.25、8.17~204.25、2.38~59.50、4.07~101.75、1.74~43.50、0.66~16.50、1.47~36.75、2.86~71.50μg/m L线性关系良好;平均回收率分别为99.01%、98.17%、100.13%、97.63%、98.72%、97.22%、96.93%、99.24%、100.01%,RSD值分别为1.42%、1.26%、0.72%、1.55%、0.84%、1.06%、1.18%、0.67%、0.95%;11批样品聚类分析为3类,主成分1~3是影响消风止痒颗粒质量评价的主要因子。结论该方法操作简便、重复性好,可作为消风止痒颗粒中多指标成分质量评价模式。

防风趁鲜切制的含水率及不同干燥方式对饮片质量的影响

目的 对防风趁鲜切制工艺中最佳切制含水率及后续饮片干燥方式等关键指标进行考察,为提高防风鲜切饮片质量提供依据。方法 通过评价饮片翘片率、碎片率、药材质地、是否连刀等指标的优劣制定评分标准,选出最优切制区间。用HPLC法同时测定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷4种色原酮含量,用UV法测量饮片总多糖含量,以4种色原酮、总多糖、醇浸出物、饮片出膏率含量为指标考察13种干燥方式所得饮片的质量。运用熵权-TOPSIS法和聚类分析法评价不同干燥方式所得饮片的质量。结果 最佳切制含水率区间为(40±3)%~(50±3)%。不同干燥方式所得饮片的各项指标均具有显著差异,方差及熵权-TOPSIS分析结果显示,70℃真空干燥、80℃鼓风干燥、40℃鼓风干燥饮片质量较好。聚类分析结果显示,冻干、晒干、阴干、真空干燥60℃、40~80℃鼓风干燥等方法聚为一类,表明其干燥方式之间没有显著性差异,升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷对聚类贡献较大。结论 建立的防风最佳趁鲜切制含水率区间评分标准科学合理,结果准确可靠,具有可操作性。趁鲜切制后不同干燥方式及温度对饮片综合质量影响较大,采用熵权-TOPSIS法评价鲜切饮片质量具有科学性,排序结果具有可参考性,有利于企业结合生产实际合理选择。

基于防风外观性状和内在指标性成分划分防风药材商品规格等级研究

目的通过文献、市场及产地调研形成新的防风Saposhnikovia divaricate商品规格等级划分表,根据防风外观性状及与品质相关的内在指标性成分,通过统计学分析,特征图谱比较,探讨新的防风药材商品规格等级划分的科学性和实用性。方法采集黑龙江、吉林、内蒙古、河北等主产区以及主流药材市场上不同规格等级的防风药材样品,根据新的规格等级的划分表,测定样品的外观性状、浸出物、升麻素、升麻素苷、亥茅酚苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的特征图谱,通过统计分析方法,研究规格等级与外观性状及内在指标性成分的关系。结果依照外观性状将防风划分为野生、栽培、仿野生防风3个规格有一定科学依据,同时建议增加升麻素的含量指标作为区分野生防风和栽培防风的指标性成分。结论不同规格的防风药材在外观性状及内在指标上均有显著差异,不同等级的防风药材是否仅以大小作为划分依据还有待讨论。

基于HPLC指纹图谱和多指标成分含量测定及化学模式分析的玉屏风丸的质量评价

目的:建立HPLC指纹图谱和多指标成分定量联合化学模式分析方法,并评价玉屏风丸质量。方法:采用Agilent Zorbax C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温40℃,检测波长为220、275、300 nm,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.2 mL·min(-1)。利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)建立玉屏风丸的HPLC指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价。对升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮、亥茅酚苷、槲皮素、芒柄花素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ、苍术酮共计12个共有峰进行方法学验证和含量测定。基于共有峰面积的测定结果,采用化学模式分析(聚类分析和主成分分析)对10批次玉屏风丸的质量进行评价。结果:在玉屏风丸的HPLC指纹图谱中获得共有峰23个,指认出12个共有峰,10批玉屏风丸的相似度>0.95。12个已知成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(r>0.9997),平均加标回收率范围95.7%~103.2%,RSD(n=9)<3.6%。10批次样品中12个共有峰的含量测定结果差异小。10批玉屏风丸在间距离为15时聚为2类,提取影响玉屏风丸质量评价的主成分3个,获得6个与原始变量关系最为密切的目标物。结论:本研究所建立的方法操作便捷、结果准确、重复性好。可用于玉屏风丸的质量控制,并为玉屏风丸的质量标准提高提供依据和参考。

高效液相一测多评法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷

目的建立高效液相一测多评(HPLC-QAMS)法测定鼻炎片中羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷。方法以乙腈-0.2%磷酸为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min;Agilent HC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃;检测波长203 nm(测定羧基苍术苷和苍术苷)、275 nm(测定连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷)和254 nm(测定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷)。进行专属性试验、线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验;以连翘苷为内参物,建立该成分与羧基苍术苷、苍术苷、连翘酯苷B、连翘酯苷A、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷间的相对校正因子,并计算鼻炎片中9种成分的含量,同时与外标法(ESM)的测定结果进行比较,验证该方法的可行性。结果建立了鼻炎片中9种成分的定量控制方法,方法学验证结果符合要求。鼻炎片中各成分的计算值与实测值无显著性差异。结论HPLC-QAMS法适用于鼻炎片的多指标成分质量评价模式,可以为鼻炎片质量控制方法的建立提供参考。