WNK2通过抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨WNK2对肝细胞癌(hepatocellocellua carcinoma,HCC)中ERK1/2/ROS/SHP2信号通路的影响,并探讨其在HCC细胞增殖和迁移中的作用。方法将WNK2-mimic和sh-RNA WNK2以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用Western Blot检测瘤组织中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用Western Blot检测HepG2细胞中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK-8检测HepG2细胞的增殖能力。结果与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(P<0.01);Western Blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(P<0.01);在体外实验当中,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);相对于sh-NC+PHPS1组,sh-RNA WNK2+PHPS1组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),而p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与sh-NC+PHPS1组不具有显著性差异(P>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的增殖能力显著升高(P<0.01),而sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05)。结论WNK2可以抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路,从而抑制ERK1/2/AKT信号通路,延缓HCC的增殖和迁移。

SHP2在消化系统肿瘤中的研究进展

目前恶性肿瘤已经成为威胁人类身体健康的主要疾病之一,致残率、致死率在逐年上升。Src同源性2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶(proteintyrosine phosphatase,PTP)家族中重要的一员,是一种功能广泛的酪氨酸磷酸酶,其在多种实体肿瘤中的表达量升高,在侵袭、转移、增殖、凋亡、耐药性等方面发挥着重要调控作用。已有大量研究表明,SHP2在许多实体瘤的发生和发展中起着非常重要的作用,但现在尚无系统的报道SHP2在消化系统肿瘤中的作用。基于此该文综述了SHP2在7种消化系统中不同肿瘤的生物学功能及临床意义,探讨其在不同癌症发展阶段的作用与机制,并总结与展望SHP2抑制剂的发展,进一步寻找有效的早期诊断和基因治疗的潜在靶点,这对癌症患者生存率的提高具有十分重要的意义。

LHPP通过调控NOX2/SHP2通路活性抑制结直肠癌的增殖、侵袭和转移

目的探讨组氨酸磷酸酶(LHPP)通过氧化应激通路对结直肠癌增殖、侵袭和迁移的影响,并初步阐明其作用机制。方法使用Liposome3000进行细胞转染操作。将质粒OE-NC、OE-LHPP和寡核苷酸片段si-NC、si-LHPP分别转染进SW480细胞中,通过Western Blot检测LHPP、NOX2、p-SHP2的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP组转染进SW480细胞中并同时使用NCA刺激,通过Western Blot检测NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP转染进SW480和SW620细胞中,并同时使用NAC刺激,通过划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测通过孔的细胞数量,克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果SW480细胞中OE-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显高于OE-NC组(P<0.05),但p-SHP2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01);SW480细胞中si-Si-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01),但p-SHP2蛋白表达水平明显高于si-NC组。与OE-NC组相比,SW480细胞中OE-LHPP的NOX2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),SW480和SW680细胞迁移距离缩短、穿过孔的细胞数量减少和细胞克隆形成数量减少;加入NAC干预后,消除了SW480和SW680细胞中OE-NC组和OE-LHPP组在NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的差异,也消除了细胞划痕、细胞侵袭和细胞增殖的差异。结论LHPP通过促进氧化应激抑制SHP2、PI3K和ERK通路活性进而抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响进而缓解结直肠癌的进展。

巨噬细胞来源SHP2通过PI3K/PTEN通路促进氧化应激和血管生成对子宫内膜异位症凋亡表型的影响

目的研究巨噬细胞来源含Scr同源区2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)通路促进氧化应激和血管生成对子宫内膜异位症凋亡表型的影响。方法收集2019年1月至2022年12月50例子宫内膜异位症异位子宫内膜组织和50例正常子宫内膜组织。选取健康雌性C57BL/6小鼠12只,采用子宫组织自体移植腹膜壁的方法建立小鼠子宫内膜异位症模型,将小鼠随机分为SHP2-NC组和SHP2-shRNA组,每组6只,利用慢病毒感染的方法构建稳定敲低SHP2基因的RAW264.7细胞,经小鼠尾静脉注射。使用HE染色、Western blot、TUNEL染色、CCK-8、成管实验分别检测子宫内膜组织的病理改变、CD68+巨噬细胞相关蛋白表达情况、内膜细胞凋亡、内膜细胞增殖活性以及内皮细胞血管生成情况。结果相较于正常子宫内膜组织,异位子宫内膜组织CD68+巨噬细胞SHP2表达水平升高(P<0.05)。而在SHP2-shRNA组子宫内膜异常病变区域间质细胞出现,但腺体和血管形成减少,同时SHP2、NADPH氧化酶2(NOX2)、NADPH氧化酶4(NOX4)、环氧化酶2(COX2)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达水平低于SHP2-NC组,而p53、Caspase-3、Bax表达水平高于SHP2-NC组(P<0.05)。与SHP2-NC组比较,SHP2-shRNA组内膜细胞凋亡数目增加,细胞增殖活性降低,内皮细胞血管生成数量减少(P<0.05)。与SHP2-NC干预比较,SHP2-shRNA干预使p-PI3K、NOX4、COX2和VEGF表达水平降低,而PTEN和p53表达水平升高(P<0.05)。在LY294002干预后,p-PI3K、NOX4、COX2和VEGF表达水平较干预前下降,而PTEN和p53表达水平较干预前上升(P<0.05)。在740 Y-P干预后,p-PI3K、NOX4、COX2和VEGF表达水平较干预前上升,而PTEN和p53表达水平较干预前下降(P<0.05)。结论SHP2通过促进PI3K/PTEN通路活性来增强氧化应激和内皮细胞血管新生,同时抑制子宫内膜细胞凋亡。

吡嗪类SHP2抑制剂的设计、合成及生物活性评价

SHP2是一个肿瘤治疗的潜在靶点。本文以TNO155为先导化合物,采用基于片段的药物设计策略,设计并合成三个系列共11个新型吡嗪类SHP2变构抑制剂,其结构均经1H-NMR和ESI-MS谱确证。采用荧光分析方法,通过替代底物DiFMUP的去磷酸化程度对目标化合物开展体外活性评价。结果表明,目标化合物对SHP2蛋白显示不同程度的抑制活性。其中2个化合物C-2和C-3的活性较为突出,值得进一步研究。

SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

目的探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组:(1)Control组,以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组,转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-SHP2组,转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示,与Control组LX-2细胞凋亡率(3.08±0.73)%、(9.44±0.80)%及Ad-GFP组(3.25±0.85)%、(8.89±1.98)%比较,Ad-SHP2组(1.52±0.26)%、(2.44±0.93)%降低(P<0.05);Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组LX-2细胞的Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);Ad-SHP2组LX-2细胞的Bax蛋白相对表达量(1.55±0.21)低于Control组(1.99±0.15)及Ad-GFP组(2.00±0.16)(P<0.05);而Bcl-2蛋白相对表达量(2.13±0.25)则高于Control组(1.71±0.15)及Ad-GFP组(1.52±0.14)(P<0.05);但Ad-GFP组与Control组Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SHP2过表达通过升高Bcl-2/Bax抑制体外人肝星状细胞LX-2凋亡。

抑制SHP2和FGFR2调控RAS/ERK及PI3K/AKT通路治疗FGFR2融合胃癌

目的:探究共抑制成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)和Src同源2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology region 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)在FGFR2融合胃癌中的应用前景与作用机制。方法:构建过表达TACC2-FGFR2融合基因与对照慢病毒载体的人胃癌细胞系MKN45ACC2T-FGFR2、MKN45NC、NUGC4TACC2-FGFR2、NUGC4NC,分别用FGFR2抑制剂AZD4547、SHP2抑制剂SHP099或联药进行处理,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验检测肿瘤细胞的增殖、迁移能力。以不同处理方式作用于MKN45TACC2-FGFR2、MKN45NC1 h或48 h后,采用Western blot法检测FGFR2、SHP2以及下游RAS/ERK、PI3K/AKT信号通路变化。结果:在MKN45TACC2-FGFR2与NUGC4TACC2-FGFR2中联用AZD4547与SHP099可以比单药更显著地抑制肿瘤细胞的增殖与迁移。药物处理1 h后,相较于AZD4547单药,联药在MKN45TACC2-FGFR2中进一步抑制了RAS/ERK、PI3K/AKT信号通路。药物处理48 h与1 h相比,AZD4547单药组中磷酸化FGFR与磷酸化SHP2出现了反馈性激活,且始终不能抑制RAS/ERK通路,但联药组可以持续地抑制上游的FGFR2、SHP2信号以及下游的RAS/ERK、PI3K/AKT通路。结论:共抑制FGFR2和SHP2可以通过下调RAS/ERK及PI3K/AKT通路有效抑制FGFR2融合胃癌,为FG-FR2融合突变胃癌患者带来新的治疗模式。

金银花总皂苷对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、侵袭、凋亡及SHP2/Ras/MAPK通路的影响

目的:探讨金银花总皂苷对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、侵袭、凋亡及SHP2/Ras/MAPK通路的影响。方法:设甲状腺癌TPC-1细胞组、5-氟尿嘧啶组(500μmol·ml^(-1))、金银花总皂苷低和高剂量组(500μmol·ml^(-1)、1000μmol·ml^(-1)),以上各组每孔设6个平行样,培养72h。试验结束后,应用CCK-8试剂盒测定细胞增殖水平,Transwell室测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定细胞SHP2、Ras、MAPK mRNA及蛋白水平。结果:与甲状腺癌TPC-1细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、金银花总皂苷低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。与5-氟尿嘧啶组比较,金银花总皂苷低剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(P<0.05),金银花总皂苷高剂量组OD值、存活率、凋亡率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与金银花总皂苷低剂量组比较,金银花总皂苷高剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:金银花总皂苷能抑制甲状腺癌细胞的增殖、侵袭并增强其凋亡,其机制可能与金银花总皂苷抑制SHP2/Ras/MAPK信号通路的激活有关。

SHP2靶向抑制对KRAS突变肺癌细胞炎症相关基因表达的影响分析

目的 探究Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(Src homology region 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)抑制剂对KRAS突变肺癌细胞中炎症相关基因表达的调节作用,旨在为KRAS突变肺癌治疗的个体化和精准化提供依据。方法 使用SHP2抑制剂SHP099处理5株KRAS突变的人肺癌细胞系,western blot分析ERK1/2等信号通路蛋白活化水平。采用RNA测序分析药物或DMSO作用后配对样本基因表达情况,对差异表达基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析揭示功能通路富集情况。采用RT-qPCR验证差异基因相对表达水平。结果 SHP2抑制剂处理后,KRAS突变肺癌细胞中的p-SHP2和p-ERK1/2表达水平显著下调。转录组测序和差异基因分析显示,SHP2靶向抑制改变了多个信号通路基因的表达,特别是白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)通路相关的CXCL1、CXCL2、CXCL8、MMP1、PTGS2等炎症相关基因表达受到显著下调。结论 SHP2靶向抑制可影响KRAS突变肺癌细胞的IL-17信号通路炎症相关基因表达情况,为进一步阐述靶向SHP2调节肺癌免疫微环境提供了初步证据。

激活突变引发SHP2蛋白相分离对小鼠间充质干细胞增殖能力的影响及其机制

目的构建SHP2 E76K突变的小鼠模型,利用其间充质干细胞(MSC)研究激活突变引发的SHP2蛋白相分离对其细胞增殖能力的影响及其机制。方法将Ptpn11 E76K-neo/+的C57BL/6J小鼠与Mx1-cre工具鼠杂交,得到所需要的Mx1-cre;Ptpn11^(+/+)和Mx1-cre;Ptpn11^(E76K/+)小鼠,并对后者注射pI-pC以诱导Cre酶的表达,使Ptpn11在骨髓MSC中突变。从Mx1-cre;Ptpn11^(+/+)和Mx1-cre;Ptpn11^(E76K/+)小鼠体内分离培养MSC,通过细胞免疫荧光染色确定所分离的细胞为MSC。以Ptpn11^(+/+)的MSC为对照组,Ptpn11^(E76K/+)的MSC为实验组,通过加药将两种细胞分成6组:Ptpn11^(+/+)组;Ptpn11^(+/+)+SHP099组;Ptpn11^(+/+)+ET070组;Ptpn11^(E76K/+)组;Ptpn11^(E76K/+)+SHP099组;Ptpn11^(E76K/+)+ET070组。免疫荧光染色法观察6组细胞内SHP2蛋白相分离的差异,Western blot法检测6组MSC中SHP2蛋白表达水平的差异。CCK-8检测相分离被影响之后细胞增殖能力的改变。提取实验组与对照组细胞总蛋白通过Western blot法检测ERK/p-ERK、AMPK/p-AMPK、mTOR/p-mTOR等蛋白的表达水平。结果小鼠基因型鉴定证实得到Mx1-cre;Ptpn11^(E76K/+)和Mx1-cre;Ptpn11^(+/+)小鼠并分离出原代Ptpn11^(+/+)和Ptpn11^(E76K/+)骨髓MSC。与Ptpn11^(+/+)组相比,Ptpn11^(E76K/+)组的SHP2蛋白产生更多的相分离冷凝物;与Ptpn11^(E76K/+)组相比,Ptpn11^(E76K/+)+SHP099组和Ptpn11^(E76K/+)+ET070组SHP2蛋白凝聚成的冷凝物在均明显减少;Western blot检测各组SHP2蛋白表达水平差异无统计学意义;与Ptpn11^(+/+)组相比,Ptpn11^(+/+)+SHP099组和Ptpn11^(+/+)+ET070组MSC的增殖能力下降,细胞内p-ERK和p-mTOR蛋白表达减少,p-AMPK蛋白表达增加;与Ptpn11^(E76K/+)组相比,Ptpn11^(E76K/+)+SHP099组和Ptpn11^(E76K/+)+ET070组MSC的增殖能力下降,细胞内p-ERK和p-mTOR蛋白表达减少,p-AMPK蛋白表达增加。结论SHP2的相分离通过刺激AMPK-mTOR信号通路的表达参与了SHP2 E76K激活突变的MSC的增殖能力改变。

虚拟筛选结合活性验证发现新型SHP2催化位点抑制剂

原癌蛋白SHP2是一种蛋白酪氨酸磷酸酶,其在多种恶性血液病和实体瘤中异常活跃表达。所以,研发靶向SHP2的抗肿瘤小分子抑制剂已成为当前研究的热点。通过基于SHP2抑制剂和非抑制剂的贝叶斯分类模型,药效团模型,及分子对接的组合虚拟筛选技术联合酶水平活性验证,发现3个新型SHP2催化位点抑制剂。因蛋白酪氨酸磷酸酶催化位点结构高度保守,靶向催化位点抑制剂一般选择性较差。检测了活性最高化合物cpd2在10μmol/L浓度下对SHP2,SHP1,PTP-1B和DUSP22的抑制作用,检测结果提示该化合物具有一定潜在选择性。通过分析化合物cpd2与药效团的匹配结果,及分子对接技术预测的cpd2与SHP2催化活性位点间相互作用,阐明该化合物抑制SHP2催化活性的作用机制。所得结果为发现更多高活性和高选择性SHP2催化位点抑制剂奠定了新的基础。

SHP2及其变构抑制剂在肿瘤靶向治疗中的研究进展

含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 region-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)是由PTPN11编码的胞内非受体蛋白酪氨酸磷酸酶,已被证实参与多种癌症的发生发展,主要通过RAS/MAPK、PI3K/AKT、JAK/STAT、PD-L1/PD-1等信号通路调控肿瘤细胞生长、增殖、侵袭、凋亡和免疫逃逸。自2016年诺华团队发现了含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2的变构位点开始,对其抑制剂的研究已从催化位点抑制剂转向新型的变构位点抑制剂,克服了催化位点抑制剂高极性和特异性差的缺点,目前已有许多小分子化合物被报道,且具有成药潜力的含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2变构抑制剂相继被开发进入临床试验阶段。本文将重点介绍近5年文献报道的含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2靶点的结构与功能、在肿瘤靶向治疗中的价值及其变构抑制剂的研究进展。

SHP2在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的以往研究表明,异常的酪氨酸磷酸化与癌的发生密切相关,本研究旨在采用组织芯片技术结合免疫组化方法来研究蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法(SP)进行免疫组化检测。结果SHP2在NSCLC中的表达率为70.00%(56/80),其中鳞癌为72.5%(29/40),腺癌为67.50%(27/40);有无淋巴结转移的患者SHP2的阳性表达率分别为73.61%(53/72)和37.50%(3/8)(P<0.05);SHP2的表达与患者性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度、临床分期间无统计学差异(P<0.05)。结论SHP2在NSCLC中有较高的表达率,且与淋巴结转移密切相关,提示肺癌的发生、发展可能与SHP2有关,SHP2可能是肺癌新的标志物及治疗靶点。

黄芪皂苷对化疗贫血小鼠骨髓细胞c-Kit、SHP2、c-MPL等细胞因子的影响

目的:探讨黄芪皂苷对化疗贫血小鼠骨髓细胞INF-α、TGF-β、INF-γ和c-kit、SHP2、c-MPL细胞因子的影响。方法:从环磷酰胺所致的化疗贫血小鼠中,获取单个骨髓细胞,采用体外细胞培养方式培养小鼠骨髓细胞至第四代,并分成4组,分别为空白组、模型组、皂苷组和EPO组。采用ELISA法,观察黄芪皂苷对小鼠骨髓细胞中INF-α、TGF-β、INF-γ的影响;RT-PCR法观察黄芪皂苷对小鼠骨髓细胞中c-kit、SHP2、c-MPL的m RNA达的影响。结果:黄芪皂苷可以降低小鼠骨髓细胞中INF-α、INF-γ(P<0.05)的含量,提高TGF-β(P<0.05)的含量;还可以提高小鼠骨髓细胞中c-kit(P<0.05)的m RNA水平,降低SHP2(P<0.05)的m RNA水平,而对c-MPL(P>0.05)作用不明显。结论:黄芪皂苷能够改善TNF-α,TGF-β,INF-γ三种负性调节因子的水平,调节造血细胞的功能;上调c-kit,下调SHP2的基因水平,激活造血细胞的造血功能。

杜仲叶通过Shp2激活Erk1/2促进BMSCs增殖的研究

目的研究杜仲叶提取物对大鼠BMSCs的增殖作用及其分子机制。方法使用密度梯度离心和贴壁培养法从SD大鼠股骨骨髓中获取BMSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原;分别用0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物和20mg/ml杜仲叶提取物+10μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理BMSCs,2 d后BrdU检测细胞增殖情况;用无血清无酚红培养基饥饿大鼠BMSCs 6 h后,一组分别加入0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物处理15 min,另一组用10μmol/LShp2抑制剂处理预处理2 h后加入20 mg/ml杜仲叶提取物处理15 min,Western blot检测p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平的变化。结果流式细胞仪细胞表面抗原检测显示CD29、CD90呈阳性,CD34、CD45呈阴性;BrdU结果显示杜仲叶提取物促进BMSCs增殖,并具有浓度依赖性,NSC87887可以抑制其促进作用;杜仲叶提取物可以诱导BMSCs的p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平升高,而对诱导Erk1/2磷酸化的促进作用是通过激活Shp2来完成的。结论杜仲叶提取物通过Shp2/Erk途径促进大鼠BMSCs增殖。

绿原酸通过Shp2激活Erk1/2促进大鼠成骨细胞增殖的实验研究

目的研究从杜仲叶中提取的绿原酸对大鼠成骨细胞的促增殖作用。方法MTT法检测分别用0、0．1、1、10μmol/L4种不同浓度梯度的绿原酸和0．1μmol/L绿原酸＋10μmol/LShp2抑制剂NSC87887处理大鼠成骨细胞增殖情况；用无血清无酚红DMEM培养基培养的饥饿大鼠成骨细胞用上述药物处理后，用Western blot检测其p-Shp2（Tyr580）、Shp2、P-Erk和Erk蛋白表达。结果MTT法结果显示绿原酸（0-1μmol/L）促进大鼠成骨细胞的增殖，呈浓度依赖性；Western blot结果显示绿原酸可以诱导大鼠成骨细胞的p-Shp2（Tyr580）和Erk磷酸化水平升高，而NSC87887可以抑制其促进作用。结论绿原酸能够促进大鼠成骨细胞的增值，并且是通过Shp2/Erk途径实现的。

SHP2介导IL-6促进乳腺癌细胞侵袭作用机制的研究

目的:探讨非受体型酪氨酸磷酸酶SHP2介导白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)促进人乳腺癌细胞侵袭的作用,以及相应的分子机制。方法:利用外源性重组IL-6处理人乳腺癌细胞T47D,采用表达IL-6的慢病毒感染T47D细胞使其内源性表达IL-6,观察细胞的形态学改变情况,分析细胞迁移和侵袭能力的变化。采用小RNA干扰的方法下调IL-6信号通路中关键分子SHP2的表达,观察其表达下降对IL-6促进乳腺癌细胞侵袭能力的影响,同时采用Western blot方法检测Erk1/2磷酸化变化。结果:上调IL-6在乳腺癌细胞中的表达显著促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,且细胞发生由上皮形态向类成纤维细胞形态的变化,同时伴随着上皮标志性蛋白E-cadherin表达下调和间质标志Vimentin表达上调。下调SHP2的表达明显抑制IL-6诱导乳腺癌细胞的上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)和侵袭能力,同时伴随着细胞内Erk1/2磷酸化水平的下降。结论:SHP2通过介导IL-6诱导的EMT促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

SHP2抑制剂NSC-87877对炎性疼痛的抑制作用及其机制

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(src homology-2 domain-containing phosphatase 2)的抑制剂NSC-87877对炎性疼痛的影响及其机制;方法小鼠左后足底皮下注射完全佛氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant;CFA)建立疼痛模型;鞘内给予NSC-87877前后,测定缩足阈值;随后分离左侧L4-L5节段脊髓背角,免疫印迹法检测N-methyl-D-aspartate(NM-DA)型谷氨酸受体的表达;结果 SHP2广泛分布于脊髓背角;且SHP2抑制剂NSC-87877(3μg)能够抑制CFA诱发的痛觉超敏,而对正常动物的痛行为无作用。虽然NSC-87877不影响NMDA受体NR2B和NR2A亚基的总蛋白含量,但却能够特异性降低CFA组动物NR2B的突触表达水平;结论 SHP2抑制剂NSC-87877通过逆转NR2B的突触表达亢进,对炎性疼痛产生明显的抑制作用。

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与肿瘤

Shp2(SH2 domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2)分子由PTPN11基因编码,是一个在体内广泛存在的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶,既可以通过磷酸酶的催化活性来正向调控下游信号转导通路,也可以作为磷酸酶非依赖性的接头蛋白发挥正向调控作用,在特定的条件下亦可发挥负向调控作用,从而广泛参与细胞的分化、迁移等生物学功能的调控及相关的信号转导过程。PTPN11突变被认为是青少年粒单细胞白血病(juvenile myelomonocytic leukemia,JMML)的高危因素,同时,因其在不同类型白血病中均存在着Shp2的异常活化和突变而被认为是白血病的原癌基因;在前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌和神经胶质瘤中,Shp2也被报道呈过度活化状态;在肺癌中Shp2作为癌基因通过调控多种机制促进肿瘤的发生、发展。但在肝癌发生过程中,Shp2却在特定环境的影响下发挥抑癌基因的作用。总之,作为重要的节点分子,Shp2在肿瘤发生、发展的过程中发挥着重要的调控作用,是潜在的治疗靶点。

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD(0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD(0.23±0.01、0.27±0.01、0.30±0.01、0.33±0.01)较对照组(0.19±0.01)显著增加(P<0.05),且逐渐升高(P<0.05)。SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织中表达SHP2的活化HSC占总的活化HSC的百分比(54%±3%、62%±2%、73%±4%、86%±3%)逐渐升高(P<0.05)。结论在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型中,肝组织及在体HSC的SHP2表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。