检测肺癌患者血清游离DNA的EGFR基因点突变与EGFR-TKI疗效的相关性分析

目的探讨测定肺癌患者血清游离DNA的EGFR基因点突变的可行性,及检测结果与肺癌患者对EGFR-TKI疗效间的相关性。方法收集2007年11月～2008年4月170份北京协和医院呼吸内科肺癌中心门诊就诊患者4ml全血的血清样本,经检查后确诊为非恶性肺疾病20例,肺癌150例,其中腺癌140例,鳞癌10例。蝎形探针扩增阻滞突变系统(Scorpions ARMS)检测外周血清游离DNA中EGFR基因点突变情况。结果 150份肺癌患者血清标本检测到87个突变,敏感突变49例(32.7%),耐药突变38例(25.3%),敏感/耐药双突变7例(8.0%);敏感突变率女性中显著高于男性,分别为40.2%及22.2%(P<0.05)。非吸烟者高于吸烟者,分别为55.7%和22.5%(P<0.01);140例肺腺癌敏感突变率为35.0%,应用EGFR-TKI的有效率达83.0%;T790M为常见耐药突变,与应用EGFR-TKI可能有关,且显示疾病可能进展或耐药。结论 Scorpions ARMS检测肺癌患者外周血清游离DNA的EGFR基因点突变方法取材方便、方法灵敏及重复性好;EGFR基因点突变检测结果与临床评估EGFR-TKI疗效较为符合,因此在预测疗效、监测耐药发生方面,有良好的临床应用前景。

卵巢上皮性癌患者血清无细胞DNA的检测及临床意义

目的:检测循环无细胞DNA中的肿瘤相关cfDNA(ALU247/ALU115)及CA-125基因片段(CA125-cfDNA)在卵巢上皮性癌患者血清中的表达,探讨其是否可作为卵巢上皮性癌早期诊断及病情监测的指标。方法:采用半定量RT-PCR方法检测48例卵巢上皮性癌、16例良性卵巢上皮性肿瘤和12例正常健康对照血清中游离的ALU247、ALU115、CA125、β-actin DNA片段的表达。结果:卵巢上皮性癌患者血清中的肿瘤相关cfDNA(ALU247/ALU115)和CA125-cfDNA的相对水平(CA125-cfDNA/β-actin)明显高于卵巢良性肿瘤患者、正常对照及术后化疗二疗程者的值,晚期患者(Ⅲ-Ⅳ期)血清中的表达明显高于早期患者(Ⅰ-Ⅱ期),早期患者的表达明显高于正常对照组(P<0.05),该两项指标与病理学类型及病理分级无关。CA125-cfDNA的相对水平与血清CA125的值存在相关性,在晚期卵巢上皮性癌未化疗患者腹水中的值显著高于血清中的值(P<0.05)。结论:检测血清中ALU247/ALU115及CA125-cfDNA基因片段的水平可作为血清CA125的有效补充指标,用于卵巢上皮性肿瘤良恶性鉴别诊断、早期诊断和病情监测。

母血浆及血清中胎儿游离DNA的研究进展

1997年胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断开辟了新的途径。母血循环中的胎儿游离DNA含量相对较高，获取方法比较简单，在早孕阶段就可以检测到，这些优点成为极具潜力的无创伤性产前诊断方法。目前，胎儿游离DNA已经应用于某些性连锁疾病、妊娠相关疾病、染色体病、胎儿RhD血型检测等很多疾病的产前诊断中。我们希望此技术的进一步发展和完善可以使这种无创性的产前诊断方法在临床得到更广泛的应用。

孕妇血清中胎儿游离DNA产前筛查Down’s综合征初探

目的应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应（Real-time quantitative PCR）技术检测孕妇血清中胎儿游离DNA含量，探讨以其含量变化作为Down’s综合征产前筛查新指标的可行性。方法选择42例孕中期（16-19周）的妇女作为研究对象，其中7例为孕21三体男胎的妇女，18例为孕正常男胎的妇女，17例为孕正常女胎的妇女，提取其外周血血清中游离DNA，应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术检测Y染色体上的DYS14基因，以此确定母体血清中的胎儿游离DNA含量，并同时检测代表母体与胎儿总游离DNA的β-actin基因作为对照。结果孕21三体男胎组血清胎儿游离DNA含量明显高于孕正常男胎组，它们分别为94．5基因当量（genome equivalents，GE）／ml及42．8GE／ml（P〈0．01），孕21三体男胎组血清中的胎儿游离DNA含量为孕正常男胎组的2．2倍。孕正常女胎组血清中未检测到Y-染色体上的DYS14基因。结论胎儿游离DNA可能成为产前筛查Down’s综合征的候选指标。

分支DNA技术在胃癌患者血清游离DNA检测中的应用

目的：建立一种基于Alu序列定量检测游离DNA（cell-free DNA,CFD）的分支DNA技术（branched DNA assay,b DNA）,并探讨血清CFD检测在胃癌早期筛查和病程监控中的应用价值。方法 ：采集40例胃癌患者的血清标本,同期匹配健康体检者60例和胃良性肿瘤患者32例的血清标本进行对比分析,采用b DNA技术定量检测各组血清CFD含量,并用化学发光方法检测相关肿瘤标志物：癌胚抗原（carcino-embryonic antigen,CEA）、糖链抗原72-4（carbohydrate antigen 72-4,CA72-4）,糖链抗原50（carbohydrate antigen 50,CA50）的水平。结果 ：b DNA方法线性范围为0-400 ng/m L。胃癌患者血清CFD含量2 570.2（815.7-4 554.0）ng/m L显著高于健康对照组196.5（112.8-328.5）ng/m L和胃良性肿瘤组423.1（256.3-513.6）ng/m L（P〈0.000 1）;血清CFD与血清肿瘤标志物CEA、CA72-4、CA50比较发现,无明显相关性,胃癌患者血清CFD水平与疾病发生、发展和肿瘤负荷有一定的相关性。以774.2 ng/m L为临界值（Cut off值）,其诊断的灵敏性为77.5%,特异性为95.7%,受试者工作特征曲线下面积为0.921。结论：b DNA技术是一种新型、灵敏的定量检测外周血CFD含量的方法;血清CFD对胃癌患者的早期筛查、辅助诊断和病程监控有一定的临床应用价值。

非小细胞肺癌患者血清游离DNA中COX-2拷贝数检测

COX-2拷贝数,结合其临床病理生理特征统计分析。结果:NSCLC组、良性肺部疾病组和健康组COX-2拷贝数平法:运用实时荧光定量PCR检测60例NSCLC、25例良性肺部疾病患者和25例健康人外周血清游离DNA中的摘要目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清游离DNA中COX-2拷贝数的检测及其临床意义。方均值分别为(1.575±0.016)×106copies/mL、(2.875±0.007)×104copies/mL和(4.269±0.004)×103copies/mL。COX-2拷贝数在NSCLC患者中:女性、非吸烟、腺癌和有淋巴结转移患者中明显增多(均P<0.05);与临床分期呈正相关0.946)。结论:COX-2基因拷贝数在NSCLC患者血清中明显增多,可能是诊断NSCLC和监测预后的一种重要肿关系:Ⅲ+Ⅳ期患者高于Ⅱ期,Ⅱ期患者高于Ⅰ期(r=0.323,P=0.012);在年龄比较的差异无统计学意义(P=瘤标志物。

血清游离DNA ATM启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌患者放射抗性的预测价值

目的:探讨血清游离DNA(cfDNA)共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)启动子甲基化对局部晚期宫颈鳞癌(CSCC)患者放射抗性的预测价值。方法:选取2016年3月至2020年7月在本院完成调强放疗的144例局部晚期CSCC患者作为研究对象。采用定量甲基化特异性聚合酶链反应法检测血清cfDNA ATM启动子甲基化水平,并收集随访数据。放疗完成1个月后根据实体瘤疗效评价标准评估患者治疗反应。结果:局部晚期CSCC患者治疗前血清cfDNA ATM启动子甲基化水平为66.15%(51.28%,76.28%),与主要临床特征无关(P>0.05)。抵抗组局部晚期CSCC患者治疗前血清cfDNA ATM启动子甲基化水平显著低于敏感组(P<0.001)。血清cfDNA ATM启动子甲基化预测局部晚期CSCC患者放射抗性的ROC曲线下面积为0.798(95%CI:0.723~0.873)。Logistic回归分析显示,治疗前血清cfDNA ATM启动子甲基化水平是局部晚期CSCC患者放射抗性的独立预测因子(P<0.05)。预后分析显示血清cfDNA ATM启动子甲基化是局部晚期CSCC患者的独立有利预后因素(P<0.05)。局部晚期CSCC患者血清cfDNA ATM启动子甲基化高水平组术后无进展生存期、总生存期、远处无转移生存期和局部无进展生存期均显著优于低水平组(P<0.05)。结论:治疗前血清cfDNA ATM启动子甲基化状态可能是预测局部晚期CSCC患者放疗后预后的有用生物标志物。

急性胰腺炎患者血清中游离DNA/中心粒细胞胞外诱捕网和乳酸脱氢酶与病情程度的相关性研究

目的分析急性胰腺炎患者血清中游离DNA(cf-DNA)/中心粒细胞胞外诱捕网(NETs)、乳酸脱氢酶(LDH)与病情程度的相关性。方法选取2020年1月至2021年1月于葫芦岛市第二人民医院诊治的89例急性胰腺炎患者作为研究组,另选取同期体检的89例健康体检者作为对照组。两组均进行血清cf-DNA/NETs、LDH检查,比较两组血清cf-DNA/NETs、LDH水平,不同病情严重程度急性胰腺炎患者血清cf-DNA/NETs、LDH水平,并分析急性胰腺炎患者血清cf-DNA/NETs、LDH与病情程度的相关性分析。结果研究组cf-DNA/NETs、LDH水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度、中度、重度急性胰腺炎患者血清cf-DNA/NETs、LDH水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。重度急性胰腺炎患者cf-DNA/NETs、LDH水平高于中度、轻度急性胰腺炎患者,中度急性胰腺炎患者cf-DNA/NETs、LDH水平高于轻度急性胰腺炎患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清cf-DNA/NETs、LDH水平与急性胰腺炎患者病情严重程度呈正相关(r>0,P<0.05)。结论血清cf-DNA/NETs、LDH水平在急性胰腺炎患者中高表达,且病情越严重,表达水平越高。

河北省免费NIPT联合PAPP-A、F-β-HCG 及超声检查诊断孕中期胎儿染色体异常的意义

目的 评价河北行免费的无创产前DNA检测(NIPT),联合血清妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)、游离β-人绒毛膜促性腺激素(F-β-HCG)检测及超声对孕中期染色体异常的诊断价值。方法 选取衡水市第二人民医院2019年1月至2023年1月接收的3 591例拟行染色体检测的孕中期妇女,均行免费NIPT联合血清学指标(PAPP-A、F-β-HCG)及超声检查。将羊水穿刺染色体核型分析结果记为金标准,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价不同方法诊断孕中期染色体异常的价值。结果 经随访,在3 591例中,共有39例染色体异常,其中,32例经超声检查有染色体异常,34例经NIPT检测有染色体异常。在3 552例染色体正常的胎儿中,34例经超声检查有染色体异常,36例经NIPT检测有染色体异常;染色体异常胎儿的母体PAPP-A、F-β-HCG水平均高于染色体正常胎儿的母体(P<0.05)。PAPP-A、F-β-HCG共同诊断胎儿染色体异常的敏感度及ROC曲线下方的面积(AUC)均高于母体PAPP-A、F-β-HCG单独诊断(P<0.05);NIPT,PAPP-A、F-β-HCG及超声的联合诊断的敏感度及AUC均高于NIPT,PAPP-A、F-β-HCG,超声的单独诊断(P<0.05),且不同方法诊断染色体异常的特异度对比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 孕中期胎儿染色体异常的母体PAPP-A、F-β-HCG水平高,且NIPT联合PAPP-A、F-β-HCG及超声诊断染色体异常有较好的价值。

血清TFPI-2基因甲基化在胃癌诊断中的临床价值

目的通过测定组织及血清组织因子途径抑制物2(TFPI-2)基因甲基化,探讨其作为一种肿瘤标志物对胃癌诊断的临床价值。方法收集32例胃癌、29例萎缩性胃炎作为研究对象,以30例不排除浅表性胃炎的正常对象作为对照。应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,测定组织及血清TFPI-2基因甲基化状态。应用电化学发光免疫法测定癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)。结果组织TFPI-2基因甲基化检出率胃癌组为53.13%、萎缩性胃炎组为37.93%、对照组为3.33%。胃癌组明显高于对照组(P<0.05)。血清TFPI-2基因甲基化检出率胃癌组为28.13%,萎缩性胃炎组为6.90%,对照组未检出。胃癌组明显高于萎缩性胃炎组(P<0.05)和对照组(P<0.05)。血清TFPI-2基因甲基化检测灵敏度为28.13%,特异性为96.61%。血清检出阳性占组织检出阳性的比率为37.93%。胃癌组血清TFPI-2基因甲基化与性别、年龄、Borrmann's分期、CEA和CA199检测结果无关(P>0.05)。胃癌组血清TFPI-2基因甲基化与CEA、CA199阳性检出率分别为28.13%、21.88%、18.75%。联合3项阳性检出率为53.13%,显著高于3项各自单独检测(P<0.05)。结论血清TFPI-2基因甲基化来源于组织,其对胃癌诊断特异性较高,但灵敏度较差。联合检测血清CEA、CA199有利于提高其灵敏度。血清TFPI-2基因甲基化测定对胃癌的诊断有一定价值。

中国健康人血清游离表皮生长因子受体外显子18-22序列分析

目的分析中国健康人血清游离DNA中表皮生长因子受体（EGFR）外显子18～22基因序列是否存在突变，为监测EGFR酪氨酸激酶选择性抑制剂（EGFR TKIs）的临床疗效提供正常参考数据。方法采用高灵敏度DNA提取方法结合高保真巢式PCR和基因测序技术对42例中国健康人外周血血清游离DNA中EGFR TKIs作用靶点所在结构域即EGFR外显子18-22的基因序列和氨基酸序列进行分析。结果从外周血血清游离DNA中均扩增出EGFR外显子18～22的基因片段，片段大小（分别为400，374，404，408和419bp）与预期设计片段完全相符。健康人外周血游离DNA中存在EGFR基因突变，突变频率出现最多的是EGFR外显子20，41名健康人样本中有7例样本出现1处相同位点的沉默点突变（4838499G→A），其氨基酸序列（Glu）没有发生改变；EGFR外显子18也出现点突变，34名健康人样本中有1名健康者样本出现3处点突变，其中2处点突变（4830989 G→C；4831025 G→C）导致氨基酸序列发生改变（Glu→Gln；Ala-Pro），另外1处点突变（4831000 A→C）为沉默突变，其氨基酸序列（Thr）没有发生变化；EGFR外显子19、外显子21～22没有出现基因突变。结论通过巢式PCR结合基因测序可以分析外周血游离DNA中EGFR基因序列，健康人外周血游离EGFR外显予18和20存在基因点突变，其中外显子18的点突变导致了氨基酸序列改变。

乳腺癌患者外周血清中APC基因启动子甲基化异常的检测及其意义

背景与目的:检测肿瘤患者外周血中肿瘤相关标志物是当前肿瘤研究的热点之一,恶性肿瘤患者外周血中存在游离的肿瘤相关DNA已引起肿瘤学界的极大关注,人们曾在多种肿瘤患者血清中发现与原发肿瘤相同的DNA变异。本研究以APC(adenomatouspolyposiscoli)基因启动子甲基化作为肿瘤标志物,探讨乳腺癌患者外周血清中游离的肿瘤相关DNA与肿瘤组织及临床病理参数的相关性。方法:采用甲基化特异性PCR(methylationspecific-PCR,MSP)方法分别检测84例乳腺癌组织、癌旁正常腺体组织及外周血清中游离DNAAPC基因启动子甲基化状况。结果:84例乳腺癌组织APC基因启动子甲基化频率为45.2%(38/84),相应外周血清中同样DNA变异阳性检出率为31.0%(26/84)。外周血清中DNA甲基化变异与肿瘤组织的甲基化状况显著相关(r=0.977,P0.002)。检测外周血清中APC基因甲基化的敏感性为68.4%,特异性为97.8%肿瘤组织及外周血清中游离DNA甲基化异常与临床分期、病理类型、肿块大小及受体状况无相关性(P>0.05)。肿瘤组织未检测到甲基化患者的血清中及健康人血清中均未检测到该基因甲基化变异。结论:乳腺癌患者外周血清中肿瘤相关DNA甲基化与肿瘤组织中相同基因的变异显著相关。

唐氏筛查临界风险的非高龄孕妇有必要行无创性产前检测：6804例结果分析

目的探讨无创性产前基因检测技术对血清学筛查阳性的非高龄孕妇血浆胎儿游离DNA进行染色体非整倍体检测的有效性。方法选择2011年10月~2018年6月于佛山市妇幼保健院行无创性产前基因检测的6804例非高龄孕妇(预产期年龄<35岁)为研究对象,孕周:12~24周,预产期年龄:21~34岁,均为单胎。按照血清学指标分为高风险组和临界风险组,血清学筛查高风险组3763例(21三体风险值≥1/270或18三体风险值≥1/350),临界风险组3041例(1/1000≤21三体风险值<1/270或1/1000≤18三体风险值<1/350)。对无创性产前基因检测结果阳性的孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺,行常规染色体核型分析和/或高通量测序检测。对所有检测孕妇行电话随访,并统计分析无创性产前基因检测的准确性在两组差别有无统计学意义。结果6801例成功完成无创性产前基因检测,3例样本由于血浆游离DNA浓度过低检测失败。3761例血清学筛查高风险组中产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共70例,其中53例行进一步产前诊断,结果显示高风险组无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为95.65%,特异度99.91%,阳性预测值88.0%,假阳性率0.09%,假阴性率4.35%;对18三体检测的灵敏度100%,特异度100%,阳性预测值100%,假阳性率0,假阴性率0。对13三体检测的假阳性率0.09%,假阴性率0;对性染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.80%,阳性预测值30.0%,假阳性率0.2%,假阴性率0;对其他染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.88%,阳性预测值16.60%,假阳性率0.18%,假阴性率0。3040例血清学筛查临界风险组产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共54例,其中的36例行进一步产前诊断,结果显示临界风险组孕妇无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为100%,特异度100%,阳性预测值100%,假阳性率0,假阴性率0;对18三体检测的假阳性率0.11%,假阴性率0。13三体检测的假阳性率0.04%,假阴性率0;对性染色体异常检测的灵敏度100%,特异度99.79%,阳性预测值50%,假阳性率0.21%,假阴性率0;对其他染色体异常检测的假阳性率0.18%,假阴性率0。高风险组和临界风险组对21三体和性染色体非整倍体检测敏感度、特异度,假阳性率,阳性预测值差别均无统计学意义(P>0.05)。结论唐氏筛查高风险但拒绝产前诊断和临界风险的非高龄孕妇很有必要进一步行无创性产前检测。该技术检测胎儿染色体非整倍体具有高敏感度和特异度,假阳性率和假阴性率很低。

胃癌患者血清抑癌基因启动子超甲基化测定的临床意义

目的探讨胃癌患者血清中抑癌基因超甲基化检测的临床意义。方法随机收集2011～2013年上海市静安区中心医院进行胃镜检查的患者,32例胃癌患者为胃癌组,29例萎缩性胃炎为萎缩性胃炎组和30例健康者为健康对照组。应用甲基化特异性PCR（MSP）方法,测定血清Ras相关区域家族基因1a（RASSFA1）基因、人类相关转录因子3（Runx3）基因、错配修复蛋白MutL同源物1（hmLH1）基因、多肿瘤抑制基因1（MTS1）也称P16基因、上皮E钙粘蛋白（E-Cadherin）基因、组织因子途径抑制物2（TFPI-2）基因启动子甲基化状态。结果胃癌组血清RASSF1A、RUNX3、hmLH1、P16、E-Cadherin、TFPI-2基因超甲基化阳性率分别为21.9%,40.6%,21.9%,34.4%,28.1%,28.1%;萎缩性胃炎组分别为3.5%,13.8%,0.0%,6.9%,3.5%,6.9%;对照组仅检出RUNX3基因启动子甲基化,阳性率3.5%;胃癌组血清6种基因启动子甲基化阳性率均明显高于萎缩性胃炎组和健康对照组（P〈0.05）。联合血清中6种基因启动子甲基化对胃癌诊断灵敏度为76.7%,较单独一个基因明显升高（P〈0.05）;特异性为86.5%,与RUNX3基因比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,与其他5个基因单独测定特异性降低（P〈0.05）。结论 MSP检测能检测到血清中RASSF1A、RUNX3、hmLH1、P16、E-Cadherin、TFPI-2基因启动子超甲基化。6个基因启动子联合测定对胃癌诊断的灵敏度更高,可为胃癌的诊断、治疗以及判断预后提供新方法或依据。

山东潍坊地区29例性染色体异常的产前筛查与诊断

目的探讨孕妇血浆游离DNA高通量测序对性染色体异常检出的效果及可行性,并分析母体血清学筛查、胎儿超声筛查和孕妇高龄对胎儿性染色体异常筛检的临床价值。方法对具有产前诊断指征的7 521例单胎孕妇进行游离DNA高通量测序或羊水细胞核型进行分析。结果应用血浆游离DNA高通量测序方法筛查出性染色体异常42例,其中29例与核型分析结果一致,阳性预测值为69.05%;在29例胎儿性染色体异常孕妇中,血清学筛查异常21例,超声指标异常10例,高龄妊娠12例。结论孕妇血浆游离DNA高通量测序可用于胎儿性染色体非整倍体异常的检测,阳性预测值偏低;以母体血清学筛查、B超筛查和高龄为产前诊断指征,对胎儿性染色体异常的检出具有一定价值。

细支气管肺泡癌的分子生物学研究

目的细支气管肺泡癌(BAC)发病率呈明显上升趋势,靶向药物已成为BAC治疗热点。本文探索BAC分子生物学特点,包括EGFR-TK结构域的突变、EGFR和HER2的基因拷贝数和蛋白表达,以便探讨它们与BAC的治疗反应及预后关系。方法采用PCR和DNA测序法检测中国人BAC石蜡包埋组织标本EGFR基因突变情况;EGFR试剂盒检测BAC患者外周血EGFR基因突变;荧光原位杂交法(FISH)及免疫组织化学法(IHC)分别检测组织标本中癌细胞的EGFR和HER2基因拷贝数和蛋白表达。结果 BAC组织标本中EGFR基因突变率50%(16/32),其中主要为L858R(50%)及外显子19缺失突变(43.8%)。EGFR基因拷贝数增加的阳性率41.2%(14/34)。EGFR蛋白表达阳性率76.5%(26/34)。HER2基因拷贝数增加/基因扩增阳性率5.7%(2/35)及蛋白表达阳性率6.1%(2/34),其中2例均为EGFR/HER2共表达。8例外周血EGFR检测有5例(62.5%)EGFR基因突变。研究显示仅EGFR基因拷贝数与EGFR基因突变率有非常显著的相关性(P=0.001)。与性别、吸烟情况、BAC病理亚型、EGFR蛋白表达没有显著相关性。结论 BAC具有较高的EGFR基因突变率、EGFR基因拷贝数增加的阳性率和蛋白表达阳性率。少数可能具有EGFR/HER2的共表达。鉴于EGFR突变阳性率高,测定方法便捷,因此是BAC靶向治疗依据的主要检测目标。外周血游离DNA中的EGFR突变检测值得进一步探讨。

乳腺癌患者血清中p16基因甲基化状态的研究

目的选取p16基因启动子甲基化这一指标来探讨乳腺癌患者外周血清中游离的肿瘤相关DNA与肿瘤组织及临床病理参数的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测82例乳腺癌患者组织及其配对血清中游离DNAp16基因启动子区域甲基化状况。结果 82例乳腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率为30.5%(25/82),相应外周血清中p16基因启动子甲基化阳性率为19.5%(16/82)。25例呈现甲基化阳性的癌组织中有16例其配对血清中也监测到DNA甲基化阳性,而82例乳腺癌组织中甲基化阴性的57例患者、30例乳腺良性病变患者以及24例健康人,其外周血清均为p16基因启动子甲基化阴性。外周血清中p16基因启动子区域甲基化异常与乳腺癌组织中的甲基化状况显著相关(r=0.7435,P<0.05)。乳腺癌组织及外周血清中p16基因启动子区域甲基化状态与肿瘤分期、肿块的大小、病理类型、月经状况、淋巴结转移、激素受体、家族史无关。结论乳腺癌患者外周血清中p16基因启动子甲基化与肿瘤组织中相同基因的变异显著相关,可用血清替代癌组织检测p16基因启动子区域甲基化状态。

孕妇血浆胎儿游离DNA检测对胎儿染色体拷贝数异常的诊断意义

目的探讨应用孕妇血浆胎儿游离DNA高通量基因测序技术检测胎儿染色体拷贝数的准确性和实际临床可行性。方法选择需做产前诊断的153名孕妇，采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA，分析胎儿染色体拷贝数；同时行羊膜腔穿刺进行胎儿染色体核型分析。结果153名孕妇中，母体血浆游离DNA平行测序技术共检测出6例染色体异常高风险胎儿。羊水分析证实6例均为染色体异常，其中非整倍体5例，分别为47，XYY；45，X；47，XY，＋18；47，XY，＋21以及47，XY，＋13；染色体结构异常1例，核型为46，XY，der（13；21）（q10；q10），＋21。另检出染色体多态性3例（1例46，XY，21p＋；2例46，XY，Yqh-）。两种方法检测胎儿染色体拷贝数异常结果一致。结论母体血浆游离DNA高通量测序分析可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测，具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景。

脑卒中血清游离DNA及脑源性神经营养因子水平变化及临床意义

为评估血清游离DNA及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在脑卒中患者诊断中的临床价值,本研究收集131例脑卒中患者及50例健康体检者的外周血标本,提取血浆游离DNA,用SYBR Green染料实时荧光PCR方法检测血清游离DNA含量;采用酶联免疫吸附法检测血清BDNF含量,并检测血清同型半胱氨酸(Hcy)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)。结果显示血清游离DNA、BDNF、Hcy、hs-CRP在脑梗死、脑出血患者及健康对照组三组间比较差异均有统计学意义(H分别为77.939,49.443,13.724,30.943;p<0.001)。脑梗死患者游离DNA、Hcy、hs-CRP含量均高于健康对照组,差异均具有统计学意义(U分别为7.892,3.576,5.204;p<0.05);脑出血患者DNA、Hcy、hs-CRP含量均高于健康对照组,差异均具有统计学意义(U分别为7.446,2.664,4.357;p<0.001)。脑梗死及脑出血患者血清BDNF含量均低于健康对照组,差异具有统计学意义(U分别为-6.393,-5.794;p<0.001)。脑梗死及脑出血患者两组间血清游离DNA、BDNF、Hcy、hs-CRP含量差异均无统计学意义(U分别为-1.483,0.936,0.119,-0.362;p<0.05)。血清BDNF与脑卒中患者的年龄有关,其含量随患者年龄的增加而降低。血清游离DNA及BDNF在脑卒中患者的诊断中具有潜在的临床应用价值,其或可成为脑卒中诊断的有用指标。

脑胶质瘤患者血清及脑脊液中游离DNA的检测

目的检测不同级别脑胶质瘤患者血清及脑脊液中游离DNA的含量及完整性，探讨其对脑胶质瘤的诊断及预后判断的意义。方法术前采集70例脑胶质瘤患者和22例健康对照的外周血；其中30例胶质瘤患者同时采集脑脊液。通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT—qPCR）方法检测血清及脑脊液中游离DNA短串联重复序列（ALU）的长片段（247bp）与短片段（115bp）的含量以及DNA完整性。结果血清中ALU-247bp与115bp含量以及游离DNA完整性在胶质瘤组与对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。脑脊液中游离DNAALU-247bp与115bp含量均较非肿瘤对照组高，DNA完整性（ALU．247／ALU-115bp）较对照组也显著增高。ROC曲线分析ALU．247bp，ALU-115bp含量与DNA完整性的AUC分别为0．775、0．875和0．912。结论胶质瘤患者术前脑脊液中游离DNAALU-247bp、ALU-115bp的含量以及DNA完整性对胶质瘤的术前诊断具有一定价值。