肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平与牙周临床指标和炎性因子的相关性研究

目的探讨不同病情严重程度慢性牙周炎患者龈沟液乳铁蛋白(LF)、音猬因子(Shh)蛋白、髓样细胞触发受体-1(TREM-1)水平变化,并分析其与牙周临床指标和炎性因子的相关性。方法选择该院2021年1-12月收治的慢性牙周炎患者104例作为研究组,根据病情严重程度分为轻度组38例、中度组44例、重度组22例,另选取同期在该院进行口腔检查的健康志愿者30例作为对照组,比较研究组与对照组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平,对比不同病情严重程度的慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1、牙周临床指标及龈沟液炎性因子水平,并分析其相关性。结果研究组患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平显著高于对照组(P<0.05)。重度组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17水平及探诊深度(PD)、附着丧失(AL)、出血指数(BI)、牙龈指数(GI)显著高于中度组、轻度组(P<0.05);中度组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1、TNF-α、IL-6、IL-17水平及PD、AL、BI、GI显著高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平与PD、AL、BI、GI及龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平均呈正相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平与牙周临床指标和炎性因子呈正相关,检测龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1可以辅助评估慢性牙周炎的病情。

龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与重度牙周炎患者治疗后预后的关系

目的研究龈沟液Shh蛋白、dickkopf相关蛋白1(DKK1)、人类软骨糖蛋白-39(HC-gp39)与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的关系。方法选取2019年1月至2022年1月核工业二一五医院收治的120例前牙区重度牙周炎患者作为研究对象。牙周基础治疗90 d后,将患者按照治疗后PD的差异分为预后不良组和预后良好组,比较两组患者龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平以及基线资料。通过多因素Logistic回归分析前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的效能。结果预后不良组龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平均高于预后良好组(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现:有吸烟史、治疗前PD>7.60 mm、治疗前临床附着丧失(CAL)>7.00 mm、Shh蛋白>4.00μg/L、DKK1>9.00μg/L及HC-gp39>60.00 ng/mL均是前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的危险因素(P<0.05)。龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39单项检测及3项联合检测预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.783、0.721、0.845,3项联合检测预测的效能优于单项检测。结论龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后的预后不良密切相关,可作为临床辅助判断患者预后的生物学指标。

Shh在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用

目的：研究SonicHedgehog（Shh）在雷奈酸锶（strontiumranelate，Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化中的作用。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化、培养大鼠BMSCs，取第3-5代BM．SCs加入成骨诱导液诱导成骨分化，再加入不同浓度sr及Shh拮抗剂cyclopamine（Cy），分别观察它们对BMSCs向成骨细胞分化的影响。酶标法检测成骨细胞分化早期标志物碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）的活性；茜素红染色检测细胞钙化水平；Westernblotting法检测Shh和Runx2蛋白的表达情况。结果：Sr（3mmol／L）可以使细胞ALP活性增高，钙结节形成增加。Sr（0．1-5mmol／L）作用BMSCs7d，可明显促进Shh和Runx2蛋白的表达，且Shh蛋白在1mmol／LSr作用时表达最多，而Runx2在3mmol／LSr作用时表达最多。1mmol／LSr作用BMSCs不同时间（1、3、5、7d），呈时间依赖性地上调Shh和Runx2蛋白的表达。cy（10Iμmol／L）不仅拮抗sr对Shh和Runx2表达的上调作用，还抑制sr对ALP和钙结节形成的促进作用。结论：sr可通过上调Shh蛋白及成骨特异性转录因子Runx2的表达促进BMSCs向成骨细胞分化。

人Shh基因重组过表达慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体，转染293T细胞，建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeI酶切位点，使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列，对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeI内切酶消化后目的片段交换连接人pGC-FU载体，构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后，将质粒pGC-Fu-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞，荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果，重组质粒pGC-Fu-Shh的测序，Westernblotting验证Shh在转染293T细胞中表达。结果转染293T细胞后荧光显微镜，24h后观察到绿色荧光蛋白的表达，基本判断Shh表达，说明转染成功。重组质粒pGC-FU-Shh的测序Shh基因片段大小1386bp。通过Westernblotting检测转染293T的样品，可以观察到72～95KDa处条特征带与Sbh融合蛋白相吻合，判断Shh表达。通过PCR扩增获得了Shh基因，将Shh克隆到慢病毒转移质粒pC-C-FU中，并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒。结论成功构建了pGC-FU-Shh-GFP慢病毒过表达载体，获得了稳定转染的细胞株。

鼻咽癌组织中Shh与微血管密度的表达及其和肿瘤转移的关系

目的分析鼻咽癌组织中Shh蛋白的表达以及与微血管密度分布的关系,探讨其与肿瘤淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化Elivision PIus二步法,检测50例鼻咽癌和26例炎性鼻咽部黏膜组织间质微血管密度(micro vascular density,MVD)的分布,并检测Shh的表达。结果 1Shh在鼻咽癌组织中较鼻咽慢性炎症组织明显呈高表达(P<0.05);2鼻咽癌中Shh阳性组MVD均值26.441±6.239,高于Shh阴性组15.667±4.899,两者之间差异有显著性(P<0.01);肿瘤细胞Shh表达与MVD相关,即MVD值随着Shh表达而增高;3鼻咽癌组织中Shh蛋白表达率与MVD均与临床分期,颈淋巴结转移有密切关系(P<0.05)。结论 Shh可能促进鼻咽癌间质血管生成,促进肿瘤的侵袭和转移,Shh和MVD有可能成为判定鼻咽癌生物学行为和预后的重要指标。

Shh蛋白与慢性牙周炎炎症程度的相关性研究

目的:探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路中Shh蛋白与慢性牙周炎炎症程度的相关性。方法:选择健康对照20例(健康对照组),轻度牙周炎患者20例(轻度牙周炎组),中重度牙周炎患者20例(中重度牙周炎组),收集其龈沟液样本。采用ELISA法检测龈沟液中Shh蛋白、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)的水平。结果:Shh蛋白、IL-6在慢性牙周炎组的水平均高于健康对照组(P<0.05),且中重度慢性牙周炎组高于轻度慢性牙周炎组(P<0.05);IL-10在轻度慢性牙周炎组的水平高于健康对照组及中重度慢性牙周炎组(P<0.05),且健康对照组高于中重度慢性牙周炎组(P<0.05);Shh蛋白、IL-6水平与出血指数(BI)、探诊深度(PD)均呈正相关(P<0.05)。结论:Shh信号通路可能参与了慢性牙周炎的炎症反应过程。

Shh和Gli1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探讨hedgehog信号通路Shh蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化S-P法分别检测83例子宫颈鳞状细胞癌(SCC)、39例子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和23例正常宫颈组织(NC)中Shh和Gli1蛋白的表达。结果 Shh和Gli1蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌组织的表达呈逐渐上升趋势,3组比较有统计学差异(P<0.01)。Shh和Gli1蛋白表达率与病理分化程度和临床分期有密切关系,且有淋巴结转移的宫颈癌组织的表达率显著高于无淋巴结转移组(P均<0.01)。Shh和Gli1蛋白在宫颈癌中的表达呈正相关(P<0.01)。结论在宫颈癌中Shh蛋白高度表达上调下游转录因子Gli1蛋白,Hh信号通路的激活可能在宫颈癌的发生过程中其重要作用。

Shh和Gli1蛋白在大鼠肝细胞癌中的表达研究

目的探讨在SD大鼠肝细胞癌中Shh和Gli1蛋白的表达及其意义。方法取体质量为170～200g雄性SD大鼠30只,随机分为实验组(20只)和对照组(10只),实验组采用0.01%二乙基亚硝胺(DEN)自由喂养16周,对照组常规标准喂养,诱导大鼠肝细胞癌成功后,应用免疫组化检测肝癌组织和正常肝组织中Shh和Gli1表达情况。结果免疫组化检测实验组肝癌组织中Shh和Gli1的阳性表达率分别为87.5%(14/16)和75.0%(12/16),对照组肝组织中检测Shh和Gli1的阳性表达率分别为30.0%(3/10)和20.0%(2/10);两种蛋白质在肝癌组织中的表达与正常组织中的表达比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在人工诱导的SD大鼠肝癌模型中,Hedgehog信号通路处于激活状态。

慢病毒介导Shh基因转染对甲状腺乳头状癌细胞生物学性状的影响

目的将Shh基因用慢病毒载体转染甲状腺乳头状癌(PTC)原代细胞中,观察Shh对PTC细胞体外生物学性状的影响。方法在建立慢病毒载体pGC-FU-Shh-GFP转染PTC细胞,稳定过表达Shh蛋白模型基础上,设立转染实验组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测细胞迁移能力,检测Sonic hedgehog通路相关基因mRNA与蛋白表达变化,与阴性对照组检测结果进行比较。结果高表达Shh细胞生长曲线较陡直,生长速度较阴性对照组显著提高(P<0.05);Shh-PTC细胞24h后S期上升至20.88%,Shh-PTC细胞48h后G1期上升至83.78%;实验组穿透滤过膜细胞数量明显增加(P<0.05)。转染后SMO、Gli1、PTCH蛋白的表达均高于对照组,表达量分别是对照组的1.154倍,1.062倍和1.205倍。结论 Shh明显促进PTC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。在PTC的发生、发展中Sonic hedgehog通路激活是激发或促进因素,该信号通路可能促进PTC的生长、转移。

基因芯片技术检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响

目的探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响。方法建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证。给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达。应用ATP试剂盒检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织ATP活性的变化。结果与对照组相比,基因芯片筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织中差异表达microRNA 17个,其中表达上调8个,表达下调9个。进一步筛选出microRNA-210,运用q-PCR技术验证其在脑梗死后脑皮质组织中表达上调(P<0.05)。与脑梗死组相比较,经Shh蛋白干预后小鼠皮质组织microRNA-210表达上调(P<0.05)与对照组相比,脑梗死组ATP含量下降,Shh蛋白干预后,ATP含量有所上升(P<0.05)。结论Shh蛋白可能通过上调microRNA-210逆转能量生成障碍对脑梗死发挥治疗作用。

Shh/Gli1信号通路在异氟醚后处理减轻大鼠脑缺血-再灌注损伤中的作用

目的评价Shh/Gli1信号通路在异氟醚后处理减轻大鼠脑缺血-再灌注损伤中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠44只,6~8周龄,体重220~280 g,采用随机数字表法将其分为四组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、缺血-再灌注+异氟醚后处理组(ISO组)和环巴胺+缺血-再灌注+异氟醚后处理组(CYC组),每组11只。采用线栓法栓塞大脑中动脉90 min、再灌注24 h制备脑缺血-再灌注损伤模型。ISO组大鼠在再灌注即刻吸入1.5%异氟醚。CYC组大鼠在缺血前30 min腹腔注射Shh/Gli1信号通路特异性抑制剂环巴胺10 mg/kg。再灌注24 h后,所有大鼠进行神经行为学评分,采用TTC法测定脑梗死体积,HE染色和尼氏染色观察病理学改变,TUNEL染色观察海马CA1区细胞凋亡,免疫荧光和Western blot法测定Shh和Gli1蛋白含量。结果与S组比较,IR组、ISO组和CYC组大鼠神经行为学评分明显升高,脑梗死体积明显增大,坏死和凋亡细胞明显增多,组织病理学损伤严重,Shh和Gli1蛋白含量明显增加(P<0.05)。与IR组比较,ISO组神经行为学评分和脑梗死体积明显降低,坏死和凋亡明显减少,组织病理学损伤明显减轻,Shh和Gli1蛋白含量明显增加(P<0.05)。与ISO组比较,CYC组神经行为学评分明显升高,脑梗死体积明显增大,坏死和凋亡细胞明显增多,组织病理学损伤明显加重,Shh和Gli1蛋白含量明显减少(P<0.05)。结论 Shh/Gli1信号通路激活参与了异氟醚后处理减轻大鼠脑缺血-再灌注损伤的过程。

BRD4通过SHH信号通路诱导甲状腺癌细胞增殖、侵袭与迁移

背景与目的:甲状腺癌是目前发病率最高的内分泌系统恶性肿瘤之一,目前的综合治疗手段虽然效果较好,但是部分患者在随后的治疗中会出现继发性摄碘率下降,131I治疗效果差,从而导致复发及远处转移。近年来的研究发现,溴样结构域蛋白4(double bromodomain-containing protein 4,BRD4)可促进多种恶性肿瘤的进展,因此本研究旨在探究BRD4在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞中的作用,寻找治疗甲状腺癌的特异性靶点。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测PTC组织和癌周组织中BRD4的表达差异,应用si BRD4干扰基因转染PTC细胞株TPC-1,应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检验沉默效果,通过MTT实验、平板克隆实验、Transwell小室侵袭与迁移实验检验沉默BRD4前后PTC细胞株TPC-1活力、增殖、迁移及侵袭等生物学行为的变化。进一步应用Western blot及RTFQ-PCR检测钠碘转运体(sodium iodide symporter,NIS)基因及蛋白的表达变化,以及SHH信号通路下游基因SHH、GLI1表达变化情况。结果:BRD4在PTC组织中表达明显增高(P<0.05);在体外实验中BRD4沉默后PTC细胞株TPC-1的细胞活力、增殖、迁移与侵袭能力下降。此外,BRD4沉默后NIS基因及蛋白表达增高,SHH信号通路下游基因SHH、GLI1表达降低(P<0.05)。结论:BRD4通过上调SHH信号通路相关基因促进PTC细胞的侵袭与迁移,沉默BRD4可以促进NIS的表达,BRD4有望成为治疗甲状腺癌的新靶点。

斑马鱼shh启动子指导绿色荧光蛋白基因在脊索中的表达

体外实验业已证明shh基因的启动子受HNF3β蛋白直接调控。为研究斑马鱼shh启动子在体内的作用模式 ,构建了由 5 38bp斑马鱼shh启动子 (包含两个HNF3β结合位点 )与绿色荧光蛋白EGFP组成的表达载体 ,命名为pShh EGFP。将pShh EGFP注射到斑马鱼 1 细胞期内的受精卵中 ,定期在倒置荧光显微镜下观察GFP的表达。GFP在原肠作用期就开始表达 ,主要发生在中轴下胚层中 ;在体节形成期 ,GFP在脊索细胞中表达 ,但未发现在神经底板细胞中表达。由此可见 ,含两个HNF3β结合区域的 5

补气通络解毒方对胰腺癌模型小鼠肿瘤高甲基化基因1、沉默信息调节因子、Shh蛋白浓度的影响

目的观察补气通络解毒方对胰腺癌模型小鼠肿瘤高甲基化基因1(HIC1)、沉默信息调节因子(SIRT_1)、Shh蛋白浓度的影响。方法将30只裸鼠随机分为3组各10只,采用癌细胞种移植法造模。造模成功后,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组给予补气通络解毒方灌胃,连续14 d。治疗结束后,处死裸鼠,取出瘤组织,以WB法检测各组标本的HIC1、SIRT_1、Shh蛋白浓度。结果 3组HIC 1、SIRT 1、Shh蛋白浓度比较有显著差异(P<0.05)。结论补气通络解毒方对模型小鼠HIC1、SIRT_1、Shh蛋白浓度有调节的作用。

巨细胞病毒感染后新生小鼠脑内Wif-1、Shh的表达变化

目的:探讨鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染后新生小鼠脑内Wnt inhibitory factor-1(Wif-1)、Sonic hedgehog(Shh)信号分子的表达变化及对中枢神经系统发育的可能影响。方法:体外3T3细胞培养、MCMV接种增殖;60只生后3 d的BALB/c仔鼠随机分为正常对照组及病毒感染组,病毒组通过腹腔注射法建立新生小鼠中枢神经系统MCMV感染模型,而对照组则注射等量的生理盐水;每组设立3个时间点亚组(造模后3 d,7 d,14 d),相应时点处死仔鼠,取脑组织备用。通过RT-PCR检测两组各时点脑组织中的MCMV-DNA表达;Western Blot检测小鼠脑组织中Wif-1、Shh蛋白的表达;流式细胞术检测两组的细胞周期比例改变。结果:病毒组小鼠脑组织中MCMV-DNA的表达随着时间推移持续增多,而对照组3个时间点均阴性表达;病毒组小鼠脑组织中Wif-1分子的表达相对于对照组增强,而Shh分子的表达相比于对照组则表现出明显的抑制;病毒组小鼠脑组织中处于分裂期的细胞百分比较对照组下降。结论:MCMV感染后的新生小鼠脑组织内Wif-1表达增强,而Shh信号分子则下调,其表达异常变化可能影响Wnt、Hedgehog信号通路,并影响中枢神经系统成熟过程。

SHH在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨SHH在胃癌组织中的表达及临床意义。方法选择本院收治的68例胃癌患者为研究对象,采集其胃癌组织标本,应用免疫组织化学SP法,检测标本中SHH的表达情况,并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 68例胃癌组织标本中SHH阳性表达45例,阳性表达率为66.18%,SHH的阳性表达与癌组织浸润的深度、淋巴结转移情况、TNM分期等密切相关。结论 SHH蛋白在大多数胃癌组织中表达升高,其表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况密切有关,可将其作为胃癌的诊断、疗效判断的重要指标。

SHH信号通路对MCAO模型大鼠脑缺血后的保护机制分析

目的 探讨人重组Shh蛋白(SHH)信号通路对大脑中动脉梗死(MCAO)模型大鼠脑缺血后的保护机制。方法 SPF级SD大鼠36只随机分为假手术组、模型组和SHH组,每组各12只。大鼠MCAO模型制备采用线栓法制成,侧脑室注射外源性SHH蛋白激活SHH信号通路。神经功能依据Longa标准评分进行评价;采用TTC测定大鼠梗死体积;采用激光多普勒血流仪,记录左侧大脑中动脉供血区域血流变化值;实时荧光定量PCR法(RT-PCR)测定VEGF和Ang-1 mRNA表达;采用Western blot测定VEGF和Ang-1蛋白表达。结果 模型组和SHH组大鼠神经功能评分高于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠神经功能评分低于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠梗死体积高于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠梗死体积低于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠脑血流值低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠脑血流值高于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠VEGF和Ang-1相对表达量低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠VEGF和Ang-1相对表达量高于模型组(P<0.05)。模型组和SHH组大鼠VEGF和Ang-1蛋白表达灰度值低于假手术组(P<0.05);SHH组大鼠VEGF和Ang-1蛋白表达灰度值高于模型组(P<0.05)。结论 SHH信号通路可改善MCAO大鼠神经功能,降低梗死体积,通过上调VEGF和Ang-1表达促进血管新生。

干扰维生素D3上调蛋白1通过调控Shh影响高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨维生素D3上调蛋白1(VDUP-1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制。方法:人近端肾小管上皮HK-2细胞用高糖处理后,real-time PCR和Western blot检测细胞中VDUP-1的水平。HK-2细胞转染VDUP-1小干扰RNA,real-time PCR和Western blot检测抑制效果。高糖条件培养VDUP-1表达下调的HK-2细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中caspase-3和caspase-9的活性,ELISA法测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western blot检测细胞中音猬因子(Shh)信号通路关键蛋白Patched 1 (Ptch1)、Smoothened (Smo)、锌指蛋白Gli2和Shh的水平。用外源性Shh处理HK-2细胞,Western blot检测Ptch1、Smo和Gli2的水平。用外源性Shh处理VDUP-1表达下调的HK-2细胞,高糖处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中caspase-3和caspase-9的活性,ELISA法测定培养液上清中TNF-α含量。结果:高糖处理后,HK-2细胞中VDUP-1的mRNA和蛋白水平升高(P <0. 05)。转染VDUP-1小干扰RNA后,HK-2细胞中VDUP-1的mRNA和蛋白水平下降(P <0. 05)。与正常培养的细胞相比,高糖处理后HK-2细胞凋亡率显著升高,细胞中caspase-3和caspase-9活性明显升高,TNF-α含量亦明显升高(P <0. 05);下调VDUP-1表达后的HK-2细胞经高糖处理后细胞凋亡率显著降低,细胞中caspase-3和caspase-9活性也明显降低(P <0. 05)。高糖培养后细胞中Ptch1、Smo、Gli2和Shh的蛋白水平下降,而下调VDUP-1表达部分拮抗高糖对HK-2细胞中Ptch1、Smo、Gli2和Shh表达的影响。外源性Shh可以促进细胞中Ptch1、Smo和Gli2的表达,抑制高糖诱导的HK-2细胞凋亡和分泌TNF-α,与下调VDUP-1共同抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。结论:干扰VDUP-1表达可能通过激活Shh信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和分泌TNF-α。

Hedgehog信号通路效应蛋白在大肠癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路中效应蛋白在人大肠癌、正常大肠组织中的表达及与病理特征的相关性。方法采用免疫组化方法检测60份大肠癌和20份正常大肠组织中Shh、Ptchl和Glil蛋白的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果 Shh、Ptchl和Glil蛋白在大肠癌组织中均为高表达,Shh、Ptchl蛋白与Gli1蛋白的表达呈正相关。结论综合检测Shh、Ptchl和Gli1蛋白对大肠癌的诊断、治疗及预后有较明显的指导意义。