基因探针和PCR方法在菌痢流行病学研究中的应用

目的 探讨基因探针和PCR方法在F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 4 3株自患者粪便和食物中分离到的F2a志贺氏菌进行 16srRNA、ipaH基因Southern杂交 ,随机PCR和set1/set2毒力基因PCR分析。 结果 随机PCR、ipaH基因Southern杂交将 4 3株F2a志贺氏菌分为两个不同的基因型 ,set1/set2毒力基因PCR分为三个不同的基因型 ,16srRNA基因Southern杂交均为同一基因型。结论 基因分型方法能更准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之间的流行病学联系。其中set1/set2毒力基因PCR方法具有较高的分辨率 ,在F2a志贺氏菌的分子流行病学研究中具有重要的作用。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在同源克隆鉴定系统中的应用

目的 对福氏 2a志贺菌肠毒素ShET1和肠毒素ShET2进行基因分型 ,提高福氏 2a志贺菌同源克隆鉴定系统的分析水平。方法 综合运用质粒DNA分析、16srRNA基因探针分析及随机PCR分析方法对 93株分离自不同地区 ,不同时间的福氏 2a志贺菌进行多生物学标志分型 ,同时引入志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析法检测福氏 2a志贺菌。结果 质粒DNA分析、RAPD分析、16srRNA基因探针分析三种方法联合运用 ,可将 93株S flexneri 2a分成 19个克隆群 ,克隆分辨率为 2 0 4 3% (19/ 93) ,引入毒素ShET1/ShET2基因PCR分析 ,可新增加 8个克隆群 ,克隆分辨率为 2 9 0 3% (2 7/ 93) ,克隆分辨率提高 8 6 0 % (8/ 93)。 93株福氏 2a志贺菌按志贺菌肠毒素分为 4种基因型 ,即 12株ShET1(- ) /ShET2 (+) ,14株ShET1(+) /ShET2 (- ) ,5 9株ShET1(+) /ShET2 (+) ,8株ShET1(- ) /ShET2 (- )。结论 在应用多生物学标志进行福氏 2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时 ,肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析是不可或缺的分析指标。

志贺菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的 探讨 4种基因分型方法在一起F2a志贺菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 43株从患者粪便和食物中分离菌株进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1/set2毒力基因PCR分析。结果 随机PCR将 43株F2a志贺菌分为 2个不同的谱型 ,质粒图谱、set1/set2毒力基因PCR分为 3个不同的谱型 ,而质粒DNA酶切图谱分为 4个不同的谱型。其中基因型完全相同的菌株 3 5株 ,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同的菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同 ,证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺菌 ,但基因型与流行株不同 ,不是本次暴发的传染源。结论 DNA水平上的分型方法能更为准确。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在菌痢暴发研究中的应用

目的 对福氏 2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigellaenterotoxinl)和肠毒素ShET2 (Shigellaenterotoxin2 )进行基因分型 ,提高菌痢暴发流行时同源克隆的鉴定分析水平。方法 对在菌痢暴发期间分离的 8株福氏 2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因 ,进行基因分型和同源克隆鉴定。结果 8株福氏 2a志贺菌可分为 3种基因型 ,即 2株ShET1(- ) /ShET2 (+) ,1株ShET1(+) /ShET2 (- ) ,5株ShET1(+) /ShET2 (+)。结论 本次菌痢暴发部分患者可能并非真正的暴发病例 ,之所以被归入暴发事件之中 ,可能是一种与暴发事件在空间。

PCR检测技术在志贺菌引起的腹泻疫情中的应用

目的:通过采用PCR方法对某次疫情中分离的福氏1 a志贺菌进行保守基因检测及毒力基因分析研究,探讨在感染性腹泻疫情中,PCR技术快速检测志贺菌的应用。方法:对标本中分离的7株福氏1 a志贺菌,用PCR方法检测侵袭性质粒抗原基因(ipaH)、志贺肠毒素1(ShET-1)和志贺肠毒素2(ShET-2)的基因检测,并进行基因分型。结果:7株F1 a菌均检测出ipaH基因,ShET-1和ShET-2,基因型为ShET1(+)/ShET2(+),整个实验可在3 h内完成。结论:该所建立的PCR检测方法准确、快速、简便、特异性强,为其应用于环境、食品及临床腹泻样本中志贺菌的检测打下良好基础。ShET-1/ShET-2基因分型对福氏志贺菌暴发流行中的同源性分析有重要意义。

AP-PCR和set1、set2两基因PCR用于志贺菌基因多态性研究

目的与方法 : 应用随机引物 PCR(简称 AP- PCR或 PAPD)和 set1、set2两基因 PCR方法分析了 71株F2 a志贺菌的基因多态性。 结果 :两种引物的 AP- PCR中 ,引物 12将 71株 F2 a志贺菌分为两种不同的基因型 ,引物 17和 set1、set2两基因 PCR将所有菌株分为四种不同的基因型 ,两种方法结合则可分为七种不同的基因型 ;其中 6 5株 F2 a志贺菌基因型相同 ,其余 6株各为独立的型别。本研究表明 AP- PCR和 set1、set2两基因 PCR为志贺菌基因多态性分析的有效手段 ,二者结合则更为完善 ;研究结果还表明 ,在我国南北不同地区不同时间分离到的无论是暴发株还是散发株 ,均具有相同的优势克隆。 结论 :上述菌株是引起国内菌痢散发和暴发的主要基因型 。

志贺菌属肠毒素ShET1/ShET2的基因型PCR分析

目的 对福氏 2a志贺菌肠毒素ShET1和肠毒素ShET2进行基因分型 ,提高福氏 2a志贺菌同源克隆鉴定系统的分析水平。方法 对 93株分离自不同地区、不同时间的福氏 2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因并进行基因分型。结果 93株福氏 2a志贺菌按志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分为 4种基因型 ,即 12株ShET1(- ) /ShET2 (+) ,14株ShET1(+) /ShET2 (- ) ,5 9株ShET1(+) /ShET2 (+) ,8株ShET1(- ) /ShET2 (- )。结论 福氏 2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因PCR检测可用于福氏 2a志贺菌的初步筛检。

福氏2a志贺氏菌肠毒素基因分型

目的 对福氏 2a志贺氏菌 (Shigellaflexneri 2a ,F2a)的志贺氏肠毒素 1(Shigellaenterotoxin 1,SET1)和志贺氏肠毒素 2 (Shigellaenterotoxin 2 ,SET2 )进行基因分型 ,提高菌痢暴发流行时同源性分析的水平。方法 对一起暴发F2a菌痢在现场流行病学调查的基础上 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,检测 43株F2a菌的志贺氏肠毒素 1基因 (set 1)和志贺氏肠毒素 2基因 (set 2 ) ,进行基因分型和同源性鉴定。结果 43株F2a菌株分为 3种基因型 ,即 1株set 1( - ) /set 2 ( +) ;3株set 1( +) /set 2 ( - ) ;39株set 1( +) /set 2 ( +)。结论 本次菌痢暴发是经污染食物传播 ,暴发事件中夹杂着散发病例 ,set 1/set

天津地区志贺菌志贺肠毒素基因分布与脉冲场凝胶电泳分型研究

目的了解天津地区志贺菌流行株的志贺肠毒素基因分布和PFGE分子分型情况。方法采用PCR方法检测天津地区2005—2007年分离的62株志贺菌编码志贺肠毒素的基因(set1As、et1Bs、en),并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型和聚类分析。结果 62株志贺菌中福氏志贺菌占58.06%,其中福氏2b为福氏志贺菌的优势型别;宋内志贺菌占41.94%;福氏志贺菌的三种志贺肠毒素基因检出率均明显高于宋内志贺菌(P<0.05);受试菌株的基因组DNA经PFGE分型,福氏志贺菌可分为10种带型(FⅠ～FⅩ);宋内志贺菌可分为4种带型(SⅠ～SⅣ),其中SⅠ型占86.96%(20/23株)。结论天津地区流行的志贺菌株编码肠毒素基因set1As、et1B和sen在不同血清群中的分布有显著性差异;宋内志贺菌可能源于亲缘关系很近的克隆系(SⅠ型),福氏志贺菌PFGE分子分型呈现出明显的多态性。

志贺氏菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的:探讨四种基因分型方法在一起F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法:对43株分离自患者粪便和食物的菌株分别进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、setl/set2毒力基因PCR分析.结果:随机PCR将43株F2a志贺氏菌分为西个不同的谱型,质粒图谱、setl/set2毒力基因PCR分为三个不同的谱型。而质粒DNA酶切图谱分为四个不同谱型。其中基因型完全相同的菌株35株,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同.证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺氏菌.但基因型与流行株不同。不是本次暴发的传染源。结论:DNA水平上的分型方法能更为准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之间的流行病学联系。

AP-PCR和set1、set2两基因PCR用于志贺氏菌基因多态性研究

本文应用随机引物PCR(简称AP-PCR或PAPD)和set1、set2两基因PCR方法分析了71株F2a志贺氏菌的基因多态性.结果为:两种引物的AP-PCR中,引物12将71株F2a志贺氏菌分为2种不同的基因型,引物17和set1、set2两基因PCR将所有菌株分为4种不同的基因型,两种方法结合则可分为7种不同的基因型;其中65株F2a志贺氏菌基因型相同,其余6株各为独立的型别.本研究表明APPCR和set1、set2两基因PCR为志贺氏菌基因多态性分析的有效手段,两者结合则更为完善;研究结果还表明在我国南北不同地区不同时间分离到的无论是暴发株还是散发株均具有相同的优势克隆,说明其为引起国内菌痢散发和暴发的主要基因型,是流行病学研究和防治的重点.