水飞蓟Silybum marianum (L.) Gaertn.试管苗组织培养研究

本文报道了采用组织培养方法首次成功地获得了水飞蓟试管苗。试验结果表明：在选用的１／２ＭＳ、ＭＳ和改良ｗｈｉｔｅ３种愈伤组织诱导培养基中，筛选出１／２ＭＳ＋ＮＡＡ１．０＋ＢＡ０．５＋ＺＴ０．５为适宜的培养基。选用的芽诱导培养基为：１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．２＋ＢＡ２．０；不定根诱导培养基为：ＭＳ＋ＮＡＡ１．０。在根、节间、节部和叶等４种外植体中，筛选出节部为适宜的外植体。

HPLC法同时测定水飞蓟果实不同部位及其提取物中水飞蓟亭等7种黄酮类成分的含量

目的建立水飞蓟果实、果皮、果仁及其提取物中花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B等7种黄酮类成分的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18（200 mm×4.6 mm,5μm）柱,以甲醇-水-甲酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^-1,检测波长为288 nm,柱温为40℃,进样量为20μL。结果花旗松素、水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的质量浓度分别在1.00-25.0、3.96-99.0、1.96-49.0、4.00-100、4.08-102、2.00-50.0和1.04-26.0 mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 0）,平均加样回收率为96.4%-103.3%,RSD均小于3.1%。不同水飞蓟果实、果皮、果仁及提取物中7种成分含量及总水飞蓟素含量均显示出一定差异。结论本法可为水飞蓟药材及其提取物质量的综合评价提供准确的定量方法。

水飞蓟提取物的光稳定性研究

目的研究水飞蓟90%乙醇提取液中主要成分的光稳定性。方法在光照前后、不同光照强度和时长、不同含氧量的条件下,对水飞蓟壳90%乙醇提取液中的主要成分进行检测,通过LC-MS法对避光和强光照射5 d的提取液样品进行质谱对比分析,强光照射5 d后的提取液样品用半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果水飞蓟亭A、水飞蓟亭B、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B对光照均稳定,水飞蓟宁在光照条件下发生氧化反应,具有光不稳定的特点。结论水飞蓟宁在光照条件下不稳定,其氧化产物为silyamandin。

水飞蓟果实、果皮及其提取物质量评价法的研究

目的建立水飞蓟果实、果皮及其提取物综合质量评价方法。方法用UV法在 2 87nm下测定水飞蓟素的含量 ;并以HPLC法测定指标成分水飞蓟宾的含量 :采用HypersilC1 8(2 5 0mm×4 6mm ,5 μm)色谱柱 ;以甲醇 乙腈 磷酸二氢铵缓冲液 (2 4∶2 4∶5 0 ,pH =5 )为流动相 ;流速为1 0mL min ;柱温为 4 0℃ ;检测波长为 2 87nm。结果UV法和HPLC法线性分别在 8 0 4～4 0 2 μmol L和 0 2 76～ 1 3 8μg;加样回收率 :UV法 98 5 % ,HPLC法 97 3 % ;水飞蓟果实、果皮中水飞蓟素和水飞蓟宾含量分别为 3 88%和 1 3 2 %、8 0 1 %和 2 77% ;3种水飞蓟提取物中水飞蓟素含量均在 80 %以上 ,但水飞蓟宾含量在 2 8 7%～ 3 2 8% ,有明显差异。结论

水飞蓟萌发期和苗期对盐胁迫的生长生理响应

为了探讨水飞蓟萌发期和苗期对盐胁迫的响应,比较不同水飞蓟类型耐盐性的强弱,以黑色果皮(SD)和白色果皮(HW)2个类型水飞蓟为材料,用不同浓度NaCl(0、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%)溶液处理种子和幼苗,观察种子发芽势、发芽率和芽苗和幼苗生长及其生理生化特征。结果表明:(1)NaCl胁迫下,水飞蓟种子发芽率、发芽势下降,芽苗生长表现为低浓度促进高浓度(HW为≥0.5%,SD为≥0.3%)抑制,且盐分对子叶长、胚轴长和鲜重影响较大,对干重无显著影响。(2)盐胁迫下水飞蓟幼苗叶片中MDA含量升高,光合色素(Chl a、Chl b、Car)含量下降,幼苗生长表现为低浓度促进高浓度(HW为≥0.9%,SD为≥0.7%)抑制;植株体内可溶性蛋白、可溶性糖含量及保护酶(SOD、POD、CAT)活性先升高后降低,脯氨酸含量则持续增加,其中保护酶活性在0.7%NaCl处理下较对照显著下降,可溶性蛋白和可溶性糖含量在0.9%NaCl处理下较对照显著下降。研究发现,在水飞蓟种子萌发期,盐分主要通过改变种子吸涨能力来影响芽苗生长;在苗期,水飞蓟幼苗主要通过提高渗透物质含量和保护酶活性来缓解盐分造成的伤害;水飞蓟萌发期和苗期耐盐性有所差别,萌发期耐盐能力明显低于苗期,2个类型水飞蓟耐盐性强弱表现为白色果皮类型>黑色果皮类型。

超声辅助双水相体系提取水飞蓟中水飞蓟宾的工艺优选

为优化水飞蓟中水飞蓟宾的提取工艺,以乙醇体积分数、硫酸铵用量、料液比和超声时间为自变量,水飞蓟宾含量为因变量,采用星点设计-响应面法优选超声辅助双水相体系提取工艺参数。研究结果表明,最佳工艺条件为:乙醇体积分数为57%,硫酸铵的用量为0.26 g·m L^(-1),料液比为25 m L·g-1,超声时间为19 min,水飞蓟宾含量为10.18 mg·g-1。该工艺适用于水飞蓟中水飞蓟宾的提取,方法简单,预测性较好。

水飞蓟在我国的栽培研究进展

就水飞蓟在我国近年来栽培方面的研究状况作一概述,并提出以后栽培研究的关键问题及展望。

水飞蓟的个体发育形态学研究

[目的]研究水飞蓟的个体发育形态学特征。[方法]在实验室内培育幼苗发育研究材料,成株形态发育及解剖材料以露地栽培获得,采用观察记录法研究水飞蓟的外部形态和生长发育节律,然后采用徒手切片法和临时装片法观察叶和根新鲜状态下的结构,采用常规石蜡切片技术研究幼苗、根、茎和叶的形态学特征。[结果]种子的萌发方法为子叶出土萌发,适宜浅播;幼苗及成株营养器官结构为典型的草本双子叶植物结构;聚药雄蕊稍短于花冠裂片;雌雄蕊异熟明显,生育期为125～140 d。[结论]该方法对水飞蓟的个体发育形态学特征进行了研究,为水飞蓟规范栽培提供了依据。

水飞蓟的经济价值和栽培技术

水飞蓟是集药用及观赏于一体的经济型草本植物。由于其播期早、成熟期短、要求积温不高、生产成本较低,已成为农民调整种植结构、发展经济作物的首选,也成为了北药发展的一项重要产业。针对这种形势,分析了水飞蓟的经济价值,总结了水飞蓟的综合栽培技术,以期为生产提供参考。

水飞蓟种子生物学特性初探

[目的]研究水飞蓟种子的生物学特性。[方法]以来自3个栽培地点的水飞蓟种子为试验材料,分别进行种子大小和干粒重的测定,并制作种子半薄切片,研究不同温度下种子的萌发情况。[结果]种子(实际为瘦果)由外皮(果皮和种皮)和胚2部分组成。外皮分5层,外侧4层为果皮,内侧1层为种皮。种胚发育完善,没有胚乳,子叶主要储藏物质为脂肪;25℃为种子萌发的适宜温度,少部分种子具有休眠现象。[结论]该研究积累了水飞蓟种子(果实)的基础生物学资料,为水飞蓟的栽培生产、分类、生药鉴定提供了理论依据。

水飞蓟全草不同部位的组成特征

为了考察水飞蓟全草不同部位的组成特征,采用不同的提取溶剂对水飞蓟的幼草、根、茎、叶、花、种子等不同部位提取后,通过高效液相色谱法(HPLC)进行分析。以Hypersil ODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)为分离柱,以50mmoL/L磷酸二氢钾溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,检测波长为254nm。在此条件下,水飞蓟不同部位的样品得到了很好的分离,发现不同部位组成差别很大,得到的组分数从幼草、种子、花、叶、根、茎依次减少。水飞蓟不同部位所含的组分极性有很大差别,不同提取方法得到的样品组成也有较大差别。实验结果可为水飞蓟全草的指纹图谱构建及应用开发提供实验依据。

中药水飞蓟对鸡脂肪肝综合症防治效应的研究

中药水飞蓟(Silybum Marianum(L)Gaertn)具有稳定肝细胞的作用。经反复实验证明,对减轻肝脂肪变性效果明显。临床应用降低血液胆固醇及降脂率分别为41.9％和51.5％,对鸡的脂肪肝综合症有明显的防治作用,可使66.7％的鸡免患脂肪肝,治愈率达80.0％,显效率为13.3％,无效率为6.7％。此药是防治鸡脂肪肝综合症较为理想的药物。

水飞蓟有效成分的研究──水飞蓟宾的提取、分离鉴定

采用有机溶剂和柱层析两种方法提取分离水飞蓟果实中的有效药理成分，经定性反应和薄层层析等方法鉴定，主要药理成分为水飞蓟宾（Ｓｉｌｙｂｉｎ）。４００ｇ水飞蓟油渣用两种方法分别提取３．８４ｇ（得率０．９６％）和２．６９（得率０．６５％）水飞蓟宾。

水飞蓟组织培养的研究进展

对水飞蓟组织培养中外植体来源、愈伤组织诱导、再生植株诱导、毛状根诱导以及组织培养物中活性成分等方面进行了综述,以期为解决水飞蓟的资源需求以及以组织培养为基础的基因与代谢工程研究提供理论及技术指导。

外源NO对NaCl胁迫下水飞蓟种子萌发和幼苗生长生理的影响

目的研究外源NO对NaCl胁迫下水飞蓟种子萌发、幼苗生长生理的影响。方法用0.05～0.60 mmol/L亚硝基铁氰化钠(SNP)溶液浸种,在0.7%NaCl胁迫下发芽,观察种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数。并观察幼苗生长情况,检测叶片中丙二醛(MDA)、光合色素和渗透性物质量,以及保护酶活性。结果 0.7%NaCl胁迫下,水飞蓟种子萌发和幼苗生长受到显著抑制,用0.05～0.60 mmol/L SNP溶液浸种能促进水飞蓟种子萌发和幼苗生长,降低叶片中MDA量,增加光合色素(叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量和类胡萝卜素)和渗透性物质(可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸)量,提高保护酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)]活性。结论 0.05～0.60 mmol/L SNP浸种能提高水飞蓟种子和幼苗的抗盐能力。不同栽培类型水飞蓟对SNP敏感度不同,其中,0.10 mmol/L SNP对白色种皮处理效果最好;0.40 mmol/L SNP对黑色种皮处理效果最好。

外源水杨酸对盐胁迫下水飞蓟种子萌发及幼苗生理特性的影响

以水飞蓟为试材,在100 mmol/L Na Cl胁迫处理下,调查不同浓度(0 mmol/L,0.1 mmol/L,0.2 mmol/L,0.4 mmol/L,0.6 mmol/L与0.8 mmol/L)外源水杨酸(SA)处理对水飞蓟种子萌发、幼苗生长、抗氧化能力和渗透调节能力的影响。结果显示,SA一定程度上能够缓解盐胁迫对水飞蓟种子萌发及幼苗生长的胁迫效应。经0.1 mmol/L、0.2 mmol/L与0.4 mmol/L SA处理,提升了盐胁迫下水飞蓟种子的发芽势、发芽率、发芽指数及活力指数;提高了水飞蓟株高、茎基、主根长度、根直径、干质量与叶片光合色素含量等生长指标;显著提高了超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性以及渗透调节物质含量;降低了膜脂过氧化产物(MDA)与总黄酮含量。但随着SA浓度继续升高其缓解效应随之降低。研究表明:当外源SA浓度为0.1~0.4 mmol/L时,尤其以0.4 mmol/L处理效果最佳,而SA≥0.6 mmol/L时未见明显缓解甚至可能加剧盐胁迫造成的伤害,因此适当浓度的外源SA可通过提高水飞蓟幼苗叶片光合色素的合成能力保护其光合作用,维持植物正常的生长;同时,通过调节抗氧化与抗渗透胁迫能力缓解盐胁迫对水飞蓟幼苗造成的膜脂过氧化损伤,有效缓解盐害胁迫,提高抗盐性。

水飞蓟悬浮培养体系的建立及不同因子对水飞蓟宾量的影响

目的建立水飞蓟Silybum rnarianum悬浮培养体系,测定不同影响因子对水飞蓟宾量的影响。方法采用正交试验确定水飞蓟悬浮培养体系,采用HPLC法测定水飞蓟宾的量。结果激素配比6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+ZT 1.5 mg/L的MS培养基、光照12 h/d、p H值为7、转数110 r/min,为水飞蓟悬浮培养的最佳生长条件。当水杨酸、壳聚糖、硝普钠质量浓度分别为0.05、3、1μg/L时水飞蓟增长量达到最大值,水飞蓟宾量也达到最大值。结论建立的悬浮培养体系可用于水飞蓟的快速繁殖,适宜质量浓度的壳聚糖和硝普钠利于悬浮细胞的生长及水飞蓟宾的积累。

水飞蓟种子质量检验方法研究

目的研究水飞蓟种子的质量检验方法,为制定水飞蓟种子检验规程和质量分级标准提供依据。方法参考《国际植物种子检验规程》和《中国农作物种子检验规程》的方法对水飞蓟种子的质量进行测定。结果种子的净度分析采用筛风水选法;真实性鉴定采用外观形态比较;用千粒法测定千粒质量;发芽条件为在种子发芽前用自来水冲洗2 h,以双层滤纸为发芽床,在20℃条件下、8 000 lx光照培养,计数时间为4~14 d;用电导率法测定生活力。结论建立研究的水飞蓟种子的质量检验方法简便可靠。

基于系统药理学研究水飞蓟治疗肺癌的作用机制

目的研究水飞蓟Silybum marianum对肺癌的作用及其机制。方法利用中药系统药理学数据库(traditional Chinese medicine systems pharmacology,TCMSP)筛选水飞蓟的活性成分,并利用加权整体相似度法(weighted ensemble similarity,WES)和系统药物靶向工具(systematic drug targeting,SysDT)模型预测候选活性成分的靶点;进行基因本体论生物学过程(gene ontology biological process,GO BP)与京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析揭示靶点所涉及BP以及通路。选取水飞蓟主要活性成分水飞蓟宾进行体内外实验验证,首先验证水飞蓟宾对人肺腺癌H1975细胞与小鼠肺癌LLC细胞的体外抑制率;其次用流式细胞术评估水飞蓟宾对肿瘤细胞系的促凋亡作用;随后在LLC肺癌动物模型进行体内抑瘤验证,并检测瘤内细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CD8+T)的浸润量;最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果经过筛选得到12个活性成分与355个靶点,并构建了活性成分-靶点网络。CCK-8检测结果显示水飞蓟宾能够抑制肺癌细胞的增殖,且呈剂量相关性;体内外流式实验表明水飞蓟宾能通过促进瘤内CD8+T细胞的浸润从而促进癌细胞的凋亡来发挥抗肿瘤作用;水飞蓟宾能够上调肿瘤细胞和肿瘤组织p53蛋白表达水平(P<0.001),下调B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)蛋白表达水平(P<0.05、0.001)。结论水飞蓟主要通过调控凋亡相关通路发挥抗肿瘤作用。

水飞蓟提取物对孕鼠生长和胚胎致畸影响的研究

目的探讨水飞蓟提取物对孕鼠的影响和胎鼠的致畸性。方法实验设阴性对照组和3个实验组,剂量分别为4.00 g/(kg·bw)、2.00 g/(kg·bw)、1.00 g/(kg·bw),对照组为蒸馏水。妊娠的雌性SD大鼠随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,每组15只,称重并编号。受孕的第0 d、7 d、12 d、16 d、20 d称体重,孕鼠于妊娠7 d^16 d每天灌胃给药,妊娠20 d处死,记录着床数、活胎数、死胎数和吸收胎数;测量活胎鼠体重、体长,检查外观有无异常,将每窝1/2的活胎鼠染色、透明,观察骨骼有无异常;另1/2活胎鼠放入Bouins液中,固定2周后做内脏检查。结果各剂量组的各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在本实验条件下,水飞蓟提取物对孕鼠生长和胚胎发育无不良影响和致畸作用。