利用Bac-to-Bac系统表达棉蚜的乙酰胆碱酯酶

Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统是一种高效真核表达系统。采用重组DNA技术构建棉蚜乙酰胆碱酯酶1（AChE1）表达质粒，应用该系统在昆虫Sf9细胞系中成功表达了棉蚜的AChE1。表达的AChE以可溶性形式释放于细胞培养液中，对其自然底物类似物ATCh1的Km值为（144．5±28．6）μm；对抗蚜威、唑蚜威、氧化乐果和灭赐松等4种杀虫剂的敏感性指数（Ki值）分别为513、l883、5和23（mM·min）^-1，与文献报道的测定结果基本一致。昆虫细胞被重组病毒感染后第2-3天所得产物的活性最高；该产物在-20℃保存90d后活性没有明显下降，4℃保存60d后下降40％，室温（22℃）保存7d后即下降70％。