子宫内膜异位症患者腹腔冲洗液及血清CD133、ABCG2的表达

目的探讨子宫内膜异位症(EMs)腹腔冲洗液、血清CD133、ABCG2水平与EMs发生发展的关系。方法选择2010年1月～2011年6月江苏省镇江市妇幼保健院收治的EMs患者38例为EMs组,选择同期其他妇科良性病患者22例为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组腹腔冲洗液及血清中CD133、ABCG2水平并分析其相关性。结果①Ems组腹腔冲洗液CD133、ABCG2水平分别为(13.47±2.37)、(9.81±2.45)ng/L,高于对照组的(11.75±2.82)、(8.14±2.92)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.008、0.013)。血清CD133、ABCG2水平分别为(1.39±0.32)、(5.22±1.49)ng/L,高于对照组的(1.13±0.29)、(4.06±1.89)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.001、0.006)。②EMs组Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔冲洗液CD133、ABCG2水平分别为(14.28±1.99)、(10.55±2.29)ng/L,高于Ⅰ～Ⅱ期患者的(12.35±2.44)、(8.79±2.36)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.011、0.027);血清CD133、ABCG2水平分别为(1.53±0.31)、(5.83±1.39)ng/L,高于Ⅰ～Ⅱ期患者的(1.19±0.22)、(4.39±1.21)ng/L,差异均有统计学意义(P=0.001、0.002)。③Ems组腹腔冲洗液CD133、ABCG2水平与血清CD133、ABCG2水平呈明显正相关(r=0.579,P=0.000;r=0.703,P=0.000)。结论腹腔冲洗液、血清CD133、ABCG2升高可能与EMs发生发展有关,有望单独或联合成为EMs诊断的新指标。

不同培养条件对CD133^(+)原代口腔鳞癌细胞干性维持的影响

目的:通过将CD133^(+)/-细胞从原代口腔鳞癌细胞中分离纯化,探索不同培养条件对CD133^(+)原代口腔鳞癌细胞的干性维持及生物学特性的影响。方法:应用CCK-8法检测CD133^(+)/-细胞亚群体外增殖能力以及对顺铂抵抗耐受能力,利用Transwell法检测顺铂对CD133^(+)/-细胞亚群侵袭能力的影响。以无血清培养法(含或不含白血病抑制因子LIF)和含血清培养法分别培养CD133^(+)细胞亚群,流式细胞仪分析CD133^(+)细胞的比例变化。在动物实验模型中验证CD133^(+)和CD133-细胞致瘤能力的差异,最后将移植瘤取出,行H-E染色和免疫组织化学染色。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与CD133-细胞亚群相比,CD133^(+)细胞具备较强的体外增殖能力(P<0.05)和顺铂化疗耐受能力(P<0.001)。顺铂对CD133-细胞亚群侵袭能力的影响更强(P<0.01)。无血清培养法更能维持CD133的比例(P<0.05),无血清培养基是否添加LIF对CD133的比例维持无显著差异(P>0.05)。在裸鼠体内成瘤实验中,CD133^(+)细胞亚群以较少的数量级表现出较强的致瘤能力(P<0.05)。结论:无血清培养法可较好地维持原代口腔鳞癌细胞干细胞特性,添加LIF对原代口腔鳞癌细胞的干性维持无显著影响。

伊立替康联合顺铂与紫杉醇联合顺铂治疗宫颈癌的临床疗效分析

目的比较伊立替康联合顺铂与紫杉醇联合顺铂治疗宫颈癌患者的临床疗效。方法选择2012年1月至2015年12月在江汉大学附属医院进行中晚期宫颈癌治疗的患者76例,随机分为观察组和对照组,各38例。对照组使用紫杉醇联合顺铂(TP)方案进行治疗,观察组使用伊立替康联合顺铂(IP)方案进行治疗。观察两组患者临床疗效、治疗前后血清SCC-Ag、CD133水平变化以及不良反应发生情况。结果观察组患者总有效率为89.47%,对照组为68.42%,观察组患者治疗后总有效率明显高于对照组,且具有统计学差异(χ2=3.879,P<0.05)。肿瘤直径治疗前两组无明显差异(t=0.420,P>0.05),治疗后均有所减小,而观察组减少的更为明显(t=3.442,P<0.05)。两组患者治疗前血清SCC-Ag、CD133水平无明显差异,治疗后观察组患者血清SCC-Ag水平(t=10.690,P<0.05)和CD133阳性率明显低于对照组(χ2=4.375,P<0.05)。观察组患者骨髓抑制、消化道反应、脱发、肝肾功能损害以及外周神经毒性等不良反应发生率均低于对照组,具有统计学差异(χ2值分别为6.480、5.330、5.510、5.050、5.680,均P<0.05)。结论伊立替康联合顺铂化疗对中晚期宫颈癌患者具有良好的临床疗效,能够显著降低患者血清SCC-Ag、CD133水平,且不良反应小,安全可靠。

结直肠肿瘤细胞球的干细胞相关特性研究

目的:无血清悬浮培养生成5种人结直肠肿瘤细胞球,体外稳定传代培养,研究其在体外增殖、分化及转移等生物学特性。方法:人结直肠癌细胞SW480、SW620、LOVO、HT29和HCT116在添加了细胞生长因子的无血清培养基(Serum-free medi-um,SFM)中悬浮培养,稳定传代并诱导分化。选择其中HCT116细胞系用流式细胞技术检测单层细胞及其肿瘤细胞球干细胞标记分子CD133+的表达。Transwell小室实验、免疫荧光及RT-PCR分别检测HCT116单层细胞及其肿瘤细胞球的体外转移能力,以及间质化标记分子N-cadherin及Vimentin的表达。结果:5种人结直肠癌细胞系均在SFM中形成能稳定传代培养的肿瘤细胞球,其在含血清培养基(Serum supplemented medium,SSM)中重新贴壁生长并各自恢复亲代细胞的生物学特性。与HCT116单层细胞相比,HCT116肿瘤细胞球中CD133+细胞比例显著增多,并具有更强的转移能力,以及高表达间质化标记分子N-cad-herin及Vimentin。结论:通过无血清培养可以生成人结直肠肿瘤细胞球,这些球体中富含肿瘤干细胞样特性的细胞。

骨髓间质干细胞突变的致瘤肿瘤干细胞分离及培养

目的建立合适的骨髓间质干细胞突变的肿瘤细胞系F6(肿瘤干细胞)分离及体外长期培养方法并探讨其生物学特性。方法采用抗CD133-PE抗体经流式细胞仪分选F6肿瘤干细胞(F6 CSCs),研究不同培养体系对F6 CSCs体外生长的影响,探讨最适体外培养条件。结果一次分选获得F6 CSCs纯度达到80%。分选的F6 CSCs对Balb/c小鼠有体内致瘤能力,在含2%胎牛血清的L-DMEM营养液中可以长期稳定的培养,其CD133表面标志的表达维持在68.87%。结论低浓度胎牛血清的培养液能维持F6 CSCs的生长并保留其相应的生物学特性,这为肿瘤干细胞体外培养及研究提供了新的思路和方法。

SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定

目的:探讨SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定方法。方法:采用以6孔悬浮细胞培养板为载体的无血清DMEM/F12培养基(含EGF、FGF、B27)提取与纯化SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定,并在倒置显微镜下观察细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果:SHG44人脑胶质瘤干细胞能在含无血清DMEM/F12培养基的6孔悬浮细胞培养板中存活、增殖并形成干细胞球;悬浮培养3d初步形成呈巢状悬浮生长的胶质瘤干细胞团,7d后干细胞球大小、形态基本不变。经统计分析,悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P<0.05),且呈更规则球形。结论:本研究成功提取、纯化、鉴定出SHG44胶质瘤干细胞,并进行传代扩增培养;Cyagen悬浮细胞培养板可作为筛选胶质瘤干细胞的理想载体。

不同无血清培养方式提取SHG44人脑胶质瘤干细胞的比较研究

目的筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法。方法采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微镜下细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果培养皿和培养瓶初次富集的SHG44胶质瘤干细胞球呈较大不规则形,经二、三次纯化后发现第二与三次纯化后的大部分胶质瘤干细胞呈不规则分化状,大部分胶质瘤干细胞球呈分散、较小、不规则形生长,但第三次比第一、二次有更少的胶质瘤干细胞球却呈更规则球形生长;悬浮细胞培养板提取、纯化的干细胞呈类圆形,基本全部形成胶质瘤干细胞球,且第三次比第一、二次纯化的干细胞球呈更大更规则球形生长;经统计分析悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球较培养皿和培养瓶纯化的胶质瘤干细胞球大且数目多(P<0.05);对于悬浮培养板,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P<0.05),且呈更规则球形。结论无血清培养基以悬浮细胞培养板为载体纯化胶质瘤干细胞是较理想的方法。

卵巢癌患者血清CD133和miR-145的表达与临床病理特征及预后的关系

目的研究卵巢癌患者血清CD133、miR-145的表达与临床病理特征及预后的关系。方法选择106例卵巢癌患者作为观察组,另选同期进行健康体检的女性志愿者106例为对照组,随访2年,对比两组血清CD133及miR-145的表达水平,分析卵巢癌患者的血清CD133及miR-145表达水平与病理体征及预后的关系。结果观察组术前血清CD133表达水平明显高于对照组,而miR-145表达水平明显低于对照组,两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。卵巢癌患者分化程度为中低分化、CA125≥200 U/ml、存在转移及FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ的血清CD133表达水平明显更高,而miR-145表达水平明显更低(均P<0.05)。卵巢癌患者在术后7 d的血清CD133水平明显低于术前,miR-145水平明显高于术前(均P<0.05)。患者复发时的血清CD133水平明显高于术后7 d,miR-145水平明显低于术后7 d(P<0.05)。结论卵巢癌患者的血清CD133表达上调,而miR-145的表达下调,两者的表达与卵巢癌发生、发展及预后密切有关。临床上可考虑将血清CD133、miR-145作为生物标记物进行监测,从而更好地辅助临床诊治过程。

无血清分离人结直肠癌细胞的体外培养形态及标志物表达特征

目的探讨人结直肠肿瘤干细胞在体外分化过程中细胞形态和干细胞相关标志物CD133的表达变化,为进一步研究结直肠肿瘤干细胞分化走向提供实验依据。方法取来源于人结直肠癌的细胞系HCT116,无血清培养分离出CD133+细胞,加血清诱导分化,相差显微镜下观察其形态变化;在未分化状态下无血清培养第7天和14天与血清诱导分化后收集细胞,利用流式细胞仪检测干细胞标志物CD133的表达量,采用激光共聚焦检测CD133表面标记分子的表达。结果 1)细胞形态:无血清培养分离的CD133+细胞,在生长过程中聚集成规则的细胞球,血清诱导后即贴壁生长,贴壁形态与同来源细胞形态一致,且再次无血清悬浮培养后聚集成球稳定生长。2)标志物变化:结直肠肿瘤干细胞未分化时CD133表面标记分子高表达,流式细胞仪检测未分化细胞CD133第7天表达率为(20.4±0.52)%,第14天表达率为(78.5±2.80)%,分化后表达率为(0.50±0.17)%。结论细胞形态和标志物表达改变均表明高表达CD133+的HCT116结直肠癌肿瘤干细胞可定向分化为同源的结直肠癌细胞,CD133+细胞经血清诱导后表达下调而使细胞失去干细胞特性。