参元丹干预氧化三甲胺诱导人脐静脉内皮细胞损伤的机制研究

目的:探讨参元丹对氧化三甲胺(TMAO)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的干预作用及机制。方法:建立TMAO诱导的HUVEC细胞损伤模型,将HUVEC分为正常对照组、模型组(300μmol/L TMAO)、参元丹低剂量组(300μmol/L TMAO+25μg/mL参元丹)、参元丹中剂量组(300μmol/L TMAO+50μg/mL参元丹)、参元丹高剂量组(300μmol/L TMAO+100μg/mL参元丹)。分别检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-1β含量。结果:TMAO可诱导HUVEC发生氧化应激反应及炎症反应,参元丹可降低TMAO损伤细胞内ROS、MDA水平(P<0.05),同时抑制IL-1β的表达水平(P<0.05)。结论:参元丹可能通过抑制氧化应激反应及炎症反应,减轻TMAO诱导的内皮细胞损伤。

参元丹胶囊对气虚血瘀型斑马鱼的治疗作用

目的:探讨参元丹胶囊对气虚血瘀型斑马鱼的干预作用。方法:采用无水亚硫酸钠和异丙肾上腺素盐酸盐溶液处理受精后第4天野生型AB品系斑马鱼,建立气虚血瘀斑马鱼模型,评价参元丹胶囊对其的治疗作用。实验设正常对照组、模型对照组、脑心通胶囊对照组、参元丹胶囊低、中、高剂量组。通过测定斑马鱼总运动距离、斑马鱼体内腺苷三磷酸(ATP)含量、乳酸含量、心脏血流速度、心输出量以及对心肌细胞凋亡程度,评价参元丹胶囊对气虚血瘀型斑马鱼的改善作用。结果:与正常对照组比较,模型组斑马鱼总运动距离、ATP含量、血流速度、心输出量均显著降低,体内乳酸含量和心肌细胞凋亡程度均显著提高(均P<0.05),与模型组比较,参元丹胶囊组斑马鱼运动距离、体内ATP含量、心输出量及血流速度均显著增加,体内乳酸含量、心肌细胞凋亡程度均显著降低(均P<0.05)。结论:参元丹胶囊对于气虚血瘀模型斑马鱼具有较好的治疗作用。

参元丹对大鼠心肌缺血预适应心肌梗死面积及一氧化氮合酶、蛋白激酶C的影响

目的通过检测大鼠缺血心肌梗死面积的大小、血清一氧化氮合酶(NOS)变化、蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制。方法选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只,雌雄各半,体重(274±42)g,鼠龄4月左右,随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组、药物预处理+缺血预适应组、药物预处理组,每组10只。分别造模、取血、取心肌组织。将心肌组织浸入10%甲醛溶液中固定,脱水,封蜡,切片,染色。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。将所取血液离心后取血清,用紫外分光光度法检测血清总NOS的活力和分NOS的活力。应用蛋白激酶C(PKC)免疫组化试剂盒对组织切片进行处理,20倍镜下观察PKC表达情况。结果参元丹能减少大鼠的心肌梗死面积,并与缺血预适应有协同作用,能够加强彼此的抗心肌缺血的能力。各组间血清NOS的变化差异无统计学意义(P>0.05)。缺血预处理组、药物预处理+缺血预适应组和药物预处理组的PKC有明显表达,其余各组没有表达。结论参元丹能够减少心肌梗死的面积,具有药理性预适应样心肌保护作用,其作用机制可能与PKC介导有关。

参元丹胶囊对动脉内皮损伤大鼠血管内膜增生的影响研究

目的观察参元丹胶囊对动脉内皮损伤大鼠动脉内皮损伤后内膜增生的影响。方法应用导管拉伤加高渗液损伤的方法建立大鼠主动脉内皮损伤模型,检测中药参元丹胶囊后大鼠动脉内皮内膜的增生情况。结果经导管拉伤加高渗液损伤后,动脉内膜被覆单层内皮细胞,内膜不规则增厚,血管平滑肌增生。经参元丹治疗后动脉内皮损伤后血管内膜过度增生得到抑制。结论参元丹对血管内皮功能具有一定的保护作用。

参元丹与通心络胶囊治疗不稳定型心绞痛血瘀证对比研究

目的探讨参元丹胶囊治疗不稳定型心绞痛的疗效特点与安全性。方法将66例患者采用随机单盲对照法分为两组,治疗组31例予参元丹胶囊,对照组29例予通心络胶囊;4周为1疗程。结果根据心绞痛、心电图、症状改善的结果综合评定,参元丹胶囊治疗组总有效率90.32%,通心络对照组总有效率为89.66%,两组差异无显著性。结论参元丹胶囊对气虚血瘀证有较好疗效;且中医证候积分的改善优于通心络对照组,综合疗效与对照组相当。

益气逐瘀方对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响

目的研究益气逐瘀方(参元丹)对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响。方法分离并培养乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型,Lipofectamine2000转染miR-24 mimic/inhibitor至心肌细胞,实验分为正常组、缺氧组、参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组,治疗组予参元丹含药血清干预。比色法检测心肌细胞培养基上清液LDH、CPK活性,MTT法检测心肌细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡,qRT-PCR检测心肌细胞miR-24、Bim mRNA表达。结果与低氧组相比,参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组均能显著降低细胞培养基上清液LDH、CPK活性(P<0.05),提高心肌细胞存活率(P<0.05),降低心肌细胞凋亡(P<0.05),升高心肌细胞miR-24 mRNA表达(P<0.05),降低Bim mRNA表达(P<0.05);治疗组之间比较,参元丹+miR-24 mimic组作用更显著(P<0.05)。结论益气逐瘀方参元丹能够减轻缺氧诱导乳鼠心肌细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与其上调miR-24表达,同时抑制其靶基因Bim mRNA表达有关。

参元丹胶囊对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及胰岛素抵抗标志蛋白GLUT-4的影响

目的参元丹胶囊对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠主动脉斑块的干预作用及胰岛素抵抗标志蛋白葡萄糖转运蛋白-4(glucose transport protein-4,GLUT-4)的影响。方法将50只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠西方类型膳食喂养6周后随机分为模型组、立普妥(阳性对照组)、参元丹高剂量组、中剂量组和低剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周。检测其血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血清游离脂肪酸、空腹血糖和空腹血清胰岛素水平。行苏木素-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE),图像分析测量小鼠主动脉AS斑块面积。免疫组化法检测各组小鼠主动AS斑块内GLUT-4的表达。结果与模型组相比,参元丹胶囊中剂量组小鼠血清TC水平明显降低(P<0.01)、参元丹胶囊中、低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P<0.05)、参元丹胶囊3个剂量组LDL-C水平明显降低(P<0.05,),参元丹胶囊中、低剂量组HDL-C水平明显升高(P<0.05),参元丹胶囊3个剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P<0.05),高、中、低剂量组小鼠血清游离脂肪酸浓度显著降低(P<0.05)。参元丹胶囊3个剂量组小鼠空腹血糖水平无显著差异(P>0.05),血清胰岛素水平显著降低(P<0.05),中剂量组胰岛素抵抗指数显著降低(P<0.01)。与模型组相比,参元丹胶囊中、高剂量组小鼠主动脉斑块内GLUT-4表达显著升高(P<0.05)。结论参元丹胶囊可能通过调控GLUT-4表达改善胰岛素抵抗,从而达到抗AS的作用。

益气逐瘀方对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及miR-24基因表达的影响

目的观察益气逐瘀方参元丹对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及缺血心肌组织miR-24基因表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、参元丹高剂量组(H-SYD组)、参元丹中剂量组(MSYD组)、参元丹低剂量组(L-SYD组),每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,H-SYD组、M-SYD组、L-SYD组从术后第2天开始参元丹药液灌胃,Sham组和Model组等剂量生理盐水灌胃,共给药2周。治疗结束时,观察各组大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及缺血心肌组织miR-24基因表达情况。结果与Model组比较,H-SYD组、M-SYD组及L-SYD组均能显著降低血清CK、LDH水平(P<0.05,P<0.01),H-SYD组、M-SYD组能够显著升高缺血心肌组织miR-24表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤,其作用机制可能与上调缺血心肌组织miR-24基因表达有关。

参元丹胶囊干预气虚血瘀证缺血性心力衰竭的随机、对照临床研究

目的评价参元丹胶囊干预气虚血瘀证缺血性心力衰竭(IHF)的临床疗效。方法选取2020年2月—2020年12月期间于首都医科大学附属北京中医医院心血管科就诊的气虚血瘀证IHF患者66例(研究过程中有5例患者脱落)。采用随机、双盲、安慰剂对照的研究方法,随机分为参元丹组29例和安慰剂组32例,两组患者在规范化治疗基础上分别加用参元丹或安慰剂,两组患者均连续服药30 d。观察记录两组患者治疗前后中医证候积分及疗效指数、血清脑钠肽(B-type Natriureticeptide,BNP)水平及治疗前后BNP下降幅度、超声心动参数[左室射血分数(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF)、左室舒张末径(Left Ventricular End-diastolic Ddiameter,LVEDD)]以及治疗30 d后药物应用不良反应及心血管事件(Major Adverse Cardiovascular Events,MACE)发生情况。结果治疗后两组患者BNP水平较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05);且参元丹组治疗后BNP水平明显低于安慰剂组,参元丹组BNP下降幅度明显大于安慰剂组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者LVEF水平较治疗前提升,LVEDD水平较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后LVEF、LVEDD水平及其LVEF上升幅度、LVEDD下降幅度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。参元丹组及安慰剂组患者在治疗30 d后,均无患者死亡情况发生。安慰剂组有2例患者出现心衰加重再住院,两组患者MACE事件发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患者中医证候积分水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);且参元丹组治疗后中医证候积分明显低于安慰剂组,疗效指数明显高于安慰剂组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参元丹具有改善气虚血瘀证IHF患者心功能的潜在作用。

参元丹晚期药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌PKC及HSP70的影响

目的应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白(HSP70)表达,探讨参元丹(SYD)的晚期药理性预适应作用及其机制。方法选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只。随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、晚期假性缺血预处理组、晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组。每组10只。分别造模,取血、心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,彩色病理图像分析心肌梗死面积。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果彩色病理图像分析,SYD能够代替心绞痛缺血、缺氧刺激,减小心肌梗死面积,具有晚期药理性预适应的心脏保护作用。晚期假性缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组无PKC的表达,提示PKC未参与晚期缺血预适应的细胞内信号转导。晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组均有HSP70大量表达,晚期药物预处理组亦有HSP70表达,提示晚期缺血预处理的心肌保护作用机制与HSP70有关,SYD具有独立的晚期药理预适应作用,晚期药物预处理组+缺血预处理组的HSP70表达有SYD作用存在;SYD的心肌保护作用机制与HSP70有关。结论SYD具有晚期药理预适应样心肌保护作用;SYD晚期预适应心肌保护作用的机制可能与HSP70的介导有关;SYD晚期预适应可能与缺血预适应协同发挥心肌保护作用。

参元益气活血胶囊对普纳替尼诱导的斑马鱼脑血栓的治疗作用

目的研究参元益气活血胶囊(以下简称“参元丹胶囊”)对普纳替尼诱导的斑马鱼脑血栓的治疗作用。方法斑马鱼共720尾,分四批进行实验,每批选取180尾置于六孔板中,每孔30尾,分为6组:正常对照组,模型组,阳性对照组,参元丹胶囊低、中、高剂量组,分别给予养鱼用水、普纳替尼、普纳替尼同时水溶给予阿司匹林(50μg/ml)或55.6、167.0、500.0μg/ml参元丹胶囊,处理18 h后,统计形成脑血栓的斑马鱼数目;行为分析仪测定斑马鱼运动速度;心跳血流分析软件录制斑马鱼血流视频,分析斑马鱼血流速度;吖啶橙法染色分析斑马鱼脑部细胞凋亡数。结果与模型组比较,参元丹胶囊低、中、高剂量组斑马鱼脑血栓发生率明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01);参元丹胶囊低、中、高剂量组斑马鱼运动速度明显提高,差异有高度统计学意义(P<0.01);参元丹胶囊中、高剂量组斑马鱼血流速度明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.01);参元丹胶囊高剂量组斑马鱼脑部细胞凋亡数明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论参元丹胶囊对普纳替尼诱导的斑马鱼脑血栓发生率和运动速度具有明显改善作用,其机制可能与抑制斑马鱼脑部细胞凋亡有关。

参元丹优化方对动脉粥样硬化小鼠胰岛素抵抗及血清血栓素A2/前列环素比值和DNA甲基化水平的影响

目的观察参元丹优化方对高脂喂养Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)胰岛素抵抗及血清血栓素A2(TXA2)/前列环素(PGI2)比值和DNA甲基化(5-m C)水平的影响,探讨其相关作用机制。方法 40只8周龄雄性Apo E-/-小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、立普妥组、参元丹原方组和参元丹优化方组,各给药组给予相应药物干预6周。检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素、TXA2、PGI2、DNA甲基化转移酶(DNMT1)和5-m C水平。HE染色,图像分析测量小鼠主动脉AS斑块面积。结果与模型组比较,参元丹原方组和参元丹优化方组小鼠血清TC和TG水平明显降低,HDL-C水平明显升高(P<0.01),AS指数明显降低,校正后主动脉AS斑块面积显著降低(P<0.05),参元丹优化方组小鼠血清5-m C、DNMT1、胰岛素水平及TXA2/PGI2比值显著降低(P<0.05),参元丹优化方组优于参元丹原方组(P<0.01)。结论参元丹优化方降低血清胰岛素、5-m C水平和TXA2/PGI2比值均优于原方,改善血脂和AS效果与原方相当。

参元丹药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌梗死面积、蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白70(HSP70)表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制。方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为6组,分别造模、取血、取心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果:彩色病理图像分析参元丹能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用。PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达。缺血预处理组和药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC大量的表达,药物预处理组大鼠心肌组织的PKC表达充分,提示PKC在参元丹的药理性预适应样心肌保护过程中起作用。HSP70的表达情况:对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达,药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,提示HSP70的表达与参元丹的作用相关。结论:参元丹具有药理预适应样作用;参元丹预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关。