Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究

采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。

Sephadex G-10凝胶色谱系统测定头孢美唑钠的聚合物

目的 建立凝胶色谱法测定头孢美唑钠的聚合物的方法。方法 色谱柱为葡聚糖凝胶Sephadex G-10（16mm×35cm），流动相A：0.02mg·mL^-1磷酸盐缓冲液（pH7．O）；流动相B：水。流速为1．0mL·min^-1。检测波长为254nm，进样量为200μl。结果 头孢美唑钠在5、O～60.0mg·mL^-1范围内，浓度与聚合物的峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996）。结论 该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好。

SephadexG-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠的高分子聚合物

目的 建立 Sephadex G-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠高分子聚合物的方法。 方法 色谱柱为葡聚糖凝胶 G-10柱 ( 3 60 mm×16m m) ,流动相 A:0 .0 1mol· L- 1磷酸盐缓冲液 ( p H7.0 ) ,流动相 B:超纯水 ,流速 :1.0 ml· min- 1 ,检测波长 :2 5 4nm,进样量 :2 0 0μL。结果 头孢西丁钠进样浓度在 5～ 40 mg· m L- 1 的范围内与头孢西丁钠高分子聚合物的峰面积呈良好的线性关系 ( r=0 .9990 )。结论 该方法简便准确 ;灵敏度高 ;重现性好。

Ficoll分离液在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中的应用

目的 探讨Sephadex G-100微柱凝胶血型卡加入Ficoll分离液后的性能和应用.方法 在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中加入Ficoll分离液,制作成Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡,对200例标本进行ABO和Rh（D）血型测定,并与进口的强生血型卡和Sephadex G-100血型卡法进行比对.分别用37℃孵育强生血型卡、45℃孵育强生血型卡和45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡三种方法对6例低、中、高不同效价的冷凝集素标本进行ABO和Rh （D）血型测定,同时进行反定型血型检测.分别用强生血型卡、Sephadex G-100血型卡和Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡对26例溶血标本进行ABO和Rh （D）血型测定.结果 自制Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测200例标本的血型结果,A型55例,B型46例,O型92例,AB型7例,Rh （D）均为阳性,与强生血型卡和Sephadex G-100微柱凝胶血型卡结果相同.自制血型卡检测抗D抗体平均滴度为1：256,与Diana凝胶卡灵敏度相同,明显优于传统试管法（P＜0.05）.45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测6例冷凝集素标本血型结果正确,正反定型一致,37℃和45℃孵育强生血型卡检测冷凝集素标本血型分别有3例和2例结果不正确,造成假阳性.Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测26例溶血标本血型结果正确,强生血型卡和Sephadex G-100血型卡检测溶血标本血型分别有6例和10例结果不正确.结论 研制Ficoll分离液-Sephadex G-100微柱凝胶血型卡适用于血型鉴定.对于冷凝集和溶血标本血型鉴定有明显优势.该卡具有准确、灵敏、特异、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值.

Sephadex G-25对乳酸链球菌素溶液脱盐的研究

目的研究乳酸链球菌素的凝胶过滤脱盐法。方法比较在Sephadex G-25柱上加样量、加样体积、洗脱流速和高径比对脱盐效果的影响。结果确定了乳酸链球菌素的最佳脱盐工艺为:色谱柱高径比15:1,加样体积为每毫升凝胶0.1mL料液、加样量为每毫升凝胶7×104IU、用pH3.45的醋酸缓冲溶液在0.6mL/min流速下洗脱。在此条件下,乳酸链球菌素的脱盐收率和回收率都在90%以上。结论 Sephadex G-25能有效的将乳酸链球菌素和盐分离。

血清G-17、PGⅠ、CA50单独或联合检测对胃癌患者的诊断价值

目的探究血清胃泌素-17(G-17)、胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、癌抗原50(CA50)单独或联合检测对胃癌(GC)患者的诊断价值。方法选择2017年12月-2018年12月鹤壁煤业(集团)有限责任公司总医院消化科收治的GC患者75例作为GC组,同期收治的萎缩性胃炎(AG)患者75例作为AG组,同期在院健康体检者75例作为对照组,检测并比较三组血清G-17、PGⅠ、CA50水平,检测并比较不同临床病理分期GC患者血清G-17、PGⅠ、CA50水平,分析G-17、PGⅠ、CA50单独及联合检测对GC患者的诊断价值。结果AG组及GC组PGⅠ水平明显低于对照组(P<0.05),AG组及GC组G-17、CA50水平明显高于对照组(P<0.05),GC组PGⅠ水平明显低于AG组(P<0.05),GC组G-17、CA50水平明显高于AG组(P<0.05);GC患者血清PGⅠ、CA50水平随临床病理分期升高而升高,差异显著(P<0.05),GC患者血清G-17水平随临床病理分期升高而下降,差异显著(P<0.05);CA50对GC诊断效能明显优于G-17(P<0.05),PGⅠ对GC诊断效能明显优于CA50(P<0.05);PGⅠ对GC诊断效能明显优于CA50(P<0.05);G-17、PGⅠ、CA50联合检测对GC诊断效能明显优于单独检测(P<0.05)。结论G-17、PGⅠ、CA50联合检测对GC诊断效能明显优于单独检测,将G-17、PGⅠ、CA50联合检测应用于GC筛查,有助于提高我国GC早期诊断率,降低GC死亡率。

Sephadex G-10凝胶色谱法测定头孢克洛胶囊中高分子聚合物

目的:建立用Sephadex G-10凝胶色谱法分析头孢克洛胶囊中高分子聚合物的方法。方法:色谱柱:Sephadex G-10柱(300 mm×15.0 mm,40～120μm);流动相A:pH 7.0的0.05 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液[0.05 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液-0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(95:5)];流动相B:超纯水;检测波长:254 nm;流速:1.5 ml·min^(-1)。以头孢拉定作对照加校正因子外标法定量(头孢克洛:头孢拉定=1:1)。结果:头孢克洛聚合物在1～20μg·ml^(-1)范围内呈良好的线形关系(r=0.9992)。结论:方法简便易行,能较好分离头孢克洛与其聚合物,且精密度、准确度均能满足质量控制的要求。

ZL50G-2型装载机紧急制动迟缓的解决

ZL50G-2型装载机采用双踏板双管路制动系统(见图1)，使用中经常出现行车制动正常，而紧急制动迟缓的现象。经多次试验，找到了故障原因，并对其结构进行了改进。

滇产刺梨多糖的提取纯化及其结构分析

目的:探讨刺梨多糖提取和纯化的方法。方法:采用热水提取醇沉法从刺梨果实中提取多糖,在单因素实验的基础上,以响应面实验对刺梨多糖的提取工艺进行优化。采用Cellulose DEAE-52和Sephadex G-100柱对刺梨粗多糖进行分离纯化,Sevage法脱蛋白,D-101吸附树脂脱色素,FT-IR、HPGPC和HPLC测定分子量和单糖组成。结果:刺梨多糖是一种以Glc为主要成分的均一性酸性多糖。

Nobiliside-A脂质体包封率测定方法的研究

目的:建立黑乳海参的三萜皂苷Nobiliside-A脂质体包封率的测定方法。方法:分别采用葡聚糖柱层析法、微柱离心法分离脂质体和游离药物,并进行方法学考察,优选出测定Nobiliside-A脂质体包封率的方法。结果:两种测定包封率的方法结果无差异。结论:可以采用微柱离心法方便、快速地测定Nobiliside-A脂质体的包封率。

大鼠肝抑素纯化及其生物活性的检测

用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５凝胶过滤层析法，进一步纯化具肝抑素生物活性的大鼠肝蛋白质粗提品。以分离的大鼠再生肝的肝细胞为靶细胞，体外检测各洗脱峰浓缩物对肝细胞增殖的抑制率。结果证明，Ｅ峰浓缩物的抑制作用最强，其活性比为粗提品的２０倍。ＳＤＳ聚丙烯酸胺电泳图及蛋白质迁移率测定表明，该浓缩物的主要成分为分子量１３．５ｋＤ的多肽。本研究对大鼠肝抑素做了初步纯化，验证了该物质在肝再生中起重要调控作用的生物效应。

磷酸川芎嗪纳米脂质体包封率的测定

目的建立磷酸川芎嗪纳米脂质体包封率的测定方法。方法采用Sephadex G-50凝胶柱分离脂质体和游离磷酸川芎嗪,紫外分光光度法测定包封率。结果凝胶柱层析能有效分离脂质体与游离磷酸川芎嗪,柱回收率和柱加样回收率分别为99.09%和98.35%。磷酸川芎嗪线性范围为0.160～24.048μg·mL-1(r=0.9998),测得包封率平均值为36.12%,RSD为1.18%。结论该方法简便易行,准确可靠,可用于磷酸川芎嗪纳米脂质体包封率的测定。

商品果胶酶中endo－PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料，经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００两步骤分离纯化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２，其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ，含糖量为１１．２２％及８．３％，最大紫外吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处，氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高，Ｍｅｔ含量较低，不含Ｃｙｓ，并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸，圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠，其中ｅｎｄｏ－ＰＧ１含α螺旋４５．１％，β折叠２４．９％；ｅｎｄｏ－ＰＧ２含α螺旋３９．６％，β折叠３６．５％。

汉防己甲素脂质体包封率的测定

目的：建立汉防己甲素脂质体包封率的测定方法。方法：采用葡聚糖凝胶柱分离脂质体与游离药物，采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定脂质体中汉防己甲素的包封率。结果：葡聚糖凝胶G50可有效分离脂质体和游离药物；汉防己甲素在2～12μg／ml时与峰面积线性关系良好，y=8368x-897．33，r=0．9995。结论：HPLC法简单可行，结果准确，可用于测定汉防己甲素脂质体的包封率。

香菇多糖提取分离的研究

采用DEAE-cellulose柱层析和Sephadex G-200柱层析从香菇子实体热水浸提的粗多糖中分离出两个多糖组分Len1-A、Len2-A,经旋光度法、Sepharose 4B柱层析、红外光谱等方法检测确定为均一多糖组分,且均为α-构型的吡喃糖,苯酚硫酸法测得其糖质量分数分别为91.5%和92.3%,旋光度为+5.6°、+11.2°,相对分子质量为375×103、718×103。

川芎嗪长循环脂质体包封率的测定

目的建立川芎嗪长循环脂质体的包封率测定方法。方法采用葡聚糖凝胶-G50微型柱分离脂质体和游离药物,以高效液相色谱法分别测定含量,并计算包封率。结果葡聚糖凝胶-G50可使川芎嗪长循环脂质体和游离药物完全分离;HPLC条件下,川芎嗪与辅料和溶剂峰分离良好,川芎嗪浓度在1.09～43.60μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9994,n=6)。结论所建立的方法简单可行、重复性好、准确、稳定,为评价和控制川芎嗪长循环脂质体的质量提供了依据。

桔梗多糖的分离纯化与含量测定

利用离子交换凝胶柱层析法分离纯化桔梗多糖,并对纯化组分进行纯度鉴定和糖含量及蛋白质含量测定。桔梗饮片经热水浸提、乙醇分步沉淀得桔梗粗多糖PPS80,Sevage法脱蛋白后,通过DEAE-Sepharose FF离子交换和Sephadex G-75凝胶柱层析进行纯化鉴定。分别采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝染色法测定纯化后各组分的糖和蛋白质含量。试验结果表明,从桔梗粗多糖PPS80中分离得到2个均一性组分PPS80-I和PPS80-Ⅱ,糖含量分别为90.32%和86.75%,蛋白质含量分别为0.48%和1.96%。该试验首次采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析结合Sephadex G-75凝胶柱层析有效分离纯化出桔梗多糖均一性组分,为桔梗多糖的进一步研究提供基础。

湿疹纳米乳中丹皮酚包封率的测定

目的建立湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法,用于评价湿疹纳米乳制备工艺。方法采用葡聚糖凝胶G-50柱分离湿疹纳米乳中包封的丹皮酚与未包封的丹皮酚。HPLC法测定湿疹纳米乳中丹皮酚的含量,并计算其包封率。结果纳米乳中丹皮酚的含量在0.4160~41.60μg/m L浓度范围内线性关系良好,r为0.999 9,加样回收率平均值为98.43%,RSD为2.90%;纳米乳中丹皮酚的包封率值为（92.43±0.44）%,RSD为0.43%（n=6）,葡聚糖凝胶柱分离纳米乳上样回收率为（90.5±0.17）%,RSD为1.84%。结论葡聚糖凝胶G-50可以将湿疹纳米乳和游离的丹皮酚较好地分开,湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法可作为工艺研究的评价方法。