四君子汤及其主要有效成分抗结直肠癌机制研究进展

四君子汤是中医经典名方,由人参、白术、茯苓、甘草配伍而成,具有益气健脾的功效,主治脾胃虚弱证,现代临床上也常用于结直肠癌(CRC)、胃癌等消化道肿瘤的防治。其主要有效成分有人参皂苷Rg_(3)、Rb_(1)、Rh_(1)、Rh_(2)、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸、甘草酸等。大量临床研究表明四君子汤可以防治癌前病变,联合手术放化疗减毒增效,改善患者生活质量、延长生存期,广泛用于CRC的全程治疗中,但其作用机制尚未被系统阐明。该文通过总结近10年相关文献发现,四君子汤及其有效成分可以通过抑制肠道炎症反应,预防炎癌转化;通过调节蛋白53(p53)、Wnt、核转录因子-κB(NF-κB)等信号通路控制肿瘤生长;通过调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)、河马(Hippo)等信号通路来抑制肿瘤转移;也能通过负调控蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号传导和转录激活子(STAT)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)等信号通路抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,通过激活骨髓依赖淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)等凋亡蛋白促进凋亡,通过下调耐药基因的表达逆转化疗和靶向耐药;还可以恢复肿瘤微环境中的白细胞分化抗原8^(+)胸腺依赖淋巴细胞(CD8^(+)T cell)、巨噬细胞、自然杀伤细胞的活性来增强抗肿瘤免疫;还能通过上调锌指转录因子4(KLF4)改善体质量减轻、肌肉萎缩等肿瘤恶病质症状,延长荷瘤小鼠的生存期。该文还讨论了目前临床和基础研究方面存在的不足,展望了四君子汤与肠道菌群的相互作用等有前景的研究方向,以期为今后新型高效低毒抗CRC新药研发和临床应用提供参考依据。

儿科经典名方异功散的历史沿革与关键信息考证

异功散出自北宋·钱乙《小儿药证直诀》,为国家中医药管理局2022年9月发布的《古代经典名方目录(第二批儿科部分)》中的第3号方,可开发为3.1类中药新药。该研究通过查阅古代医籍和现代文献,从异功散的历史沿革、药味基原和炮制、剂量折算、制法用法、功能应用5个方面进行考证,形成该处方的关键信息表,以期为异功散基准样品研制和制剂开发提供参考。依据研究结果,建议异功散药材基原和炮制选用人参Panax ginseng去芦,茯苓Poria cocos去皮,甘草应为乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis,陈皮Citrus reticulata切丝。剂量折算分别按4.13 g/钱、生姜1 g/片、大枣3 g/个、体积300 mL/盏折算,每服处方药味中人参、茯苓、白术、甘草、陈皮各1.652 g,生姜5 g、大枣6 g,总量为19.26 g;煎煮方法为药味粉碎成50~80目细末,每服加水300 mL,煎至210 mL,去滓食前温服。该方古籍记载主治脾胃虚寒气滞之小儿吐泻不思饮食,经后世医家临证灵活应用,常用于治疗小儿厌食症、消化道炎症、腹泻等疾病。

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的:探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65(NF-κB p65)的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(O-Glc NAc)糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法:建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组(10 g·kg^(-1))、四君子汤高剂量组(25 g·kg^(-1)),通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝癌癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法(IP)检测p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测癌旁组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果:与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平显著下降(P<0.01);p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平显著下降(P<0.01);p65的磷酸化水平显著升高(P<0.01);IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9 m RNA水平显著升高(P<0.01);肝脏质量显著升高(P<0.01);小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降(P<0.01),气盛衰度显著下降(P<0.01)。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平明显升高(P<0.05,P<0.01);p65的O-Glc NAc糖基化修饰水平明显上调(P<0.05,P<0.01);p65的磷酸化水平显著下降(P<0.01);四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β_(1)、VEGFA m RNA水平明显降低(P<0.05,P<0.01);四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9 m RNA水平显著降低(P<0.01),直径>3 mm肿瘤数量显著减少(P<0.01),小鼠肝脏质量明显降低(P<0.05),小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高(P<0.05,P<0.01),气盛衰度显著升高(P<0.01)。结论:四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-Glc NAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-Glc NAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β_(1)、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。

芪黄健脾滋肾颗粒对系统性红斑狼疮患者疗效及STAT3/mTOR信号通路的影响

目的:探讨芪黄健脾滋肾颗粒治疗系统性红斑狼疮(SLE)的临床疗效及对信号转导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(STAT3/m TOR)信号通路的影响,分析其可能作用机制。方法:选取安徽中医药大学第一附属医院2022年5月至2023年5月符合标准的SLE女性患者60例,随机分成对照组和观察组(每组各30例),对照组予以醋酸泼尼松+硫酸羟氯喹口服;观察组在对照组基础上予以芪黄健脾滋肾颗粒口服。连续治疗8周后,评估两组患者治疗前后SLE疾病活动度(SLEDAI)、中医证候积分,比较治疗前后血红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、免疫指标[免疫球蛋白G(Ig G)、C3、C4、CD4^(+)、CD8^(+)]、白细胞介素(IL)-17、IL-23、γ干扰素(IFN-γ)、24 h尿蛋白定量(24 h PRO)、血肌酐(SCr)、STAT3/m TOR通路相关因子[STAT3、磷酸化(p)-STAT3、m TOR蛋白和STAT3、m TOR m RNA]表达变化及不良反应情况。结果:经8周治疗后,观察组临床总有效率为93.33%(28/30),明显高于对照组临床总有效率的70.00%(21/30)(χ^(2)=4.007,P<0.05)。与本组治疗前比较,两组患者SLEDAI、中医证候积分、ESR、hs-CRP、Ig G、CD8^(+)、IL-17、IL-23、IFN-γ、24 h PRO、SCr和STAT3/m TOR通路相关因子表达均显著降低(P<0.01),C3、C4、CD4^(+)显著升高(P<0.01)。与对照组治疗后比较,观察组患者SLEDAI、中医证候积分、ESR、hs-CRP、Ig G、CD8^(+)、IL-17、IL-23、IFN-γ、24 h PRO、SCr和STAT3/m TOR通路相关因子表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),C3、C4、CD4^(+)明显升高(P<0.05,P<0.01)。两组治疗前后均未出现严重不良反应。结论:芪黄健脾滋肾颗粒能有效改善SLE机体炎症反应,降低疾病活动度,改善肾损伤,其机制可能与抑制STAT3/m TOR信号通路调节免疫功能有关。

心力衰竭气虚证动物模型的建立与评价

目的:建立心力衰竭气虚证的病证结合小鼠模型,并对其进行评价。方法:将44只昆明种(KM)小鼠随机分为假手术组、模型组、四君子汤加减组(12.89 g·kg^(-1))。模型组及四君子汤加减组给予主动脉弓缩窄术(TAC)处理,假手术组只穿线不缩窄。采用超声心动图、病理学检测对心力衰竭进行疾病模型判断及药效学评估;从宏观表征、微观生物学、方剂反证3个层面分别对小鼠的一般性体征、体质量、旷场、抓力、线粒体超微结构等宏、微观表征进行采集,并测定线粒体分裂、融合蛋白表达,以判断证候类型。结果:TAC术后8周,相较于假手术组,模型组心脏左室射血分数(LVEF)显著降低(P<0.01),四君子汤加减可显著改善小鼠LVEF(P<0.05)。心脏苏木素-伊红(HE)染色结果显示,模型组出现炎性细胞浸润及血管壁增厚,四君子加减可显著改善炎性细胞浸润。在6~8周,相较于假手术组及四君子汤加减组,模型组小鼠出现显著的毛发不齐,毛发枯黄、活跃度降低及精神萎靡的情况。同时与假手术组比较,模型组体质量增长值明显降低(P<0.05);与模型组比较,四君子汤加减组体质量增长值明显上升(P<0.05)。在6~8周,与假手术组比较,模型组旷场距离及旷场速度均明显下降(P<0.05),而四君子汤加减组在第8周明显改善旷场距离及旷场速度(P<0.05)。在6~8周,与假手术组比较,模型组抓力最大值明显下降(P<0.05),而四君子汤加减组TAC术后8周抓力最大值明显增加(P<0.05)。腓肠肌透射电镜显示,模型组肌组织基质不均匀,线粒体肿胀,体积变大,基质溶解,嵴缺失,空泡化;四君子汤加减组可改善线粒体肿胀,嵴断裂,基质空化。蛋白免疫印迹法(Western blot)结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠腓肠肌分裂蛋白动力相关蛋白1(DRP1)表达显著增高(P<0.01),线粒体融合素1(MFN1)表达明显降低(P<0.05)。同时与模型组比较,四君子汤加减组小鼠腓肠肌分裂蛋白DRP1表达明显降低(P<0.05),MFN1表达显著升高(P<0.01)。结论:TAC术后小鼠6~8周出现显著的气虚证候表现,同时伴随腓肠肌线粒体形态功能异常,而四君子汤加减可显著改善这一过程。

基于网络药理学与实验验证探讨四君子汤与痛泻要方“同病异治”溃疡性结肠炎的作用机制

目的:基于网络药理学挖掘并预测四君子汤与痛泻要方同病异治抗溃疡性结肠炎(UC)的作用靶点及相关信号通路,并研究其作用机制。方法:GEO数据库筛选UC患者差异表达基因;中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得复方化学成分及对应靶点;构建中药复方调控网络;绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,预测核心基因;进行富集分析。用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC小鼠模型,小鼠随机分为正常组、UC组、四君子汤组、痛泻要方组与美沙拉嗪组,连续给药14 d,进行疾病活动指数(DAI)评分;测算血液流变学特征值;检测血清白细胞介素-6(IL-6)、组织因子(TF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)含量变化;测算核转录因子(NF)-κB抑制因子蛋白激酶α(IKKα)、NF-κB、HIF-1α、血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的相对表达量。结果:通过网络药理学分析获得两复方与UC交集基因共44个,包含17个共性基因。HIF-1通路、缺氧反应等为两复方治疗UC潜在共性靶点。结果显示两复方能够显著降低DAI评分;显著提高血流灌注量、血细胞移动速度,降低移动红细胞浓度;显著降低IL-6、TF、HIF-1α的水平;显著降低IKKα、NF-κB、HIF-1α、VEGF mRNA的表达量。结论:HIF-1通路及相关靶标可能为两复方发挥同病异治作用的共性靶点,四君子汤长于行气改善肠组织缺氧状态,痛泻要方长于活血促进肠黏膜微循环。

四君子汤加味治疗克罗恩病的临床疗效和对炎症因子的调节作用

目的：观察四君子汤加味治疗克罗恩病的临床疗效，探讨其对炎症指标的调节作用。方法：将88例克罗恩病患者随机分为观察组和对照组，每组各44例，对照组给予西药常规治疗，观察组在西药常规治疗的基础上予以四君子汤加昧治疗，在观察周期8周结束后比较两组临床缓解率和有效率、中医证候疗效、疾病活动评分、炎症程度指标和炎症细胞因子情况并评价安全性。结果：治疗后，观察组临床缓解数和缓解率较对照组显著升高（P〈0．01）；在中医证候疗效方面，观察组总有效人数和有效率较对照组显著升高（P〈0．01）；观察组临床缓解数和缓解率较对照组明显升高（P〈0．05）；观察组无效数和无效率较对照组显著降低（P〈0．01）。与本组治疗前相比，两组患者简化克罗恩病疾病活动指数（CDAI）评分项目，红细胞沉降率（ESR），C反应蛋白（CRP）均较本组治疗前显著降低（P〈0．01）；治疗后，观察组以上3个指标均较对照组降低（P〈0．05）。与本组治疗前相比，两组患者白细胞介素（IL）-6，肿瘤坏死因子（TNF）-α和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）均较本组治疗前降低（P〈0．01）；治疗后，观察组3个指标均较对照组低（P〈0．05）。两组患者不良反应发生较少且轻微，两组患者不良反应发生率相比差异不明显。结论：中药四君子汤加味联合西药常规药物治疗不仅可以更好地改善疾病症状，也可以明显改善疾病炎症状态，且安全性良好，临床使用可以取得更好的疗效。

四君子汤含药血清调控hTERT,TRF1,Tankyrase表达及对UCAC的影响

目的：应用四君子汤含药血清干预肠癌SW480细胞,观察人端粒酶逆转录酶（hTERT）,端粒结合因子1（TRF1）,端锚聚合酶（Tankyrase）mRNA及蛋白的表达变化,探讨其防治溃疡性结肠癌相关癌变（UCAC）的可能机制。方法：体外培养肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、四君子汤含药血清、美沙拉嗪含药血清干预,将经过干预后的SW480细胞,采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测肠癌SW480细胞中hTERT,TRF1及Tankyrase mRNA和蛋白表达水平。结果：与空白血清组比较,四君子汤（2.16,4.32,8.64 g·kg^-1）含药血清组和美沙拉嗪含药血清组均能降低hTERT,TRF1,Tankyrase mRNA表达（P〈0.05）;与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤（4.32,8.64 g·kg^-1）含药血清组明显降低hTERT,TRF1 mRNA表达（P〈0.05）,四君子汤（2.16,4.32,8.64 g·kg^-1）含药血清组Tankyrase mRNA表达明显升高（P〈0.05）。与空白血清组比较,四君子汤（2.16,4.32,8.64 g·kg^-1）含药血清组和美沙拉嗪含药血清组hTERT,TRF1蛋白表达均降低（P〈0.05）,美沙拉嗪含药血清组Tankyrase蛋白表达降低（P〈0.05）;四君子汤含药血清组Tankyrase蛋白表达呈下降趋势,但无统计学差异;与美沙拉嗪含药血清组比较,四君子汤（8.64 g·kg^-1）含药血清组hTERT蛋白表达明显降低（P〈0.05）,四君子汤（4.32,8.64 g·kg^-1）含药血清组TRF1蛋白表达明显降低（P〈0.05）,四君子汤（2.16 g·kg^-1）含药血清组Tankyrase蛋白表达明显升高（P〈0.05）。结论：四君子汤含药血清可能通过下调hTERT,TRF1,Tankyrase表达,抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,达到防治UCAC的作用。

化瘀祛痰方对血管性痴呆的保护作用机制探讨

目的:研究化瘀祛痰方对血管性痴呆(VD)沙鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制是否与钙离子-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路相关。方法:将健康沙鼠40只,随机分为假手术组,模型组,化瘀祛痰方低、中、高(5.35,10.7,21.4 g·kg^-1)剂量组,每组8只,模型组及化瘀祛痰三组参考Levine法对全部沙鼠进行侧颈总动脉结扎再灌注法造VD模型;假手术组则不封闭颈部动脉,其他操作同手术组。术后沙鼠给予相应药物灌胃2次/日,21 d后进行水迷宫实验考察沙鼠的空间学习记忆能力。蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化分别测定沙鼠脑组织海马体的磷酸化(p)-Ca MKⅡ/Ca MKⅡ,p-CREB/CREB,BDNF蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组沙鼠的上台潜伏期和平台穿梭次数明显降低,p-CaMKⅡ/Ca MKⅡ,p-CREB/CREB,BDNF蛋白表达均明显降低(P<0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组沙鼠的上台潜伏期和平台穿梭次数明显升高,其中化瘀祛痰方中以高剂量组效果最为明显(P<0.01),化瘀祛痰方可以有效的保护CA1区锥体细胞,明显上调p-CaMKⅡ/Ca MKⅡ,p-CREB/CREB,BDNF蛋白的表达(P<0.01)。结论:化瘀祛痰方改善了血管性痴呆沙鼠的学习和记忆能力,作用机制可能与Ca MKⅡ/CREB/BDNF信号通路的激活相关。

四君子汤对脾虚证胃肠动力障碍大鼠胃平滑肌CaM-MLCK信号通路的机制探讨

目的：通过实验探讨脾虚证胃肠动力障碍（gastrointestinal dysfunction,GID）的发病及四君子汤干预的作用机制。方法：将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组和西药组,运用碘乙酰胺灌服＋小平台站立＋饥饱失常法塑造脾虚证GID动物模型,随后给予中药组四君子汤6.3 g·kg^（-1）和西药莫沙必利0.45 mg·kg^（-1）灌胃,通过胃排空测定、蛋白免疫印迹法（Western blot）,免疫组化法,实时荧光定量PCR法（Real-time PCR）及Mg^（2＋）-ATPase活性检测对各组大鼠胃排空率及钙调素（CaM）-肌球蛋白轻链激酶（MLCK）通路改变进行检测。结果：模型组大鼠胃排空率较正常大鼠低（P〈0.01）,平滑肌CaM,MLCK蛋白表达量,MLCK mRNA及MLCK活性升高（P〈0.05,P〈0.01）;四君子汤干预后大鼠胃排空率升高（P〈0.05）,平滑肌Ca M,MLCK蛋白,MLCK mRNA表达量及MLCK活性升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论：脾虚证GID大鼠存在Ca M-MLCK信号通路改变,四君子汤可能通过调节该信号通路舒缓胃平滑肌高张力而间接促进胃肠动力。

基于网络药理学的四君子汤作用机制分析

目的:采用网络药理学方法探讨四君子汤的功效物质基础和配伍机制。方法:依托中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索四君子汤全方4味中药的化学成分、作用靶点、相关疾病。进而构建化合物-靶点网络,靶点-疾病网络,蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,靶点-通路网络,研究四君子汤作用机制。结果:通过筛选得出27个化合物,相应靶点93个、相关疾病215种。PPI网络包含68个靶点,关键靶点涉及FOS,ESR1,AR,PPARG等。基因本体(GO)条目121个,其中生物过程相关的条目96个,分子功能相关的条目13个,细胞组成相关的条目12个。京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路3条,涉及神经活性受体-配体相互作用信号通路、钙离子信号通路、癌症信号通路。结论:本研究结果初步验证了四君子汤的基本药理作用及其机制,并为进一步深入揭示其作用机制奠定了良好基础。

基于MCT4/CD147探讨四君子汤加减改善酸性微环境逆转胃癌前病变的效应机制

目的:观察四君子汤加减治疗胃癌前病变(GPL)模型大鼠胃黏膜乳酸水平及单羧酸转运蛋白1(MCT1),单羧酸转运蛋白4(MCT4)和细胞外基质金属蛋白酶诱导物(CD147)表达的影响。方法:将74只SD雄性大鼠随机分为正常组12只,造模组62只。采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)-氨水复合造模法诱导制作GPL大鼠模型,于第9周将造模组大鼠随机分为模型组,叶酸组(2.7 mg·kg^(-1)),四君子汤加减高、中、低剂量组(12.6,6.3,3.15 g·kg^(-1)),每组12只,灌胃治疗持续12周,观察大鼠一般情况。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃黏膜组织病理学改变;化学比色法检测胃黏膜组织乳酸含量;免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胃黏膜组织MCT1,MCT4,CD147蛋白和mRNA表达。结果:四君子汤加减可显著改善GPL大鼠胃黏膜上皮腺体结构、排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织乳酸含量显著升高(P<0.01),MCT1,MCT4,CD147蛋白与mRNA表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,四君子汤加减各剂量组乳酸含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高、中、低剂量组MCT4和CD147蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高、中剂量组MCT4 mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),四君子汤加减高剂量组CD147mRNA表达明显降低(P<0.05)。四君子汤加减对MCT1无显著调控作用。结论:四君子汤加减可显著改善GPL模型大鼠胃黏膜上皮异常组织病理学表现,其机制可能与下调MCT4和CD147过度表达,抑制乳酸外流,改善胃黏膜上皮酸性微环境有关。

补阳还五汤合四君子汤加减治疗中风后疲劳气虚血瘀证和抗氧化及抗炎的作用

目的:评价补阳还五汤合四君子汤加减联合针刺治疗中风后疲劳(PSF)气虚血瘀证及抗氧化和抗炎作用。方法:将144例患者根据随机数字表法,按1∶1分为对照组和观察组各72例。试验期间对照组脱落/失访和剔除病例分别有4例和2例,最终完成66例;观察组脱落/失访和剔除病例分别有2例和3例,最终完成67例。对照组采用针刺治疗,每日1次,6次/周;和口服葛芪通脉颗粒,10 g/次,3次/d;观察组针刺同对照组,并内服补阳还五汤合四君子汤加减,1剂/d。两组疗程均为连续治疗4周。进行治疗前后疲劳严重度量表(FSS),脑卒中专用生活质量量表(SS-QOL),气虚血瘀证,神经功能缺损(NIHSS)和日常生活能力(ADL)评分;检测治疗前后超氧化物歧化酶(SOD),同型半胱氨酸(Hcy),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)水平;进行安全性评价。结果:观察组疾病疗效优于对照组(Z=2.118,P<0.05);观察组中医证候疗效优于对照组(Z=2.046,P<0.05);观察组患者FSS和气虚血瘀证评分均低于对照组(P<0.01);观察组SS-QOL和ADL评分均高于对照组(P<0.01),NIHSS评分低于对照组(P<0.01);治疗后观察组GSH-Px和SOD水平均高于对照组(P<0.01),IL-1β,IL-6,Hcy,CRP,TNF-α和MDA水平均低于对照组(P<0.01)。两组患者均未发现与药物相关安全性问题。结论:采用补阳还五汤合四君子汤联合针刺治疗PSF气虚血瘀证患者,具有抗氧化和抗炎作用的效果,可明显减轻疲劳程度和神经功能缺损程度,提高日常生活能力和生活质量,临床疗效显著且安全,值得进一步的研究与应用。

四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织ERK1/2,Akt,Bax表达的影响

目的：观察四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）,蛋白激酶B（Akt）,细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（Bax）的影响,探讨其保护神经细胞可能作用机制。方法：将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、四君子汤加减低、中、高剂量组（3.69,7.38,14.76 g·kg-1）。采用线栓法制备大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,治疗7 d后处死,取大鼠缺血侧脑组织,运用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）,磷酸化Akt（p-Akt）,Bax蛋白含量。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）测定脑缺血再灌注后脑组织内ERK1/2,Akt,Bax mRNA的表达变化。结果：与假手术组比较,模型组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达显著下调（P〈0.01）;Bax蛋白及mRNA表达显著上调（P〈0.01）;与模型组比较,四君子汤加减低、中、高剂量组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达明显上调,Bax蛋白及mRNA表达明显下调,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：四君子汤加减可能通过上调p-ERK1/2,p-Akt,下调Bax蛋白表达发挥脑保护作用。

加味四君子汤通过调控Fibulin-5,p-Akt表达抗脑缺血大鼠神经细胞失巢凋亡机制

目的:探讨加味四君子汤对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤后缺血侧海马区脑组织纤维蛋白-5(Fibulin-5),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达及对神经细胞失巢凋亡的影响。方法:将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组(3.2 mg·kg^(-1)),加味四君子汤高、中、低剂量组(19.08,9.54,4.77 g·kg^(-1))。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,7 d后处死大鼠,处死前进行神经功能缺损评分,采用苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学观察,原位末端标记法(TUNEL)染色检测神经细胞凋亡指数,免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺血侧海马区脑组织Fibulin-5及p-Akt蛋白表达情况。结果:神经功能缺损评分结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05,P<0.01)。免疫组化结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达,神经细胞凋亡指数均明显增高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显增加(P<0.05,P<0.01),神经细胞凋亡指数均明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组Fibulin-5,p-Akt蛋白相对表达显著下调(P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组Fibulin-5,p-Akt蛋白表达均明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:加味四君子汤可能通过稳定神经元细胞外基质(ECM)Fibulin-5,从而增加了ECM对细胞的黏附作用,促进p-Akt蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,保护脑缺血损伤。

四君子汤加味联合热敏灸对慢性阻塞性肺疾病稳定期肺脾气虚型患者血清及呼出冷凝液中IL-17,IL-22,IL-1α,Cys-C的影响

目的:观察四君子汤加味联合热敏灸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期(肺脾气虚型)患者血清及呼出冷凝液(EBC)中白细胞介素-17(IL-17),白细胞介素-22(IL-22),白细胞介素-1α(IL-1α),血清胱抑素-C(Cys-C)的影响。方法:选取2019年1月到2019年6月江西省中医院肺病科及热敏灸科符合纳入标准和排除标准的住院COPD稳定期肺脾气虚型患者共120例,采用随机分配的方法用随机数字表分为中药组、热敏灸组、对照组,3组均按照指南予以吸氧、支气管舒张剂等基本治疗,中药组予四君子汤加味治疗,热敏灸组在中药组的基础上予以热敏灸疗法,对照组予以安慰剂治疗。3组均连续治疗3个疗程,20 d/疗程。3个疗程后,比较3组患者临床疗效,第1秒用力呼气容积(FEV1),第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%),用力肺活量(FVC),血清及EBC中IL-17,IL-22,IL-1α,Cys-C的水平。结果:治疗前三组患者的一般临床资料,肺功能水平(FEV1,FEV1%,FVC),血清及EBC中IL-17,IL-22,IL-1α,Cys-C的水平比较无统计学差异。经3个疗程治疗后,临床有效率中药组优于对照组(P<0.05),热敏灸组优于中药组(P<0.05),且显著优于对照组(P<0.01)。与本组治疗前比较,3组患者的FEV1,FEV1%,FVC水平均明显升高(P<0.05),证候评分水平,血清及EBC中IL-17,IL-22,IL-1α,Cys-C水平均明显降低(P<0.05);其中中药组优于对照组,热敏灸组优于中药组(P<0.05),且显著优于对照组(P<0.01)。结论:四君子汤加味联合热敏灸通过激发人体经气,提升人体免疫力,抑制炎症细胞因子,降低COPD患者血清及呼出冷凝液(EBC)中IL-17,IL-22,IL-1α,Cys-C水平,减缓炎症反应的发生,增加肺容量,改善COPD患者的通气功能,提升COPD患者的肺功能,从而有效的缓解COPD患者胸闷气喘等症状,进而提高临床疗效。

四君子汤合四磨汤加减治疗出口梗阻型便秘吻合器经肛门直肠切除术后的临床疗效

目的:观察四君子汤合四磨汤加减治疗出口梗阻型便秘(OOC)吻合器经肛门直肠切除术后(STARR)的临床疗效。方法:124例患者随机按数字表法分为对照组和观察组各62例。对照组术后给予芪蓉润肠口服液,20 mL/次/,3次/d;观察组术后给予四君子汤合四磨汤加减内服,1剂/d。两组疗程均连续治疗4周,并进行8周随访。分别于手术前、治疗后2周,4周、随访8周进行便秘主要症状评分和Longo ODS评分;于手术前和治疗后4周,进行超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和便秘患者生存质量自评量表(PAC-QOL)评价,并进行肛门直肠测压,记录肛管静息压(ARP),肛管最大收缩压(MSP),直肠排便压力(RSP),初始感觉阈值(FSV),排便感觉阈值(CRS)和最大耐受容量(MTV)等指标;随访记录并发症发生率、复发率和排便正常率;术后4周进行满意度评价和安全性评价。结果:治疗后4周,观察组患者临床疗效优于对照组(Z=2.096,P<0.05);治疗后2周,4周和随访8周,观察组便秘主要症状积分和Longo ODS评分均低于对照组(P<0.01);观察组患者ARP,FSV,FSV,CRS均低于对照组(P<0.01),MSP和RSP均高于对照组(P<0.01);观察组并发症发生率、复发率分别为20.97%(13/62)和4.84%(3/62),分别低于对照组的39.71%(24/62)和16.13%(10/62)(P<0.05);观察组排便正常率为91.94%(57/62),高于对照组的80.65%(50/62),组间差异无统计学意义;观察组PAC-QOL总分和各因子评分均低于对照组(P<0.01);观察组SOD水平高于对照组,MDA水平低于对照组(P<0.01);未发现干预中药相关不良反应。结论:四君子汤合四磨汤加减用于出口梗阻型便秘STARR术后患者,可进一步减轻便秘症状和病情程度,提高生活质量,降低术后并发症发生率和复发率,并可改善肛门直肠动力学指标和氧化应激指标,提高临床疗效。

加味四君子汤对H22荷瘤小鼠移植瘤血管生成的影响

目的:观察加味四君子汤对H22荷瘤小鼠移植瘤血管生成的影响,并探讨其机制。方法:小鼠成瘤实验观察加味四君子汤对荷瘤小鼠的抑瘤和对癌周血管生长的影响。苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化(IHC)检测荷瘤小鼠移植瘤中血管分布水平和血管内皮标记物(CD31)的表达水平。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF),血管内皮生长因子受体2(VEGFR2),肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达。结果:加味四君子汤低、中、高剂量组(ig,11. 83,23. 66,47. 32 mg·kg^(-1)·d^(-1))抑瘤率分别达到29. 97%,59. 80%,82. 34%。与模型组相比,加味四君子汤中、高剂量组的平均瘤重明显降低(P <0. 05)。通过观察癌周血管数及形态发现,加味四君子汤中、高剂量组癌周血管数较模型组有所减少(P <0. 05),且血管管腔较窄。HE染色显示加味四君子汤中、高剂量组移植瘤中的血管分布均少于模型组。免疫组化显示加味四君子汤各剂量组的CD31阳性表达量均低于模型组(P <0. 01)。RT-PCR结果显示加味四君子汤中、高剂量组移植瘤VEGF,VEGFR2,TNF-αmRNA表达量均低于模型组(P <0. 01)。结论:加味四君子汤能够抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长,并抑制移植瘤血管新生,这可能与降低TNF-α,VEGF,VEGFR2的表达水平有关。

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg^(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P<0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P<0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P<0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P<0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。

四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

目的:探讨中药复方四君子汤通过调节NKG2A的表达影响自然杀伤(NK)细胞抗结肠癌的作用。方法:分离、纯化来自健康人外周血NK细胞进行培养,分别构建人NK细胞单培、HCT116细胞单培和NK细胞与HCT116细胞共培模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测NK细胞中自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、白细胞介素(IL)-15及结肠癌细胞中组织相容性白细胞抗原E(HLA-E)mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NK细胞中IL-15分泌;噻唑蓝(MTT)比色法筛选IL-15的浓度,检测四君子汤和IL-15对NK细胞活性和共培模型中HCT116细胞活性的影响,Real-time PCR检测四君子汤和IL-15对NK细胞中NKG2A和HCT116中HLA-E mRNA表达的影响;使用Anti-NKG2A抗体(M)阻断NKG2A/HLA-E通路,MTT比色法检测共培模型中HCT116细胞增殖情况。结果:与单培组比较,NK细胞和HCT116细胞相互作用引起NK细胞的NKG2A和HCT116中的HLA-E mRNA表达均上调(P<0.05);IL-15 mRNA表达和分泌也增加(P<0.05);IL-15可增强NK细胞活性和抗结肠癌作用(P<0.01),也可上调NKG2A表达(P<0.05);与空白组比较,四君子汤组、四君子汤+IL-15组的NK细胞活性和抗结肠癌作用进一步增加(P<0.01),Real-time PCR结果显示,与空白组比较,四君子汤组和四君子汤+IL-15组中NK细胞NKG2A表达下调(P<0.05),共培模型中四君子汤组HCT116中HLA-E表达下调(P<0.01);与相应未加M组比较,M组与IL-15+M组HCT116细胞增殖被抑制(P<0.01)。结论:NK细胞与结肠癌细胞相互作用可引起NKG2A-HLAE通路活化导致NK功能受损,四君子汤可抑制该信号激活从而恢复NK细胞抗结肠癌作用。