腺病毒载体携带人TRAIL基因治疗H446小细胞肺癌的体外实验研究

目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能,流式细胞术(FCM)检测Ad-hTRAIL对细胞早期凋亡的影响,并进行RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL mRNA和TRAIL蛋白的表达量。结果携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒Ad-hTRAIL对H446细胞的感染效率较高;感染72h后H446、WRL-68、MRC-5细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为32.02、17.08、16.89μg.L-1,在MOI=1.0时,Ad-hTRAIL即可引起H446细胞明显凋亡;而在MOI=100时对正常细胞WRL-68、MRC-5也没有明显杀伤作用。结论Ad-hTRAIL能够强烈诱导小细胞肺癌细胞H446凋亡而对正常肝细胞及成纤维细胞无明显抑制作用,Ad-hTRAIL在小细胞肺癌的基因治疗方面有潜在的应用前景。

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的:评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法:CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效,流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果:CNHK500-hTRAIL能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖;感染72h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22ng/L;在MOI=0.1时,CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞,并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL;而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论:携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。

重组分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体腺病毒对PC-3细胞荷瘤鼠瘤体的生长抑制

目的探讨表达分泌型TRAIL基因的腺病毒载体对人前列腺癌PC-3细胞荷瘤鼠的生长抑制作用。方法 DAPI染色检测各组PC-3细胞凋亡的情况。Transwell实验检测Ad-s TRAIL对PC-3细胞体外侵袭能力的影响。成功建立PC-3荷瘤鼠模型,经Ad-s TRAIL和Ad-Lac Z分别处理后检测瘤体的生长抑制率。免疫组化实验检测裸鼠移植瘤内TRAIL表达的变化。TUNEL检测瘤体内肿瘤细胞的凋亡。结果 DAPI染色显示Ad-s TRAIL组肿瘤细胞凋亡水平明显高于Control组和Ad-Lac Z组。Transwell实验显示Ad-s TRAIL组穿入下室面的细胞数(24.8±3.70)明显少于对照组(47.6±4.28,q=10.68,P<0.01)及Ad-Lac Z组(49.6±4.39,q=11.61,P<0.01)。成瘤实验表明:Ad-s TRAIL对荷瘤鼠肿瘤的抑制率3 d为8.15%,6 d为11.55%,9 d为17.23%,12 d为20.05%,15 d为27.18%,18 d为34.27%,21 d为33.08%。免疫组化实验显示:Ad-s TRAIL组荷瘤鼠肿瘤组织中TRAIL表达水平明显高于Control组和Ad-Lac Z组。TUNEL实验显示:Ad-s TRAIL组荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡水平明显高于Control组和Ad-Lac Z组。结论通过重组分泌型TRAIL腺病毒载体Ad-s TRAIL处理PC-3细胞荷瘤鼠,可以抑制裸鼠体内肿瘤细胞的增殖,促进前列腺癌细胞的凋亡。

重组分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体腺病毒对前列腺癌细胞增殖的影响

目的构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因的腺病毒载体，观察TRAIL基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响。方法采用基因合成的方法获得含有分泌型信号肽的TRAIL基因，连接人GV315载体，在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以构建好的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测腺病毒感染后PC-3细胞中TRAIL表达的变化。Westernblot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3和Caspase-8表达的变化，通过平板克隆实验、细胞生长实验检测TRAIL对PC-3细胞增殖能力的影响。结果成功构建重组分泌型腺病毒载体Ad-sTRAIL。PC-3细胞经Ad-sTRAIL感染后TRAIL蛋白表达水平明显增加，并且active-Caspase-3和active．Caspase-8的表达明显增加。平板克隆实验结果显示Ad-sTRAIL组克隆形成率[（30．60±2．10）％]明显低于Control组[（46．60±4．86）％，q=7．56，P〈0．01]及Ad-LaeZ组[（45．90±3．56）％，q=7．19，P〈0．01]。噻唑蓝（MTT）实验结果显示Ad-sTRAIL对Pc-3细胞的抑制作用自48h后（20．15％）差异有统计学意义（q=6．82，P〈0．01）。结论通过重组分泌型TRAIL腺病毒载体Ad-sTRAIL使PC-3细胞表达TRAIL基因，并可增加active-Caspase-3和active-Caspase-8的表达，从而抑制前列腺癌细胞的增殖。