藏药四味黄芪散通过AMPK蛋白诱导的自噬信号通路干预低氧性肺动脉高压的研究

目的探讨藏药四味黄芪散(SW)降低低氧性肺动脉高压的作用机制。方法将110只SD大鼠随机分为常氧组、低氧对照组和低氧药物组,两低氧组根据暴露低氧时间又各分为d 1、3、7、15、30组,共10个小组。常氧组置于海拔2260 m的大气环境,不予干预;低氧10个组置于模拟海拔5000 m的低压氧舱,低氧药物组给予SW混悬液(0.42 g/100 g)灌胃,低氧对照组给予生理盐水灌胃,每天1次。每组大鼠于相应时间点测定Ppa、RV/(LV+S);Western blot法测定肺组织p-AMPK、ULK-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白水平。结果与常氧组相比,低氧对照组大鼠Ppa、RV/(LV+S)比值随暴露低氧时间的延长逐渐增高,并与肺动脉平滑肌层厚度和肺组织亚细胞器变化保持一致。肺组织p-AMPK蛋白表达水平也轻度上调(P<0.05),ULK-1、LC3Ⅱ明显上调(P<0.01),尤以急性低氧期变化明显;与低氧对照组相比,低氧药物组Ppa升高幅度和肺动脉平滑肌层增厚程度明显减缓(P<0.05~0.01),而肺组织中p-AMPK、ULK-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平随暴露低氧时间的延长而进一步增高(P<0.05~0.001),尤以慢性低氧为甚。结论SW可通过上调AMPK自噬信号通路发挥抑制低氧性肺动脉高压的作用。

藏药四味黄芪散对低压低氧诱导大鼠海马自噬损伤的保护作用

目的探讨藏药四味黄芪散对低压低氧诱导大鼠海马神经元自噬损伤的保护作用。方法将大鼠分为常氧对照组、低氧损伤组和低氧药物组,并根据时间段不同每组又分为第3、7、15、30 d组。将低氧损伤组、低氧药物组大鼠置于模拟5 000 m的低压氧舱,构建低压低氧诱导的大鼠海马神经元损伤模型;常氧对照组、低氧损伤组的大鼠用0.9%生理盐水灌胃,低氧药物组用藏药四味黄芪散水剂灌胃,对损伤模型进行干预。用ELISA法检测血清HIF-1α水平;透射电镜观察各组海马神经元自噬体的特征;免疫荧光标记判定LC3水平;尼氏染色观察海马神经元病理形态学变化。用western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、PKCε、BDNF蛋白水平。结果①与常氧对照组比较,3、7 d低氧损伤组血清HIF-1α水平显著升高(P<0.05);随着时间延长海马神经元损伤加重,PKCε、BDNF水平显著降低(P<0.05);自噬体数量增多,LC3Ⅱ/Ⅰ水平显著升高(P<0.05),p62水平显著降低(P<0.05)。②用藏药四味黄芪散水剂干预后,与低氧损伤组比较,3、7 d低氧药物组血清HIF-1α水平显著降低(P<0.05);海马神经元损伤程度减轻,PKCε、BDNF水平显著升高(P<0.05);自噬体数量减少,LC3Ⅱ/Ⅰ水平显著降低(P<0.05),p62水平显著升高(P<0.05)。③低氧损伤组中,PKCε与BDNF蛋白水平变化呈正相关(r=0.976,P<0.01);3、7 d低氧损伤组,低氧药物组PKCε、BDNF与LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平变化呈负相关(r=-0.981,P<0.05;r=-0.899,P<0.05)。结论经藏药四味黄芪散干预后,自噬活动减少,PKCε、BDNF水平上调,海马神经元损伤减轻。

基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路探讨四味黄芪散对高原低氧致脑损伤大鼠的保护作用及机制

目的基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路探讨四味黄芪散(藏黄芪、藏红花、川芎、沉香)对高原低氧致脑损伤大鼠的保护作用及机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组(诺迪康,0.125 g·kg^(-1)·d-1)以及四味黄芪散低、中、高剂量组(3.255、6.510、13.020 g·kg^(-1)·d-1),每组10只。四味黄芪散各剂量组灌胃给药,每日1次,连续14 d;阳性药物组给予诺迪康灌胃给药,每日1次,连续给药7 d。采用实验动物低压模拟舱复制高原低氧致脑损伤大鼠模型,低氧暴露持续7 d。采用HE染色法观察大鼠脑组织病理变化;TUNEL染色法检测大鼠脑组织细胞凋亡情况;TBA法、微板法分别检测脑组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的水平;Western Blot法检测大鼠脑组织中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平;RT-qPCR法检测大鼠脑组织中PERK、eIF2α、ATF4、CHOP mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区锥体细胞水肿,排列不规则,胞质疏松淡染;海马CA1区红色荧光强度显著增强(P<0.01);脑组织中MDA含量显著升高(P<0.01),GSH活性显著降低(P<0.01);脑组织中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平显著升高(P<0.01),PERK、eIF2α、ATF4、CHOP mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,阳性药物组及四味黄芪散高、中、低剂量组大鼠海马CA1区锥体细胞排列紧密,边界较清,细胞水肿得到改善;海马CA1区的红色荧光强度明显减弱(P<0.05);脑组织中MDA含量显著降低(P<0.01),GSH活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。四味黄芪散高、中剂量组大鼠脑组织中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),PERK、eIF2α、ATF4、CHOP mRNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01);四味黄芪散低剂量组大鼠脑组织中p-eIF2α/eIF2α、CHOP蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),eIF2α、CHOP mRNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论四味黄芪散能改善高原低氧致脑损伤大鼠的脑组织神经元细胞水肿,增强抗氧化应激能力,减少脑组织细胞凋亡,可能与其调控PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路抑制内质网应激有关。

藏药四味黄芪散对慢性低氧损伤大鼠的影响

目的观察藏药四味黄芪散对慢性低氧损伤大鼠的影响。方法将100只大鼠随机分为两组:低氧对照组和低氧药物组(海拔5 000 m),每组再根据暴露低氧时间分为1、3、7、15、30天等5个亚组,每组10只。另设10只为常氧对照组,暴露于西宁大气环境(海拔2 260 m)不干预。低氧药物组予藏药四味黄芪散混悬液(0.1 g/100 g)灌胃,低氧对照组予生理盐水灌胃,每天1次,持续30天。分别于暴露低氧时间结束后检测肺动脉压(Ppa)、左右心室比值[RV/(LV+S)]、血红蛋白(Hb)和红细胞压积(Hct)值。结果与常氧对照组比较,低氧对照组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)均升高(P<0.01),并随着暴露低氧时间的延长而逐渐升高;与低氧对照组比较,低氧药物组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)水平降低(P<0.01),且低氧环境中,低氧药物组大鼠Hb、Hct、Ppa和RV/(LV+S)平均增幅值亦较低。结论藏药四味黄芪散能够预防慢性低氧对机体的损伤。

四味黄芪散降低低氧性肺动脉高压的机制研究

目的探讨低氧不同时相内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路参与藏药四味黄芪散降低低氧性肺动脉高压的机制。方法将110只SD大鼠随机分为常氧组、低氧对照组和低氧药物组,后两组根据暴露低氧时间又各分为5个组。常氧组大鼠暴露于西宁地区(海拔2260 m)大气环境,正常喂养;10个低氧组置于模拟海拔5000 m的低压氧舱,其中,5个低氧药物组灌胃给予四味黄芪散混悬液,5个低氧对照组灌胃给予生理盐水,每日1次,持续30 d。分别于暴露低氧第1、3、7、15、30天时测定肺动脉压(PAP)、左右心室比值;并采集肺组织标本,用WB法测定肺组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、eNOS、内皮素1(ET-1)蛋白的含量。结果与常氧组比较,低氧对照组大鼠的PAP和左右心室比值逐渐增高,于暴露低氧第7天起显著升高,并随暴露低氧时间的进一步延长而持续增高;低氧药物组大鼠的PAP也随暴露低氧时间的延长而增高,但其增高幅度明显低于低氧对照组。低氧药物组大鼠肺组织eNOS蛋白的水平在急性低氧15 d内均低于常氧组和低氧对照组;于低氧第15天后,低氧药物组eNOS蛋白的水平逐渐升高,超过低氧对照组,于低氧30 d时显著增高,甚至超过常氧组水平。低氧下,eNOS蛋白水平的表达趋势与肺组织中AMPK蛋白及Beclin-1的水平呈高度相关。低氧对照组大鼠肺组织中ET-1蛋白的水平随暴露低氧时间的延长而增高,于低氧第7天时达峰值;低氧药物组大鼠肺组织中ET-1的水平无论在急性低氧期或慢性低氧期均显著低于低氧对照组。结论eNOS蛋白在不同低氧时相呈现不同的水平,四味黄芪散降低低氧性肺动脉高压的机制也不同。急性低氧期主要通过下调ET-1的水平来降低PAP;慢性低氧期主要通过上调eNOS的水平及调控AMPK-eNOS信号通路,抑制平滑肌细胞增殖,降低PAP。