pcDNA3.1(+)-SjP14纳米微球核酸疫苗对血吸虫致小鼠肝脏损伤的保护作用

目的:探究日本血吸虫碱性调宁蛋白样蛋白(SjP14)纳米微球核酸疫苗对血吸虫致肝脏损伤的保护作用。方法:30只BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、pc DNA3.1(+)-SjP14组和纳米微球核酸疫苗组,每组10只,各组小鼠分别经股四头肌注射生理盐水、重组质粒pc DNA3.1(+)-SjP14及纳米微球核酸疫苗各100μg,每2周免疫一次,共3次。末次免疫后2w,血吸虫尾蚴攻击小鼠,6w后剖杀小鼠,应用HE染色法观察肝脏形态结构的病理变化,同时计数小鼠肝脏虫卵数,并计算单个虫卵肉芽肿的直径、面积和体积。结果:大体形态观察和组织切片均显示生理盐水组小鼠肝脏损害程度最重,纳米微球核酸疫苗组小鼠肝脏损害程度最轻;纳米微球核酸疫苗组小鼠虫卵数、单卵肉芽肿平均直径、面积和体积均明显低于生理盐水组和pc DNA3.1(+)-SjP14组(P<0.05)。结论:pc DNA3.1(+)-SjP14-纳米微球核酸疫苗对血吸虫感染小鼠肝脏具有一定的保护作用。

日本血吸虫碱性调宁蛋白样蛋白P14基因的原核表达及鉴定

目的:原核表达并鉴定日本血吸虫P14基因(SjP14)。方法:提取日本血吸虫成虫总RNA,RT-PCR扩增SjP14基因,插入pGEM-T载体后酶切鉴定,再亚克隆至pET28a(+)原核表达载体并转化感受态细胞E.coli BL21,1mmol/L的IPTG诱导表达后,用纯化试剂盒纯化并进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。结果:RT-PCR扩增后获得一特异性基因片段,测序及比对后确认为SjP14基因。用IPTG诱导含重组pET28a(+)-SjP14的E.coli BL21后,经SDS-PAGE分析表明其表达成功,分子量约为38 ku。Western blot鉴定结果表明纯化后的SjP14蛋白可被SjP14多克隆抗体识别。结论:成功表达并纯化了日本血吸虫P14基因产物,为下一步动物免疫保护性实验奠定了基础。