鸡白痢沙门氏菌自制抗原的制备及检测效果评价

为了评价鸡白痢沙门氏菌自制抗原的检测效果,试验从通过特异性凝集试验和非特异性凝集试验筛选结果中随机选择1株鸡白痢沙门氏菌临床分离株SP-41,与鸡白痢沙门氏菌标准菌株CVCC1792按照1∶1比例混合,采用平板凝集试验和微量凝集试验两种方法分别制备染色抗原和凝集抗原,并以100份鸡血清样品为检测对象,比较了自制抗原、鸡白痢鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原(以下简称为商品染色抗原)的检测结果及其与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测结果的一致性。结果表明:商品染色抗原、自制染色抗原、自制凝集抗原和D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测的阳性率分别为50%、78%、40%和72%。商品染色抗原Cohen’s kappa系数仅为0.08,提示一致性较差;自制染色抗原和自制凝集抗原的Cohen’s kappa系数为分别为0.363和0.375,一致性一般。自制染色抗原检测结果的阳性符合率最高,可达87.50%;而自制凝集抗原的阴性符合率更高,可达96.43%。说明试验成功制备了鸡白痢沙门氏菌染色抗原和凝集抗原;与商品染色抗原相比,自制抗原与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒的检测结果一致性更高。

猴痘自组装纳米颗粒候选疫苗的制备及免疫应答特征研究

目的 本研究旨在制备自组装纳米颗粒猴痘候选疫苗并研究其免疫应答特征,为其疫苗设计提供可参考的试验数据。方法 利用原核系统表达纯化抗原蛋白A29L-SpyTag和骨架蛋白Mi3-SpyCatcher,化学组装制备纳米颗粒A29L-Mi3,皮下免疫小鼠,通过ELISA测定抗体效价、空斑试验测定抗体中和、流式细胞术测定淋巴细胞分泌细胞因子情况,并描述其免疫应答特征。结果 成功制备A29L-Mi3纳米颗粒,颗粒呈中空笼状均匀分布,其粒径平均为(29±0.19) nm。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗联合SP01佐剂后,中和抗体效价强于A29L蛋白候选疫苗,且A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗免疫2次即能够获得免疫3次相近滴度的中和抗体。A29L-Mi3纳米颗粒候选疫苗激活的小鼠T淋巴细胞免疫应答水平高于A29L蛋白候选疫苗。结论 成功体外组装制备出结构均一的A29L-Mi3蛋白纳米颗粒,具有较强的免疫原性,联合SP01佐剂后中和能力提高,为免疫程序的优化提供参考数据。细胞免疫应答水平均高于单独的A29L蛋白,为猴痘疫苗的设计与研发提供借鉴。

运载双层抗原蛋白的CS-PLGA制剂制备及其表征鉴定

目的制备运载双层抗原的CS-PLGA微球制剂,并对其进行相关表征鉴定。方法通过复乳法结合溶剂挥发法制备得到多孔微球后,在4℃水浴条件下装载抗原,利用抗原浓度梯度介导的物理扩散促进抗原进入微球内部,并通过静电作用结合在微球外表面,形成内外双层抗原运载。根据聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料玻璃转化温度这一特性,促进多孔微球表面孔道在48℃条件下发生愈合,使其形成闭合的微球制剂,再将得到的微球制剂与壳聚糖溶液混悬镀层,进行阳离子修饰,逆转微球表面负性电位。通过扫描电子显微镜、动态光散射粒度仪等检测微球形态、粒径分布和电位变化,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定抗原是否装载至微球制剂中,采用荧光标记的BSA和荧光标记的PLGA材料进行激光共聚焦显微镜观察抗原装载后的分布情况,通过BCA法检测微球制剂的包封率和载药率。结果扫描电镜和光学显微镜结果显示多孔微球成孔良好,粒径大小为(73.94±0.81)nm,多分散性指数为0.038±0.004。Zeta电位由负转正说明壳聚糖已被成功镀层至微球表面。经过SDS-PAGE、激光共聚焦显微镜等证实BSA已被成功运载。经micro BCA试剂盒检测后多孔微球包封率为(3.01±0.04)%,载药率为(1.50±0.02)%。结论成功制备得到运载双层抗原的CS-PLGA制剂,为后续缓控释制剂研究提供新思路。

综合需求在B淋巴细胞白血病CAR-T治疗患者自我效能感和生命质量间的中介效应

目的分析综合需求在B淋巴细胞白血病嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗患者自我效能感和生命质量间的中介效应。方法采取横断面研究法,选取2022年4月-2023年4月我院收治的B淋巴细胞白血病CAR-T治疗患者127例,采用一般资料问卷、一般自我效能感量表、中文版癌症患者综合需求评估量表(CNAT)、中文版癌症患者生命质量测定量表(FACT-G)进行问卷调查,分析综合需求与自我效能感、生命质量间的相关性,建立综合需求在自我效能感和生命质量间的中介模型并验证。结果回收有效问卷127份(97.69%)。127例患者自我效能感、生命质量和综合需求得分分别为(21.91±5.46)分、(68.18±17.23)分和(127.61±23.49)分。Pearson相关性分析结果显示,患者自我效能感与生命质量呈显著正相关(r>0,P<0.05),综合需求与自我效能感、生命质量呈显著负相关(r<0,P<0.05)。自我效能感对综合需求、生命质量有直接预测作用(P<0.05),综合需求在自我效能感和生命质量间具有部分中介作用,中介效应占总效应的24.35%。结论B淋巴细胞白血病CAR-T治疗患者综合需求处于较高水平,且综合需求、生命质量及自我效能感之间具有密切关系,自我效能感能够直接影响患者的生命质量,还可通过综合需求间接影响患者生命质量;临床应针对患者综合需求进行有效干预,影响患者自我效能感对生命质量的作用路径,提升生命质量。

压电免疫传感器用于乙肝表面抗原的测定

A piezoelectric immunosensor has been developed for the detection of Hepatitis B surface antigen(HBsAg). Treatment of a Au electrode with cystamine solution results in cysteamine self assemble monolayers(SAMs). Using a bifunctional cross linker, glutaraldehyde, the antibody was immobilized on the electrode surface. The influence factors such as the reaction time of immunoreaction and the concentration of antibody etc. were investigated. Under the optimized experimental conditions, a series standard concentration of HBsAg solutions were analyzed in solution. The frequency shift was linear with the antigen mass concentration in the range of 0 2-12 0 μg/mL. The analysis results of two serum specimens showed that the positive serum and the negative serum could be distinguished easily. Glycine HCl solution(0 2 mol/L) was used for desorption of the bound antigen. The crystal could be regenerated nearly 8 times without detectable loss of activity.

表面等离子体子共振生物传感器用于乙肝表面抗原的测定

运用自行研制的表面等离子体子共振(SPR)生物传感器,采用自组装成膜技术并以戊二醛作偶联剂,在传感片表面修饰HBsAg单克隆抗体,将其用于乙肝表面抗原(HBsAg)的检测.实验结果表明SPR生物传感器对HBsAg的检出限为 0.0 6ng/mL.与传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)相比,SPR生物传感器的检出灵敏度明显高于ELISA法.用该SPR生物传感器对HBsAg质控血清与纯化的HBsAg溶液进行比较检测。

自组装抗-HBs膜免疫电极的研制和应用

用硫脲在金电极表面自组装单分子层 ,然后通过戊二醛耦联乙型肝炎表面抗体 (抗 -HBs) ,得到电位型的乙型肝炎抗体膜免疫电极 ,用于检测乙型肝炎表面抗原 (HBs Ag) .叙述了该免疫电极的制备方法、性能特点和临床应用 .对 HBs Ag检测的线性范围是 6～ 3 2 0 μg/L,线性相关系数为 0 .998,检出下限 4μg/L.对40例临床血清检测结果 ,与现行的酶联免疫吸附分析法 (ELISA)的结果比较 ,符合率 87.5 % .

Jo-1蛋白在大肠杆菌中的克隆与表达

构建在E.coli中表达人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)的质粒。用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中获得编码人组氨酰-tRNA合成酶(Jo-1)基因的全序列,将此片段定向克隆到麦芽糖融合蛋白表达载体pMAL-c中,诱导表达获得Jo-1的可溶性融合蛋白,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验表明,表达的融合蛋白能与含有抗Jo-1抗体的病人血清发生特异反应,重组融合蛋白具有Jo-1蛋白的免疫原性和免疫特异性。

一种改进的人工免疫算法

简要介绍了遗传算法、人工免疫算法的工作原理。为了克服传统人工免疫算法存在的不足,该文提出一种改进的人工免疫算法,并利用Rosenbrock函数对3种算法进行了试验比较。实验结果表明,该文提出的改进的人工免疫算法较遗传算法、传统的人工免疫算法更为有效。

天然免疫系统中自身和异己抗原的信号识别方式及其在体育中的应用

就天然免疫系统中自身抗原和异己抗原的信号识别方式及其在体育领域中的应用进行综述。主要从微生物异己抗原的识别 ,丧失自我的自身抗原的识别 ,介导的自身抗原的识别这几个方面探讨运动与免疫的关系 。

基于免疫调节机制的参数自整定模糊控制器设计

为进一步解决常规模糊控制算法存在的控制器参数不能在线调整、稳态精度较低等问题,提出一种基于免疫系统调节机制的参数自整定模糊控制算法。该算法在动态调节阶段借鉴生物免疫系统调的T细胞反馈调节机制来整定控制器参数,以获得较优的控制系统动态性能;稳态调节阶段利用免疫系统抗原提呈原理,将控制偏差视为抗原并进行非线性处理,同时微调控制器参数以提高模糊控制器的灵敏度,从而克服常规模糊控制器稳态精度不高的缺陷。为检验免疫模糊自整定控制算法的控制效果,将改进后的算法应用于生物反应器的非线性温度控制对象。研究结果表明:相比于常规模糊控制算法和PID算法,免疫模糊自整定控制算法具有较好的控制效果和较强的抗干扰能力。

压电免疫传感器在梅毒检测中的研究

用巯基丙酸 (MPA)为基层物质在压电石英晶体表面形成单分子膜 ,经过N_乙基_N′_(3_二甲氨基)丙基碳化二亚胺盐酸(EDC)和N_羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后固定梅毒抗原TpAg ,制成免疫传感器检测不同浓度的标准抗体溶液。并考察了传感器的响应特性和免疫反应动力学特性 ,结果表明这种免疫传感器是临床检测的有效工具 ,有巨大的应用潜力。

基于巯基自组装膜的乙肝电化学免疫传感器

研制了以乙肝表面抗原(HBsAg)为检测对象的电化学免疫传感器.在金电极表面自组装半胱胺,戊二醛进行醛基化,最后通过竞争组装在自组装膜上同时固定乙肝表面抗体和硫堇,在PBS底液中以硫堇和辣根过氧化物酶(HRP)的还原峰电流的下降[ΔIp(%)]对乙肝表面抗原进行定性和定量的检测.结果表明,传感器具有良好的选择性,丙肝阳性对照血清对其无干扰,ΔIp随HBsAg的质量浓度(ρ)的增加而增大.HBsAg的质量浓度在0.85×10-2～5.12×10-2μg/mL时,线性方程为ΔIp=5.19+1.56×ρ,相关系数为0.9815;HBsAg的质量浓度在0.32～1.28μg/mL时,线性方程为ΔIp=17.05+0.075×ρ,相关系数为0.9906.并取临床血清进行检测,探索该传感器应用于临床检验的可行性.

类风湿关节炎滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库的构建

目的构建类风湿关节炎(RA)滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选和鉴定RA特异性基因的研究奠定基础。方法取确诊RA患者的滑膜组织,用Trizol试剂提取总RNA,Oligotex离心柱分离mRNA,电泳检测其质量,逆转录合成双链cDNA,经末端修平、接头连接、酶切后去除过多接头,收集>300bp的cDNA片段,与T7Select10-3载体连接,体外包装并扩增得到类风湿关节炎滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库。最后,通过铺平板滴度测定及PCR技术鉴定文库质量。结果所构建原始文库重组克隆数为2×107pfu,扩增滴度8.9×1010pfu/ml。PCR法检测片段插入率为90%,插入片段在300～2000bp之间。文库噬菌体裂解液PCR扩增得到BiP基因片段。结论成功构建了高质量的RA滑膜T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步RA自身抗原的筛选奠定了基础。

大疱性类天疱疮与神经系统疾病相关性研究进展

大疱性类天疱疮（BP）是一种自身免疫性皮肤病，患者多为老年人。国内外诸多研究报道称BP患者常合并有神经系统疾病，其中以痴呆和脑血管事件最为常见。BP存在两种自身抗原，即大疱性类天疱疮自身抗原1（BPAG1）和大疱性类天疱疮自身抗原2（BPAG2）。这两种抗原都在中枢神经系统和皮肤中有表达。患者可能是由于血脑屏障受损导致中枢神经系统抗原暴露于免疫系统，继发的交叉免疫反应攻击皮肤中的自身抗原，使得BP发生。

DNA-金纳米粒子网状结构的合成及在癌胚抗原检测中的初步应用

一种DNA-金纳米粒子导电复合物被成功的制备并应用于癌胚抗原(CEA)的早期检测中。该导电复合物网状结构的制备主要基于DNA中呈负电性的磷酸骨架与带正电荷的金纳米粒子之间的静电自组装技术。测试结果显示,该纳米复合物可以很好的检测癌胚抗原,且检测浓度达到了5 ng/mL,从而为癌症的早期检测奠定了基础。

基于磁弹性生物传感器检测癌胚抗原

基于磁致伸缩材料将巯基十一烷酸自组装于磁弹性芯片,经N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化后固载癌胚抗原抗体(AntiCEA),设计构建了一种新型且低成本的磁弹性生物传感器,基于抗原-抗体特异性识别以及传感器质量增加其共振频率降低的机理,实现对癌胚抗原(CEA)的检测。采用荧光显微镜对异硫氰酸荧光素标记的癌胚抗原抗体(FITC/Anti-CEA)功能化浓度进行了优化,采用原子力显微镜(AFM)和扫描电子显微镜(SEM)对裸金层、自组装膜(SAM)、Anti-CEA负载以及CEA检测进行了表征。实验结果表明,Anti-CEA最佳修饰质量浓度为50μg/mL,CEA线性响应范围为200~1000 ng/mL,检测下限为200 ng/mL。该磁弹性生物传感器有望实现高灵敏快速癌症标志物CEA的检测。

前列腺特异性抗体电化学免疫传感器研制

制得自组装巯基丁二胺铜（Ⅱ）／纳米金胶／前列腺特异性（PSA）抗体免疫传感器。在pH=5．2的磷酸盐底液中，采用示差脉冲法对PSA进行定量测定。结果显示：该传感器的氧化峰电流减少值与PSA浓度在0．005—0．48mg／L范围内成线性关系，检测下限为2μg／L。在40μg／LPSA浓度下测量RSD=2．9％（n=8），该免疫传感器稳定性和抗干扰性较好。检测血清中PSA结果满意。

自拟解毒利咽汤联合调强适形放射治疗晚期鼻咽癌的效果及对血清CEA、SCCAg的影响

目的 研究自拟解毒利咽汤联合调强适形放射治疗晚期鼻咽癌的效果及对血清癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)的影响。方法 选取2019年5月—2021年5月攀枝花市中西医结合医院收治的晚期鼻咽癌患者121例,按照随机数字表分法分为对照组60例、观察组61例。对照组采用调强适形放疗,观察组在放疗的基础上增加自拟解毒利咽汤治疗。观察2组治疗效果及不良反应情况,治疗前后血清CEA、SCCAg, CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+),血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2),转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、白介素-6(IL-6)水平变化。结果 治疗6周后,观察组总有效率高于对照组(86.89%vs.71.67%,χ^(2)=5.944,P=0.014)。治疗6周后,2组血清CEA、SCCAg水平降低,且观察组低于对照组(t/P=56.880/<0.001、51.320/<0.001);2组血清CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)升高,CD8^(+)水平降低,且观察组改善优于对照组(t/P=6.351/<0.001、8.422/<0.001、10.680/<0.001);2组血清VEGF、VEGFR-2水平降低,TSP水平升高,且观察组改善优于对照组(t/P=28.250/<0.001、19.900/<0.001、13.860/<0.001);2组血清TGF-β、IL-6水平降低,且观察组低于对照组(t/P=35.010/<0.001、55.470/<0.001)。观察组总不良反应率低于对照组(9.84%vs.25.00%,χ^(2)=5.170,P=0.022)。结论 自拟解毒利咽汤联合调强适形放疗治疗晚期鼻咽癌患者可降低血清CEA、SCCAg水平,治疗效果较好。

基于PSS/PAH包被的AuNRs免疫传感器用于CEA的测定

通过聚苯乙烯磺酸钠（PSS）与聚丙烯氯化铵（PAH）以层层堆积（LBL）的形式包被到金纳米棒（AuNRs）的表面,从而替换AuNRs表面具有生物毒性的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）.将癌胚抗原（CEA）的抗体（Ab）交联到AuNRs的表面,研制出一种新的癌胚抗原（CEA）的检测方法.随着CEA与AuNRs表面的Ab发生特异性反应,使AuNRs发生自组装,从而导致其紫外可见吸收光谱发生变化.通过测量吸收光谱的变化可以实现CEA的定量检测.采用电化学交流阻抗法和循环伏安法考察了不同修饰层结合到AuNRs表面后的变化情况;考察了溶液pH、Ab与CEA的结合时间对响应的影响.在最优条件下,该传感器的检测范围为10～100 ng/mL,检测下限为3.3 ng/mL.