四物汤含药血清对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞自噬的影响

目的 探讨四物汤含药血清对多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢颗粒细胞自噬的影响及潜在机制。方法 取3月龄雌性SD大鼠,分别以生理盐水和不同剂量四物汤灌胃,制备空白血清和不同浓度[0.52、1.04、2.08 g/(kg·d)]四物汤含药血清。筛选四物汤含药血清干预浓度后,将人卵巢颗粒细胞KGN分为对照组(细胞不进行任何处理)、脱氢表雄酮(DHEA)组(以50μmol/L的DHEA处理细胞48 h)、空白血清组(以50μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%空白血清处理72 h)、中浓度四物汤含药血清组(以50μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h),观察各组细胞中的自噬体数量以及通路相关蛋白[果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)]、自噬相关蛋白[p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]和FBP1 mRNA的表达水平。将(转染)细胞分为四物汤组(以50μmol/L的DHEA处理细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h)、四物汤+si-NC组(以50μmol/L的DHEA处理阴性对照小干扰RNA转染细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h)、四物汤+si-FBP1组(以50μmol/L的DHEA处理FBP1小干扰RNA转染细胞48 h后,再用10%中浓度四物汤含药血清处理72 h),考察敲低FBP1对四物汤上述作用的影响。结果 与对照组比较,DHEA组细胞的自噬体数量明显增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-mTOR/mTOR、FBP1蛋白及mRNA的表达水平均显著升高,p62蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。与DHEA组和空白血清组比较,中浓度四物汤含药血清组细胞的自噬体数量明显减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著降低,p-mTOR/mTOR和p62蛋白、FBP1蛋白及mRNA的表达水平均显著升高(P<0.05)。敲低FBP1后,与四物汤+si-NC组比较,四物汤+si-FBP1组细胞的存活率、p62蛋白的表达水平、FBP1蛋白及mRNA的表达水平、p-mTOR/mTOR均显著降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著升高(P<0.05)。结论 四物汤可通过上调KGN细胞中FBP1蛋白及mRNA的表达来促进mTOR蛋白的磷酸化,从而抑制其自噬。

四物汤加味医院代煎剂常温稳定性研究

目的:建立一种考察四物汤加味医院代煎液中指标成分稳定性及微生物限度检查的方法,为医院代煎液的保存时间提供依据和参考。方法:采用HPLC法测定四物汤加味(SWTJW)代煎液常温放置0、1、3、9、16、23、30、35 d的指标成分芍药苷、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的含量变化,并测定pH值、相对密度及微生物限度。结果:代煎液中芍药苷和淫羊藿苷的含量在35 d内稳定(含量降低小于5%),二苯乙烯苷的含量逐渐下降(35 d含量降低17.64%),代煎液的pH值、相对密度在35 d内均未见明显变化,微生物限度符合要求。结论:四物汤加味代煎剂在常温保存35 d基本稳定,但何首乌主要成分二苯乙烯苷含量有所降低。

右归饮、四君子汤、桃红四物汤调节肾虚、脾虚、血瘀证患者免疫功能的观察

目的:探讨右归饮、四君子汤、桃红四物汤对肾虚、脾虚、血瘀证患者免疫调节的不同作用。方法:用右归饮、四君子汤、桃红四物汤分别治疗肾虚、脾虚、血瘀证患者各40例,另分别设各证型20例予安慰剂作对照,观察治疗前后免疫功能情况。结果:四君子汤使脾虚患者、右归饮使肾虚患者的循环免疫复合物(CIC)水平下降(P<001),淋巴细胞转化率(淋转率)和自然杀伤(NK)细胞活性提高(P<001),四君子汤还使脾虚患者的IL2水平和嗜中性细胞吞噬指数提高(P<005);桃红四物汤使血瘀证患者CIC水平降低(P<001)的同时,提高了NK细胞活性(P<005)。结论:四君子汤、右归饮可明显提高脾虚证、肾虚证患者的免疫功能,特别是细胞免疫功能,尤以四君汤作用更全面显著。桃红四物汤消除免疫复合物的作用较为明显。

辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究

[目的]通过检测辐射损伤所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定辐射损伤所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,基于代谢组学的方法考察血虚证证本质及四物汤的作用机制。[方法]C57小鼠按体质量随机分为正常组、辐射造模组、四物汤反证组。造模7d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物。[结果]主成分分析结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。[结论]四物汤治疗血虚证的机制可能与稳定细胞膜,维持细胞内外渗透压平衡;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢以及增强机体抗氧化能力、免疫力有关。

用分子中药组学技术研究四物汤补血的作用机理

从中药复方的多重作用及中医的整体治疗观出发,作者提出“分子中药组学”的概念,认为中药复方是通过化学成分组合影响到信号分子组合,使紊乱的信号分子网络恢复平衡,从而达到治疗中医的证和相关疾病的作用和效果。分子中药组学的关键技术是化学组学、基因组学和蛋白质组学。用分子中药组学策略发现了四物汤补血的物质基础是多糖、川芎嗪、阿魏酸和芍药苷, 补血作用的分子机理是影响造血相关细胞因子的表达。

四物汤对小鼠化疗所致贫血的恢复作用及其机制

目的:探讨四物汤对小鼠化疗所致贫血的恢复作用,并阐明其作用机制。方法:24只小鼠随机分为对照组(n=8,不给药)、模型组(n=8,给予5-氟尿嘧啶)和四物汤组(n=8,给予5-氟尿嘧啶+四物汤)。于给药15d后,眼静脉取血,显微镜下观察红细胞形态和数量;应用全自动血细胞计数仪检测3组小鼠外周血红细胞数和血红蛋白水平;采用双染标记法对红细胞表面标志性抗原进行抗体结合并染色,采用流式细胞术检测3组小鼠外周血和脾脏标记的红细胞数。结果:与对照组比较,模型组小鼠外周血红细胞数明显减少(P<0.05),细胞皱缩;与模型组比较,四物汤组小鼠外周血红细胞数量明显增加(P<0.05),细胞变圆。与对照组比较,模型组小鼠血红蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,四物汤组小鼠血红蛋白水平明显升高(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,模型组小鼠外周血CD71/Ter119表达水平明显降低(P<0.01),各象限红细胞数量降低(P<0.01);与模型组比较,四物汤组小鼠外周血CD71/Ter119表达水平明显升高(P<0.01),各象限红细胞数量升高(P<0.01);与对照组比较,模型组小鼠脾脏血CD71/Ter119表达水平明显降低(P<0.01),各象限红细胞数量降低(P<0.01);与模型组比较,四物汤组小鼠脾脏血CD71/Ter119表达水平明显升高(P<0.01),UL象限红细胞数量降低(P<0.01),UR和LR象限红细胞数量升高(P<0.01)。结论:四物汤可以促进小鼠化疗贫血损伤的恢复,促进红细胞数量增加,改善细胞形态表现,提升外周血血红蛋白水平,促进外周血和脾脏红细胞表面标志性抗原表达量增加。

四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中AchE、SOD、GSH-Px活性的影响

目的:研究四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响。方法:反复夹闭大鼠双侧颈总动脉结合腹腔注射硝普钠降低血压的方法制备拟血管性痴呆大鼠模型,观察四物汤对大鼠的学习记忆能力及脑组织中AchE、SOD和GSH-Px活性的影响。结果:四物汤能提高血管性痴呆鼠的学习记忆能力;同时可提高SOD和GHS-Px活性,降低AchE的活性。结论:改善胆碱能神经功能、减轻自由基损伤可能是四物汤改善血管性痴呆的机制之一。

四物汤传统饮片汤剂、现代颗粒汤剂的特征色谱比较

目的 :比较四物汤传统饮片汤剂、现代颗粒汤剂特征色谱的异同。方法 :采用HPLC方法 ,梯度洗脱。色谱条件为 :Diamonsil(TM )钻石C18柱 (5 μm ,2 5 0mm×4 .6mm) ,柱温为 35 .0℃ ,流速为 1.0mL·min-1,流动相A为水 ,流动相B为甲醇 ,流动相C为 0 .0 5 %磷酸。结果 :得到饮片汤剂和颗粒汤剂的特征色谱 ,共标记 2 2个特征峰。该法所得特征色谱峰形较好 ,且较稳定。结论 :四物汤传统饮片汤剂和现代颗粒汤剂的特征色谱十分相似 ,化学成分并无显著差异。

四物汤对3种血虚证动物细胞周期的影响

目的系统考察60Coγ-射线、环磷酰胺和综合放血法致血虚证小鼠模型骨髓细胞周期变化的特点。方法采用60Coγ-射线照射、环磷酰胺腹腔注射和综合放血法制作血虚证动物模型,检测对小鼠骨髓细胞周期的影响,同时观察四物汤给药后对其影响。结果射线损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M期比例先升高后降低,环磷酰胺损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M和S期细胞先升高后降低;综合放血组小鼠骨髓细胞的S期细胞数先升高后降低;四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。3种模型都先后出现了G2/M期阻滞,以γ-射线照射组出现最早,与照射组不同的是环磷酰胺组与综合放血组在造模后都先后在第3、7天出现了S期细胞峰值。结论3种模型骨髓细胞周期都出现了G2/M期阻滞,但S期的变化存在明显不同,四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。

HPLC测定四物汤及其配伍组方中阿魏酸的煎出量

目的 考察川芎、当归与四物汤中其它两味药组合构成的 12种样本药物中阿魏酸含量的变化。方法 反相高效液相色谱法进行测定。结果 当归、川芎单味药阿魏酸煎出量分别为 0 .5 18,1.2 15mg·g- 1 ;加其它药味合煎后 ,阿魏酸煎出量为 0 .375～ 1.76 1mg·g- 1 。结论 川芎与当归合煎 ,阿魏酸的煎出量有一定的加合性 ;加入地黄或白芍后 ,阿魏酸煎出量降低 ;

毛细管区带电泳法测定四物汤及其配伍组方中丹皮酚、苯甲酸和没食子酸的含量

目的:采用毛细管区带电泳法对四物汤及其配伍组方中酚酸类成分——丹皮酚、苯甲酸和没食子酸同时进行含量测定。方法:采用熔融石英毛细管柱(75 μm×49.2 cm,有效柱长39.0 cm)作为分离通道;用30 mmol·L^(-1)硼砂缓冲溶液(体积分数5%甲醇,pH 9.4)为运行缓冲液;运行电压20 kV、检测波长212 nm、毛细管柱温25℃。结果:丹皮酚、苯甲酸和没食子酸分别在3.680—230.0μg·mL^(-1)、1.126-112.6μg·mL^(-1)和3.000—187.5μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好(r>0.997);回收率在98.6%-102.3%之间;重复性实验中丹皮酚、苯甲酸和没食子酸峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为3.99%,4.05%,5.21%(n=6)。结论:测定方法简单、灵敏、快速,回收率和重现性好。

四物汤及其配伍组方中苯甲酸煎出量的HPLC法测定

目的 考察四物汤中白芍与其它各单味药排列组合构成的 8种样本药物中苯甲酸煎出量的变化。方法 RP- HPL C法进行测定。结果 白芍单味药苯甲酸煎出量为 2 .74mg/g;加其它药味合煎后 ,苯甲酸煎出量为 0 .41～ 1.11mg/g。结论 白芍单煎 ,苯甲酸煎出量较高 ;而与四物汤中其它药味合煎后 。

四物汤治疗更年期综合征的作用机制研究

目的观察四物汤对更年期模型SD大鼠的作用并探讨发挥作用的可能靶点和机制。方法将正常SD雌性大鼠40只按体质量均衡和随机的原则分为正常组、模型组、四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组。除正常组外,其余组均切除两侧卵巢造模。手术2周后,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组分别给予3,6,9 g/(kg·d)四物汤灌胃,均1次/d,持续6 d。第7天腹主动脉取血并分离血清,分离子宫并称质量,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体ERα表达量;蛋白质免疫印记技术检测药物血清对T47D细胞雌激素受体ERα表达的影响。结果正常组大鼠的子宫系数与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组的子宫系数与模型组比较差异均有统计学意义,且随着四物汤方剂浓度的升高,子宫系数有增大的趋势;大鼠子宫组织ERα表达模型组与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01),四物汤中剂量组和高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);四物汤低、中剂量组的含药血清能够明显提高T47D细胞ERα的表达水平(P均<0.01)。结论四物汤对更年期综合征有很好的治疗作用,并可提高靶细胞ERα的表达水平。

“四物汤”中当归有效部位及有效成分的研究

研究发现“四物汤”中的当归对家兔主动脉血管有舒张作用的有效部位及有效成分。采用超临界CO2 流体萃取当归中的脂溶性部位 ,经柱层析法分离和高效液相色谱法纯化 ,并结合细胞膜色谱法筛选和气相 质谱联用色谱法鉴定 ,确定当归中的有效成分。结果表明 :当归脂溶性部位经柱层析分离得到的正己烷 醋酸乙酯洗脱部位为有效部位 ,其中藁本内酯。

四物汤对小鼠耳廓、肠系膜微循环的影响

四物汤对小鼠耳廓、肠系膜微循环的影响白树平１管喜文１龚传美１管敏２四物汤由熟地、白芍、当归和川芎组成［１］。历代中医应用该方补血调经，多用于妇科，其加减方剂更为内科常用。本文观察了它对小白鼠耳廓、肠系膜微循环的影响。１材料与方法１．１实验材料四物汤煎...

四物汤刺激Peyer’s Patch促进骨髓造血的研究

研究了四物汤煎剂刺激Peyer’sPatch产生细胞因子促进骨髓造血的作用。小鼠灌服给药后取Peyer’sPatch诱生得上清 ,MTT法检测上清对骨髓细胞的刺激增殖作用 ;另以体外直接给药诱生Peyer’sPatch得上清 ,检测Peyer’sPatch诱导的细胞因子活性。结果 :四物汤体内、外给药均可刺激Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞增殖 ,此可能是四物汤补血作用的途径之一。

抑制消减杂交和辐射小鼠血虚模型筛选“四物汤”诱导表达的基因

应用抑制性消减杂交技术构建受辐射小鼠血虚模型在中药四物汤诱导前后消减cDNA文库,并从中克隆鉴定出与四物汤药效相关基因。从受辐射小鼠四物汤诱导前后骨髓细胞中提取mRNA并合成cDNA,分别作为tester和driver进行消减杂交及抑制性PCR,将PCR产物与载体连接构建cDNA文库,高效电转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取其中的克隆进行酶切、测序分析。成功构建了具有高消减效率的受辐射小鼠四物汤诱导前后的消减cDNA文库。文库挑选得到512个阳性克隆。随机挑取30个插入片段测序,生物信息学分析结果显示大部分与红细胞分化、骨髓组织修复、结构重建有密切关系,其中8个为新基因片段。应用抑制性消减杂交技术所构建的受辐射小鼠四物汤诱导前后cDNA消减文库为大批量筛选、克隆四物汤药效特异性相关基因奠定了基础。并从分子水平上发现四物汤对抑制凋亡、促进骨髓组织修复和结构重建、诱导红细胞分化的基因具有调节作用,可能和四物汤补血作用有关。

基于TLR5-NF-κB通路筛选四物汤中的活性成分

目的基于TLR5-NF-κB通路建立报告基因系统筛选四物汤中的有效成分。方法利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000将含有hTLR5基因和NF-κB Luc报告基因的质粒转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),加入药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选出能够激活TLR5受体及其下游NF-κB通路的有效成分。结果果糖、腺嘌呤能够显著激活此通路,且随果糖、腺嘌呤作用浓度的增加对细胞膜表面TLR5受体及其下游的NF-κB通路激活作用也随之增强,叶酸、东莨菪内酯、芍药苷、盐酸川芎嗪、β-谷甾醇、阿魏酸也能一定程度激活此通路。结论通过TLR5受体介导NF-κB通路激活剂筛选模型,筛选出四物汤内果糖、腺嘌呤、芍药苷、盐酸川芎嗪、叶酸、东莨菪内酯、β-谷甾醇、阿魏酸8种单体在一定浓度范围内能够激活TLR5受体及其下游的NF-κB通路。

四物汤免疫作用改善卵巢早衰症状的研究现状

检索近几年文献,发现卵巢早衰中医治疗的药物多数含有四物汤的组成成分,且疗效确切;通过对卵巢早衰基本病因病机、免疫因素作用及四物汤组成成分免疫作用的研究,对四物汤免疫作用改善卵巢早衰症状做一综述,以期为卵巢早衰的临床治疗、早期预防提供参考。

黄芪肉桂四物煎膏剂的提取工艺研究

目的:确定黄芪肉桂四物煎膏剂的提取工艺。方法:以出膏率和芍药苷提取率为指标,采用L18(37)正交表,选择浸泡温度、浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,进每个因素设3个水平,行正交实验,优化黄芪肉桂四物汤煎膏剂的提取工艺参数。结果:优选的提取工艺条件为8倍水量浸泡60 min,浸泡温度30℃,提取1次,每次煎煮180 min。结论:优选的提取工艺合理可行、可用于黄芪肉桂四物煎膏剂的制备。