鸡血清载脂蛋白AI浓度单向免疫扩散测定法的研究

介绍一种特异、灵敏、简便的蛋鸡血清载脂蛋白AI(apoAI)浓度单向免疫扩散测定法。用磷钨酸镁反复沉淀制备得高密度脂蛋白,经纯化、B radford法蛋白定量后(3.208 mg/mL),作为新西兰白兔的免疫原及载脂蛋白AI测定的标准。本室免疫所得兔抗鸡apoAI抗血清制成免疫琼脂板,加样培养进行单向免疫扩散测定。本法的标准曲线相关性良好,可信性、重复性满意。

癌症患者血清α_1-抗胰蛋白酶、α_1-酸性糖蛋白和结合珠蛋白的变化

本文采用单向免疫扩散法对100例原发性肝癌、25例肺癌、25例卵巢癌、30例喉癌、87例鼻咽癌、139例良性疾患及60例正常献血员血清α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)、α_1-酸性糖蛋白(α_1-AG)和结合珠蛋白(HP)进行了定量测定,结果表明五类癌症患者血清三种糖蛋白成分均高于正常人和良性疾患,具有显著区别(p<0.001及p<0.05)。应用七类人群进行逐步判别分析,建立判别式,正常人、良性疾患及原发性肝癌的回代符合率在60％以上。这些实验资料均表明对癌症患者。

流感疫苗单向免疫扩散试验中抗血清制备新方法的研究

流感疫苗血凝素含量检测方法为单向免疫扩散试验,其抗血清通常由WHO参比实验室提供,通过纯化病毒、蛋白酶切获得血凝素主要抗原片段,然后再免疫动物获得抗血清。该方法制备时间较长,是制约流感疫苗研发及检测的主要因素。以RT-PCR方法获取甲型H1N1流感病毒血凝素中主要抗原片段基因,构建重组质粒并在大肠杆菌中表达,表达产物经纯化、复性后,以蛋白电泳及免疫印迹方法进行了鉴定。以纯化蛋白免疫家兔,制备了相应的抗体,初步证明可用于常规的单向免疫扩散试验。以该法可以快速获得抗血清,尤其是在大流行流感疫苗的研发中,加快疫苗研发进程。

血清免疫球蛋白的定量测定——调查桂林市213名青年学生的正常值

本文报道了用毛细玻管经末梢取血分离出血清,按常规单向琼脂扩散法,测定了桂林市213名16～35岁青年学生血清中IgG、IgM、IgA的含量,比较了16～20岁年龄组与21～35岁年龄组之间,16～20岁年龄组中男女性别之间以及本市16～35岁年龄组与我国20～49岁成年组之间血清Ig含量的差异,并经统计学处理,确定这种差异存在的意义。介绍了改良琼脂板的制作方法。

人血清免疫球蛋白工作标准的制备与标定

本文报导混合浓缩人血清工作标准(89-1)的制备和用WHO相应参考标准血清标定出其中五类免疫球蛋白(Igs)及IgG4亚类含量。该制剂主要用于体外测定IgG、IgA、IgM的工作标准,也可供作体外测定IgD、IgE、IgG4的工作标准。混合前每份血清均无乙型肝炎表面抗原、转氨酶正常。定量分装为每安瓿0.5ml,经冷冻干燥后,4℃保存。参照国际参考标准血清67/97及67/37,分别以免疫单扩散法标定89-1中IgG、IgA、ISM含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)标定IgD、IgG4和IgE含量。其中IgG、IgG4、IgA、IgM含量,应用本室制备的相应单克隆抗体(McAb)标定,而IgD和IgE应用多克隆抗体(PcAb)进行标定。并用五剂量法及四剂量法分别计算Igs含量。

去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响

目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析。结果亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大。以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义。结论以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本。

高效液相色谱在流感疫苗血凝素含量检测中的应用进展

目前,流感疫苗血凝素(hemagglutinin,HA)含量最常用的检测方法仍为单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID),但该方法所需标准品制备耗时较长,通常需要2~3个月。在大流行流感发生初期无法获得标准参考品时,如何精确定量分析HA,一直是HA含量检测面临的难题。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)具有快速、灵敏度高、重复性较好以及准确性高的特点,利用不同的分离原理可快速测定HA含量,在流感疫苗HA含量检测方面已得到很多应用。本文对HPLC在流感疫苗HA含量检测中应用的研究进展作一综述。

流感疫苗血凝素含量检测方法的研究进展

目前流感疫苗血凝素含量最常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID)。为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究。本文对近10年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述。

四价流感病毒裂解疫苗血凝素含量检测方法的验证

目的 验证四价流感病毒裂解疫苗[quadrivalent influenza vaccines（split virion）inactivated,QIV]血凝素含量检测方法的可行性。方法 采用传统的单向免疫扩散法（single-radial immunodiffusion,SRID）检测QIVH1N1和H3N2型的血凝素含量,双价抗原参考品SRID法检测两种月型（包括B/Yam和B/Vic）血凝素含量,并对该检测方法进行准确度、精密度、专属性及线性验证。结果 QIV各型的血凝素含量总体回收率为97.8%～107.6%,相对标准偏差（relative standard deviation,R SD）为0.59%~1.83%;试验间和试验内RSD均约5.0%;4个型别血凝素含量在10~50μg/ml范围时,标准曲线呈良好的线性,R 2均大于0.980 0,定量限分别为：H1N1：4.53μg/ml,H3N2：3.83μg/ml,B/Yam：2.89μg/ml,B/Vic：5.60μg/ml;各型别流感裂解疫苗供试品和抗原参考品与对应抗血清参考品出现沉淀环,与非对应抗血清参考品不出现沉淀环。结论 QIV血凝素含量检测法是可行的。