石斛散对人视网膜神经细胞凋亡的影响

目的探讨石斛散治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据。方法以人视网膜神经细胞为研究对象,用AnnexinV+PI为染料标记的凋亡试剂盒,利用流式细胞仪分析药物干预后不同组别中各类凋亡细胞及活细胞的比例。结果正常情况下,对照组活细胞占61·32%,石斛散组为73·8%,两组比较有显著统计学差异。用1mmol/L的谷氨酸干预细胞2h后,活细胞比例降为44·23%,而晚期凋亡细胞和死亡细胞分别增为24·90%和21·63%。预先给予石斛散干预的中药组,活细胞明显多于对照组,其他各类细胞少于对照组。结论石斛散具有抵抗谷氨酸损伤,延缓视网膜神经细胞凋亡过程的作用。

石斛散对体外培养人视网膜细胞的作用

目的观察中药方剂石斛散及单味药对人视网膜细胞的增生以及谷氨酸损伤的保护作用,探讨其在视网膜细胞损伤或变性类疾病方面的作用及机理,为临床治疗同类疾病提供依据。方法体外培养人视网膜细胞,通过四甲基偶氮唑盐实验观察石斛散复方以及各单味药对视网膜细胞增生的影响。另用Rhodamine123标记培养的视网膜细胞,通过激光共聚焦扫描显微镜动态观察和记录不同药物作用下细胞的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化。结果体外培养人视网膜细胞贴壁、伸展以及生长良好。四甲基偶氮唑盐实验:石斛散组1.58g·L-1和0.50g·L-1以及石斛组5.00g·L-1对人视网膜细胞活性分别增加21.8%、14.2%和13.4%。MMP实验:石斛散轻度升高MMP,增加约13.5%,同时它可以抵抗谷氨酸损伤细胞后引起的MMP下降,由降低46.4%减少为16.2%。结论石斛散能够影响人视网膜细胞线粒体功能、促进细胞活性、抵抗谷氨酸对人视网膜细胞损伤作用。可作为临床治疗视网膜变性类疾病的一种选择。

石斛散对人视网膜神经细胞钙离子变化的影响

目的通过观察石斛散对人视网膜神经细胞内钙离子持续升高导致的细胞凋亡的保护作用,探讨其在治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据。设计实验性研究。研究对象体外培养的人眼视网膜神经细胞。方法利用体外培养的贴壁、伸展以及生长良好人视网膜神经细胞,用Fluo3／AM标记,通过激光共焦扫描显微镜动态观察和记录石斛散和维拉帕米对细胞内钙离子水平以及谷氨酸引起的钙超载的影响。主要指标细胞内钙离子水平(荧光强度)。结果加入谷氨酸后,荧光强度较原基础值增加88％;而石斛散可使荧光强度降低14．8％;维拉帕米降低幅度为57．3％。对先用谷氨酸干预的细胞,石斛散不能降低胞内钙离子水平,但预先用石斛散干预的细胞,谷氨酸升高胞内钙离子30％,与未干预组比较有统计学差异(P=O．000)。结论石斛散具有降低体外培养人视网膜神经细胞内钙离子的作用,同时可以抵抗谷氨酸损伤细胞后引起的胞内钙离子升高,提示其具有抵抗钙超载,抑制视网膜细胞凋亡的作用。