燕窝蛋白质在模拟胃肠环境中的降解研究

目的:研究燕窝蛋白质在模拟胃肠环境中的降解情况。方法:制备燕窝水提物,分别与等体积的人工胃/肠液混合,37℃消化,按时间梯度0、1、5、10、15、30、60 min准确计时并终止反应,Bradford法检测上清液的蛋白质浓度,SDS-PAGE凝胶电泳方法检测燕窝蛋白质的降解情况。结果:燕窝总蛋白经胃蛋白酶或胰蛋白酶消化后,大部分降解到40 kD以下,部分中高分子量的蛋白质不降解,而且在70 kD左右新增一条蛋白条带。结论:部分中高分子量的燕窝蛋白质具有抗消化性,推测可能以抗原的形式直接作用于肠上皮细胞启动肠道免疫系统发挥疗效。

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原（胶原蛋白）,依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液（胃蛋白酶）消化15min出现较为明显的降解,消化1h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰蛋白酶）消化30min出现较为明显的降解,消化3h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰凝乳蛋白酶）消化1～4h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.

转植酸酶基因玉米中植酸酶蛋白在模拟消化液中的稳定性研究

植酸酶作为应用最为广泛的重要饲料酶制剂之一,明确其在动物消化道环境中的稳定性对于其应用及作用方式的研究具有重要意义。本研究在体外建立了胃、肠两种模拟消化体系,取不同消化时间的样品进行Western杂交,结果显示在模拟胃液中植酸酶蛋白经60 min处理未被消化,而在模拟肠液中处理15 min内被全部消化,表明转植酸酶玉米种子中的植酸酶蛋白在模拟胃液中极难被消化,可稳定存在,在模拟肠液中可被消化。

葛仙米藻胆蛋白的体外消化特性

研究葛仙米藻胆蛋白在体外模拟胃液和肠液的消化产物性质,重点测定不同消化时间产物的可溶性蛋白质、游离氨基含量变化及其抗氧化作用,并利用HPLC法测定消化产物分子质量变化情况。结果表明:在胃液和肠液消化作用下蛋白质含量均呈现下降趋势,而游离氨基含量呈现上升趋势,消化产物较初始产物对ABTS+.和脂质过氧化具有更强的抑制作用,但对.OH的清除能力却有所下降;偏相关分析结果表明,与葛仙米藻胆蛋白消化产物的抗氧化作用紧密相关的是消化产物中的分子质量为6ku和0.2ku的肽类。

异佛司可林在人肝微粒体与人工胃肠液中的代谢与降解

目的研究异佛司可林在人肝微粒体及人工胃肠液中的代谢与降解动力学。方法将异佛司可林与人肝微粒体、人工胃液、人工肠液进行体外共孵育,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人肝微粒体孵育体系中异佛司可林的剩余浓度,高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法测定人工胃液、人工肠液中异佛司可林的剩余浓度。结果异佛司可林在人肝微粒体的t1/2为(34.90±3.42)min,CLint为(16.71±1.64)m L/(kg·min);在人工胃液和人工肠液中的t1/2分别为(46.97±6.46)h和(91.67±8.26)h。结论异佛司可林在人肝微粒体中代谢显著,在人工胃液和肠液中较稳定。

大豆凝集素在模拟猪胃肠环境中的稳定性研究

为研究大豆凝集素在体外模拟猪胃肠环境中的稳定性,将纯品大豆凝集素设为1,2,3,4,5 mg/mL 5个浓度梯度,分别与等体积的模拟胃液或模拟肠液混合（37℃）,按时间梯度15,30,60 s和2,4,8,15,30,60 min准确记时并终止反应,采用SDS-PAGE凝胶电泳和间接抑制ELISA方法定量检测反应体系中剩余的大豆凝集素。结果表明：大豆凝集素在胃蛋白酶反应体系中的剩余量随底物浓度和反应时间的不同都呈显著性变化（P〈0.05）。胃蛋白酶降解大豆凝集素主要发生在反应的初始阶段,随着反应时间的延长降解速率逐渐变慢,但反应一直在进行;随着大豆凝集素浓度的增加,降解速率增大,但彻底降解所需的时间延长,底物浓度从1 mg/mL增加到5 mg/mL,完全降解的时间为9.5-23 min。胰蛋白酶对完整的大豆凝集素不产生降解作用。大豆凝集素在猪消化道内有一定程度的降解,但与大豆凝集素的浓度和通过胃的时间密切相关。

枸橼酸莫沙必利片体外溶出度的研究

目的通过测定进口药的枸橼酸莫沙必利片(商品名:加斯清)及国产样品的体外溶出度,为药品的质量和指导临床合理用药提供科学依据。方法依据国家标准[WS1-(X-287)-2003Z]和进口药品注册标准(JX20080288)的体外溶出度的规定,采用紫外分光光度法分别测定加斯清及国产样品在模拟胃液(0.1 mol/L盐酸)和人工肠液(pH=6.8磷酸缓冲液)中的溶出度。结果加斯清及国产样品在模拟胃液中的溶出度均较好,10 min后溶出度均大于90%;加斯清在人工肠液中的溶出度优于国产样品:45 min时的溶出度大于80%,符合进口药品注册标准(JX20080288),而国产样品A、B、C在人工肠液中60 min时的溶出度均低于50%,不符合进口药品注册标准(JX20080288)。结论加斯清及国产样品在模拟胃液的溶出度均较好,而在人工肠液中的溶出度加斯清优于国产样品。

葵花籽ACE抑制肽的稳定性研究

研究了葵花籽ACE抑制肽在热处理下抑制率和多肽溶液颜色(b*值)变化,以及在模拟胃肠液中的稳定性。实验结果表明:葵花籽ACE抑制肽的稳定性对热和酸碱度很敏感,仅当p H<4.0,加热温度≤40℃,加热时间<2.0 h时,ACE抑制活性才能很好的保持;然而在模拟胃肠液中葵花籽ACE抑制肽的活性比较稳定,不但不会损失反而略微有所上升。

人工胃液和人工肠液中药用炭片对肾衰宁片的吸附作用研究

目的考察人工胃液和人工肠液中药用炭片对肾衰宁片中活性成分的吸附作用。方法采用高效液相色谱法测定肾衰宁片中盐酸小檗碱和丹参素钠的含量;采用药物溶出度仪模拟人体内环境,并计算放置药用炭片前后吸附率。结果盐酸小檗碱、丹参素钠质量浓度线性范围分别为0.0287~28.6800μg/mL和0.7328~73.2800μg/mL,中间精密度、重复性试验、稳定性试验的RSD均小于4%;盐酸小檗碱在人工胃液和人工肠液中的平均加样回收率分别为100.80%(RSD=1.01%,n=9)和100.47%(RSD=1.43%,n=9),丹参素钠分别为100.58%(RSD=1.76%,n=9)和99.85%(RSD=1.92%,n=9),人工胃液中药用炭片对盐酸小檗碱和丹参素钠2h时的吸附率分别达100.00%和96.97%,人工肠液中药用炭片对盐酸小檗碱和丹参素钠4h时的吸附率分别达80.26%和62.64%。结论药用炭片在人工胃液中对肾衰宁片中盐酸小檗碱和丹参素钠有强大的吸附作用,在人工肠液中吸附作用相对较弱,提示服用肾衰宁片与药用炭片应间隔2h以上,或将肾衰宁片制成肠溶制剂,以减少有效物质吸附。

牛蒡燕窝肽复合饮料制备及体外模拟消化特性研究

以牛蒡、经酶解处理后的燕窝为主料,银耳、梨为辅料,研制功能性复合饮料。以感官评价为指标,采用响应面试验优化配方工艺。得到最佳配方为牛蒡浸提液添加量30%、燕窝酶解液20%、银耳浸提液15%、梨浸提液35%和白砂糖11%。采用体外模拟该复合饮料胃肠消化,对其唾液酸、绿原酸、蛋白质、多肽、氨基酸含量和自由基清除率等进行测定。结果发现,消化后抗氧化性和大分子活性成分含量均降低,氨基酸含量明显增加。

转高赖氨酸融合蛋白基因水稻蛋白消化稳定性

以我国自主培育的转高赖氨酸融合蛋白基因水稻(简称转GL基因水稻)为材料,参考中华人民共和国国家标准,通过体外模拟胃/肠液消化实验,研究转GL基因水稻蛋白的消化稳定性。结果表明:质量浓度为5g/L的总蛋白在胃液中2min内完全消化,质量浓度为2g/L的总蛋白在肠液中15s～2min内完全消化;而以5倍于国标规定的质量浓度进行消化时,总蛋白在模拟胃液中60min仍可观察到未降解片段,在模拟肠液中2min内则全部消化;两步法体外模拟消化结果,胃液中极难降解的蛋白片段在经肠液作用5min后,完全被降解。本研究表明,转GL基因水稻蛋白在模拟胃肠液中不具有消化稳定性。

富硒蓝莓全果果酒体外消化特性研究

为分析富硒蓝莓全果果酒的体外消化特性,以非富硒酵母发酵蓝莓全果果酒为对照,对两种果酒在模拟胃肠液消化前后的总多酚含量、抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性及酚酸含量进行测定。结果表明,两种果酒在模拟胃肠液消化后总多酚含量、抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性均有所下降,3.0 h模拟胃液及1.0 h模拟肠液消化后富硒蓝莓全果果酒中总多酚含量是对照的1.28倍,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、超氧阴离子(O2-)自由基清除率及对α-葡萄糖苷酶抑制活性分别是对照的1.27倍、1.85倍、1.07倍、1.18倍。富硒蓝莓全果果酒经模拟胃肠液消化后主要的酚酸为没食子酸(0.98μg/mL)、绿原酸(0.11μg/mL)、芦丁(0.17μg/mL)。富硒蓝莓全果果酒较对照在模拟胃肠液消化后具有更高的抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶活性,具有更强的生物活性。

鸡体内小肠液和模拟小肠液对饲料蛋白质消化的比较研究

本试验旨在比较鸡体内小肠液(ESIF)和模拟小肠液(SSIF)对饲料蛋白质进行仿生消化后残渣中蛋白质分解产物片段分布的差异。采用两样本比较试验设计,其中小肠液分别为ESIF和SSIF,以豆粕、棉籽粕、菜籽粕、玉米蛋白粉和酪蛋白为蛋白质饲料原料的代表性底物。在单胃动物仿生消化系统中,以2种小肠液对每个饲料原料进行仿生消化,每个处理5个重复,每个重复1根消化管。以生理盐水提取残渣的蛋白质,然后进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,使用GS-900成像系统搭配Image Lab进行蛋白质分子量分布计算及采用Quantity One软件进行相似性分析。结果表明:ESIF和SSIF对豆粕、棉籽粕、菜籽粕、玉米蛋白粉和酪蛋白的消化残渣蛋白质分子量分布的相似性分别为69.9%、30.8%、90.1%、77.7%和74.2%(P<0.01)。ESIF消化残渣在13~74 ku低分子量蛋白质的分布上显著高于SSIF(P<0.05),而在104~132 ku高分子量蛋白质的分布上显著低于SSIF(P<0.05),这一差异在棉籽粕上更加明显。由此可见,ESIF与SSIF水解饲料后残渣中蛋白质分子量分布的相似性因饲料来源的不同而呈现较大的差异;ESIF水解饲料后残渣中分子量相对低的蛋白质占比高,而SSIF水解残渣中分子量相对高的蛋白质占比高。

富含纤溶酶豆豉冻干粉的消化性质及抗血栓作用

为研究富含纤溶酶豆豉冻干粉口服的抗血栓作用,以豆豉冻干粉提取液酶活的变化测定模拟胃肠液对该冻干粉的影响,以血块的溶解率测定冻干粉的体外抗血栓作用,并初步确定其中的抗血栓物质。同时还测定了该冻干粉连续灌胃对大鼠凝血系统的影响。结果表明,该冻干粉受模拟胃液影响较大,酶活残留56·21%,在模拟肠液中较稳定,残留酶活大于82·86%。5%豆豉冻干粉提取液对血块的溶解率达40·84%±3·76%,而经热处理的提取液仅为12·48%±2·43%。该冻干粉能延长大鼠血浆凝血酶时间(TT),对活化部分凝血活酶时间(APTT)及凝血酶原时间(PT)无影响。因此,富含纤溶酶豆豉冻干粉宜制成肠溶制剂,具有体内外抗血栓作用,其抗血栓物质主要为豆豉纤溶酶。

不同加工方式降低大黄鱼鱼卵过敏原及其消化产物免疫反应性的比较研究

目的本文以大黄鱼鱼卵为原料,分析比较不同加工方式对大黄鱼鱼卵过敏原及其消化产物免疫反应性的影响。方法采用不同加工方式(美拉德反应、紫外照射、超声联合加热、高温高压)处理鱼卵,制备卵黄蛋白粗提物并进行模拟胃肠液二相消化实验,利用免疫印迹及抑制性ELISA方法对粗提物及消化产物中过敏原的IgG/IgE结合活性进行分析。结果分析不同加工方式处理后卵黄蛋白中过敏原的IgG结合活性,结果发现当抗体稀释倍数为4×104时,检测不到美拉德反应产物与抗体发生特异性结合,而经后三种物理加工方式处理后的粗提物均与抗体有不同程度的免疫反应。此外,分析加工处理及其消化产物中过敏原与患者血清的IgE结合活性,结果显示经不同加工方式处理后,仅有美拉德反应产物的抑制率低于50%;经高温高压处理的粗提物抑制率为65%,但消化后其抑制率降至20%以下。结论在4种不同的加工方式中,美拉德反应能有效地降低大黄鱼鱼卵中过敏原的IgG/IgE结合活性,超声联合加热及高温高压处理明显减弱过敏原消化产物的IgE结合活性,紫外照射对过敏原的影响不明显。

AM79 EPSPS蛋白的体外模拟胃肠液消化稳定性研究

AM79 EPSPS基因是从草甘膦高度污染的土壤中克隆的、具有我国自主知识产权的一个新型抗草甘膦基因,在转基因玉米中过表达能显著提高转基因玉米的草甘膦抗性,具有重要应用价值。为了评价AM79 EPSPS蛋白的食用安全性,本研究参考中华人民共和国国家标准,开展了AM79 EPSPS蛋白的消化稳定性研究。将AM79 EPSPS基因构建到原核表达载体pET-30a上,在大肠杆菌中表达了分子量为48.3 kD的可溶性AM79 EPSPS蛋白。通过Ni-NTA亲和层析方法纯化了AM79 EPSPS蛋白用于体外模拟胃肠液实验。结果表明,AM79 EPSPS蛋白在模拟胃肠液中均在15 s内即被消化,SDS-PAGE和Western蛋白免疫印迹均未检测到蛋白残留,表明AM79 EPSPS蛋白在模拟胃肠液体系中极易被消化。

巴戟甲素在模拟人体胃肠环境中稳定性试验

目的测定巴戟甲素在模拟人体胃肠环境中的稳定性,为口服剂型的选择提供依据。方法采用HPLC-ELSD法,分别测定巴戟甲素在稀盐酸溶液和人工胃液中2 h以及在pH 6.8磷酸盐缓冲液及人工肠液中12 h的稳定性。结果在稀盐酸溶液和人工胃液中温育30 min后,巴戟甲素在两液中只剩下加入量的67.59%和64.85%,120 min后在稀盐酸溶液和人工胃液中分别为加入量的43.31%和50.41%;加入pH 6.8磷酸盐缓冲液及人工肠液中12 h后,巴戟甲素分别为加入量的90.43%和90.65%。结论巴戟甲素具有在稀盐酸溶液和人工胃液中均不稳定、在pH 6.8磷酸盐缓冲液和人工肠液中稳定性较好的特点,在设计口服给药剂型时应予以重视。

拓扑替康反相脂质纳米粒在人工肠液中的稳定性

目的建立测定方法,检测反相脂质纳米粒(RLBN)对人工肠液中拓扑替康的保护作用。方法二步冻干-复溶法制备拓扑替康反相脂质纳米粒(RLBN-TPT)油溶液。建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定拓扑替康两种构型的含量。考察RLBN-TPT在模拟肠液中的释放曲线,研究拓扑替康的稳定性。结果用优化的HPLC条件测定拓扑替康的内酯与开环形式,二者分离度符合要求,线性范围为0.25~5μg/ml。与拓扑替康水溶液比较,RLBN-TPT中的拓扑替康在肠液中的稳定性明显增强,开环构型产生的速率明显减小(P<0.05)。结论 RLBN能明显增强拓扑替康在肠液中的稳定性,这为拓扑替康口服新剂型的研制提供了依据。

不同来源木聚糖酶在模拟胃液和肠液中的稳定性评价

试验研究了市售8种不同来源木聚糖酶在模拟胃、肠液中的稳定性。分别将不同来源木聚糖酶产品在模拟胃、肠液中培养0、1、2和3 h后测定其酶活存留率,用以评估不同来源木聚糖酶在模拟胃、肠液中的稳定性。结果表明:8种木聚糖酶在模拟胃、肠液中的稳定性差异较大,在模拟胃液中,耐受性最好的是酶Ⅳ、酶Ⅶ和酶Ⅷ,3 h后存留率分别为:105%、98%和106%;耐受性最差的为酶Ⅰ,3 h后存留率仅为4%;在模拟肠液中,耐受性最好的是酶Ⅰ,3 h后存留率为99%;耐受性最差的为酶Ⅳ,3 h后存留率为44%。

外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性测定模型初探

目的 建立外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性的实验模型。方法 采用美国 1 995年药典提供的模拟胃液和模拟肠液配方 ,测定不同蛋白在胃肠环境中的稳定性。蛋白质在模拟胃 肠液中的浓度为 0 .5mg ml。在蛋白与模拟胃 肠液反应后的 0s、1 5s、30s、6 0s、2min、4min、8min、1 5min、30min和 6 0min准时取样 ,根据SDS PAGE凝胶电泳结果 ,判断蛋白质在模拟胃 肠液中的稳定性。结果 大豆胰蛋白酶抑制剂、牛 β 乳球蛋白A、牛 β 乳球蛋白B在模拟胃液中稳定存在 ,6 0min完全不降解 ;大豆血凝素 8min内绝大部分降解 ,但降解带 6 0min内仍有残留 ;花生血凝素 8min内降解 ;鸡卵粘蛋白、牛血清白蛋白、大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶均在 1 5s内降解。蛋白质在模拟肠液中的稳定性与模拟胃液不同。大豆胰蛋白酶抑制剂、牛 β 乳球蛋白A、牛β 乳球蛋白B、牛血清白蛋白、鸡卵粘蛋白、鸡卵清蛋白、大豆血凝素、花生血凝素在模拟肠液中 ,6 0min均不能完全降解 ;大豆脂肪水解酶、土豆磷酸酶及其降解带 6 0min内依然存在。结论 不同的外源蛋白在模拟胃 肠液中的稳定性不同 ,根据蛋白质稳定性差异 ,初步建立了评价外源蛋白在模拟胃