Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 观察Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌的表达变化及其与浸润性乳腺癌临床病理指标的相关性,探讨Slit2/Robo1信号通路对浸润性乳腺癌病理过程的调控作用。方法 应用免疫组织化学法观察Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织的表达;应用卡方检验或校正的卡方检验分析Slit2和Robo1在各组间阳性率差异;采用方差分析、Kruskal-Wallis或Mann-Whitney U检验分析Slit2和Robo1的免疫组织化学染色量差异;采用非参数Spearman等级相关分析检验Slit2和Robo1与浸润性乳腺癌临床病理指标相关性。结果 Slit2定位表达于细胞质;Robo1定位表达于细胞质和细胞核。Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌的表达率和表达量明显低于乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织。在浸润性乳腺癌中,Slit2和Robo1具有高度相关性,且Slit2与ER、PR、Her2呈正相关(P<0.05);Robo1与ER、PR呈正相关(P<0.05)。Slit2/Robo1与浸润性乳腺癌患者年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、病理分期和组织学分级无关(P>0.05)。结论 Slit2和Robo1在浸润性乳腺癌低表达,且与其发生、发展和预后存在相关性,提示Slit2/Robo1信号通路可能参与浸润性乳腺癌的病理过程,发挥调控作用。

Slit2/Robo1信号通路蛋白在早期糖尿病肾病肾小球中的表达及临床意义

目的探讨早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾小球中Slit2和Robo1的表达与肾小球内皮细胞增生的关系及临床意义。方法收集符合Tervaert’s糖尿病肾病病理分型Ⅰ~Ⅱa期,患者24 h尿蛋白>30 mg且<500 mg,肾小球滤过率(estimate glomerular filtration rate,e GFR)>90 m L/(min·1.73 m2)等纳入标准的19例2型糖尿病DN标本,以及15例正常肾组织手术标本,采用HE染色、PAS染色和电镜观察DN肾小球组织形态结构的变化,免疫组化检测Slit2、Robo1和血管内皮细胞标记物CD31在肾小球中的表达,分析DN肾小球中Slit2和Robo1与CD31表达的相关性,以及Slit2、Robo1和CD31的表达与24 h尿蛋白以及e GFR的相关性。结果早期DN存在肾小球肥大、系膜基质轻度增多、基底膜增厚、毛细血管扩张、血管内皮细胞增大和增多等典型早期DN病理特征。Slit2表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和系膜细胞区域;Robo1表达于肾小球血管内皮、肾小管上皮和足细胞区域。与正常肾组织相比,早期DN肾小球中CD31的表达水平显著增高。早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达较正常肾组织也显著性增高(P<0.01)。相关性分析显示,早期DN肾小球中Slit2和Robo1的表达与CD31表达呈显著正相关(r=0.73,P<0.01;r=0.72,P<0.01);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与e GFR呈显著正相关(r=0.78,P<0.01;r=0.81,P<0.01;r=0.57,P<0.05);早期DN肾小球中Slit2、Robo1和CD31表达与24 h尿蛋白也呈显著正相关(r=0.46,P<0.05;r=0.49,P<0.05;r=0.47,P<0.05)。结论 Slit2/Robo1信号通路可能通过参与早期DN肾小球内皮细胞增生促进病理性血管生成,从而加速蛋白尿的进展。

大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺后Slit2、Robo1的表达研究

目的探讨神经生长导向因子slit2及其受体robo1在氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)不同时间后大鼠皮质星形胶质细胞的表达变化及其意义。方法建立培养乳大鼠皮质星形胶质细胞OGD模型,并分为OGD 0h组(对照组)、2h组、4h组、6h组和12h组。相差显微镜观察各组的细胞形态,MTT法检测各组的细胞活力,RT-PCR法检测各组slit2mRNA和robo1 mRNA的相对表达情况。结果 (1)对照组、OGD 2h组、4h组、6h组和12h组的细胞活力(OD值)分别为0.756±0.013、0.681±0.016、0.563±0.033、0.404±0.024和0.222±0.026,细胞活力随着氧糖剥夺时间延长而下降,呈时间依赖性(P<0.01)。(2)氧糖剥夺后,统计结果显示不同组别星形胶质细胞slit2 mRNA和robo1 mRNA表达先逐渐升高,6h组达高峰(与对照组比,P<0.05),12h组明显下降(与6h组比,P<0.01)。结论 slit2/robo1信号通路可能参与缺血后抑制性微环境的形成,影响神经的再生修复过程。

Slit2/Robo1蛋白在直肠癌中的表达及与微血管密度的关系

目的研究直肠癌中Slit2/Robo1蛋白的表达,探讨两者与直肠癌微血管密度(MVD)及生物学行为的关系。方法免疫组化SP法检测65例直肠癌组织及相应43例对照组织中Slit2/Robo1蛋白的表达水平及MVD计数,研究在直肠癌中Slit2/Ro-bo1蛋白的表达强度与MVD关系,观察不同临床病理学行为下Slit2/Robo1蛋白的表达变化。结果(1)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白阳性表达率分别为64.6%和78.5%,对照组织中的阳性表达率分别为4.7%和7.0%,两种组织中表达差异有统计学意义(P<0.01),直肠癌组织中MVD显著增高(t=32.09,P<0.01);(2)Slit2与Robo1阳性表达呈正相关(r=0.551,P<0.01),两者表达阳性的癌组织MVD计数明显大于表达阴性的癌组织(t=5.674,P<0.01,t=6.103,P<0.01);(3)Slit2/Robo1蛋白表达水平与肿瘤大小、浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移相关,统计学检验有显著性差异(P<0.05)。结论(1)Slit2/Robo1蛋白在直肠癌组织中表达较对照组明显增高,并与MVD密切相关,推测Slit2/Robo1蛋白在直肠癌血管生成中起着重要作用;(2)直肠癌组织中Slit2/Robo1蛋白及MVD与直肠癌的生长、侵袭及转移密切相关,临床通过检测Slit2/Robo1蛋白表达强度及MVD计数可作为直肠癌进展程度及预后情况的重要指标。

去泛素化酶USP33通过下调SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭和转移

目的探讨去泛素化酶USP33参与调节SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭转移的机制。方法采用q PCR、免疫组化的方法检查USP33在肺腺癌中的表达,利用A549、SPC-A-1细胞,以沉默USP33后作为沉默组,空白组作为对照,72 h后用q PCR与Western blot检测USP33的沉默效果,利用划痕实验、细胞迁移和侵袭基质胶法检测USP33沉默后对细胞侵袭转移的影响,利用Western blot检测USP33的沉默后SLIT2和ROBO1表达,IL6刺激后USP33的表达。结果 q PCR、免疫组化显示与肺腺癌癌组织相比,癌旁组织USP33表达量明显增加(P<0.05);与空白组相比,qPCR、Western blot结果显示沉默组USP33的表达量明显下降(P<0.05);划痕实验,Transwell迁移实验,Boyden侵袭实验提示USP33沉默后细胞迁移、侵袭转移率明显增加(P<0.05);抑制USP33后,SLIT2和ROBO1表达均下调;IL6刺激使USP33的表达增加(P<0.05)。结论 USP33抑制A549、SPC-A-1细胞迁移、侵袭转移,其侵袭转移的机制可能与炎症因子IL6、SLIT2/ROBO1信号通路存在交叉作用。

Slit2/Robo1与输卵管妊娠患者输卵管中滋养层细胞浸润程度及血管重塑的关系

目的研究Slit2蛋白、Robo1蛋白与输卵管妊娠中滋养层细胞浸润程度及血管重塑的关系。方法选取2018年5月至2019年3月在我院接受腹腔镜下患侧输卵管切除术治疗的74例输卵管壶腹部妊娠患者的输卵管样本为实验组,并根据滋养层细胞浸润输卵管壁的深度分为Ⅰ级组、Ⅱ级组和Ⅲ级组,同期接受手术切除治疗的20例子宫肌瘤或子宫内膜良性病变患者的输卵管样本为正常组。将输卵管样本切片并进行免疫组化法染色,检测各组样本中Slit2蛋白、Robo1蛋白的表达,另通过检测CD34的表达进行微血管密度(MVD)定量计数。结果实验组74例患者滋养层细胞浸润输卵管壁深度包括Ⅰ级27例,Ⅱ级29例,Ⅲ级18例。正常组输卵管组织中有1例Slit2阳性表达(5.0%),2例Robo1阳性表达(10.0%);实验组EP输卵管组织中Slit2阳性表达35例(47.3%),Robo1阳性表达41例(55.4%),且阳性表达率随着滋养层细胞浸润深度(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级亚组)递增(P<0.05)。正常组以及实验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级亚组间MVD计数两两比较均有显著差异(P<0.05)。实验组中,Slit2蛋白与Robo1蛋白表达呈正相关性(r=0.603,P<0.001);Slit2表达阳性者MVD计数显著高于Slit2表达阴性者MVD计数(P<0.05);Robo1表达阳性者MVD计数显著高于Robo1表达阴性者MVD计数(P<0.05)。结论在输卵管妊娠组织中,Slit2蛋白、Robo1蛋白的表达随滋养层细胞浸润分级的升高而增加,并且可能具有促进血管新生的作用。

Slit2-Robo1信号阻断抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化Slit2-Robo1信号阻断抗体(R5抗体)及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤3B2.3和CRL-1608细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化R5抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,R5抗体及对照抗体的质量浓度分别为0.986 mg/mL和3.57 mg/mL。结论应用层析法和Protein A亲和层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。

Slit2/Robo1信号对鸡胚早期神经管及体节发育的影响

目的:探讨Slit2/Robo1对鸡胚早期神经管和体节发育的影响。方法:显微注射法将质粒注射入HH10期胚胎神经管内,活体胚胎细胞电穿孔方法转染胚胎半侧神经管,以另一侧神经管为对照侧,原位杂交及免疫荧光方法观察转染10 h后神经管的发育和神经嵴细胞迁移至体节的情况。结果:下调Robo1侧神经管发育较正常对照侧异常,同时发现Slug表达和神经嵴细胞迁移至体节路线发生改变。结论:Slit2/Robo1信号可能通过影响Slug基因表达,对胚胎早期神经管闭合、神经嵴细胞正常产生及迁移方向以及体节分化有重要作用。

肺癌相关的 Slit2－Robo1信号通路的研究进展

恶性肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成。 Slit2－Robo1信号通路最初是在神经系统中被发现，且在轴突导向生长和神经细胞迁移过程中发挥重要作用，血管系统和神经系统的结构和功能具有相似之处，近年来研究发现Slit2－Robo1信号通路在血管系统，特别是肿瘤血管中具有重要的作用，并在不同肿瘤中发挥的作用不同，已发现Slit2－Robo1可以抑制乳腺癌脑转移的扩散，同时，Slit2－Robo1也可以促进黑素瘤中的肿瘤生长。本文对与肺癌相关的Slit2－Robo1信号通路现状做一综述。

尤瑞克林对局灶性脑梗死大鼠Slit2/Robo1表达的影响

目的:研究神经导向因子Slit2及其受体Robo1在大鼠脑梗死模型和尤瑞克林干预后的缺血脑组织中的表达变化。方法:54只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和尤瑞克林组,再随机分为梗死后缺血1 d、3 d、7 d三个亚组,每组各6只。采用线栓法制备大鼠永久性大脑中动脉缺血(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型。尤瑞克林组给予尤瑞克林尾静脉注射,模型组给予等体积生理盐水。应用Westernblot方法检测不同时间点Slit2蛋白和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在缺血脑组织中的表达情况;RT-PCR方法检测不同时间点Robo1 mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组和尤瑞克林组Slit2蛋白和eNOS蛋白的表达在各时间点均明显增高;尤瑞克林组与模型组相比,两蛋白在各时间点均呈现高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。且Slit2蛋白和eNOS蛋白的表达变化呈显著正相关(P<0.01)。Robo1在模型组和尤瑞克林组中表达较假手术组早期明显降低,在3 d开始上升,呈升高趋势,7 d仍未达到假手术组大鼠的表达水平(P<0.05)。结论:局灶性脑梗死后大鼠Slit2蛋白表达升高,且Slit2可能参与大鼠脑梗死后血管新生过程,尤瑞克林可能通过升高Slit2/Robo1促进大鼠脑梗死后的血管新生过程。

小鼠肾发育中Slit2及其受体Robo1的表达

目的观察并检测Slit2及其受体Robo1在小鼠肾发育中的表达变化。方法通过免疫组织化学技术系统观察小鼠肾脏Slit2和Robo1的表达和定位;应用蛋白印迹技术检测小鼠肾脏Slit2和Robo1表达的变化规律。结果 Slit2和Robo1在胚龄12 d小鼠肾脏生肾区开始表达;Slit2在小鼠输尿管芽及其周围的间充质聚集的部位阳性表达,Robo1在小鼠肾脏生肾区广泛表达,主要分布于生后肾组织和输尿管芽上皮细胞基底面;在肾单位发育过程中,Slit2定位表达于逗号小体阶段和S小体阶段,且表达较强,在Ⅲ期肾小体阶段、Ⅳ期肾小体阶段及成熟肾小体阶段有微弱表达;Robo1定位表达于逗号小体阶段、S小体阶段、Ⅲ和Ⅳ期肾小体阶段,且表达较强,在成熟肾小体阶段有微弱表达;Slit2及其受体Robo1在肾脏泌尿小管如近端小管、远端小管及集合管发育过程中均有表达。蛋白印迹检测从小鼠胚龄14 d开始,Slit2表达先递增,至胚龄16 d达峰值,而后逐渐递减。Robo1表达从小鼠胚龄14 d开始逐渐递减。结论 Slit2及其受体Robo1参与肾输尿管芽的萌出、输尿管芽与生后肾组织的诱导、肾小体发育及泌尿小管发育和成熟过程。

人脑膜瘤组织Slit2、Robo1的表达与术后复发的关系

目的 探讨人脑膜瘤Slit、Robo的表达与术后复发的关系。方法 收集2016年1月至2021年4月手术切除的脑膜瘤104例,另选取颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织50例(对照组),用免疫组织化学染色法检测Slit2、Robo1的表达水平。术后随访1年,判断肿瘤复发情况。结果 104例中,术后1年复发22例,复发率为21.15%。脑膜瘤组织Slit2低表达率[37.50%(39/104)]明显低于对照组[70.00%(35/50);P<0.05]。脑膜瘤组织Robo1高表达率[59.61%(62/104)]明显高于对照组[34.00%(17/50);P<0.05]。多因素logsitic回归分析显示,Slit2低表达、Robo1高表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 脑膜瘤组织Slit2呈低表达,而Robo1呈高表达,二者均与术后复发有关。

水飞蓟素通过Slit2调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的实验研究

目的研究水飞蓟素(SM)通过Slit2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及凋亡的作用机制。方法培养NSCLC细胞株A549,分为对照组及不同剂量SM组(1、20、40 mg/L),转染阴性对照(NC)siRNA的si-NC组、转染NC siRNA及40 mg/L SM干预的si-NC+40 mg/L SM组、转染Slit2 siRNA及40 mg/L SM干预的si-Slit2+40 mg/L SM组。干预48 h后检测细胞增殖A_(490)水平、细胞凋亡率及Slit2、ROBO1、C-X-C基序趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达水平。结果10、20、40 mg/L SM组A549细胞的A_(490)水平低于对照组,凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。20 mg/L SM组A549细胞的A_(490)水平低于10 mg/L SM组,凋亡率高于10 mg/L SM组,差异有统计学意义(P<0.05)。40 mg/L SM组A549细胞的A_(490)水平低于10、20 mg/L SM组,凋亡率高于10、20 mg/L SM组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,10、20、40 mg/L SM组A549细胞中Slit2、ROBO1的表达水平升高,CXCR4的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与10 mg/L SM组比较,20 mg/L SM组A549细胞中CXCR4的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。40 mg/L SM组A549细胞中Slit2、ROBO1的表达水平升高,CXCR4的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与20 mg/L SM组比较,40 mg/L SM组A549细胞中Slit2、ROBO1的表达水平升高,CXCR4的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NC+40 mg/L SM组A549细胞中Slit2的表达水平及凋亡率升高,A_(490)水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC+40 mg/L SM组比较,si-Slit2+40 mg/L SM组A549细胞中Slit2的表达水平及凋亡率降低,A_(490)水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NC+40 mg/L SM组A549细胞中ROBO1的表达水平升高,CXCR4的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC+40 mg/L SM组比较,si-Slit2+40 mg/L SM组A549细胞中ROBO1的表达水平降低,CXCR4的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SM通过激活Slit2/ROBO1通路抑制NSCLC细胞增殖及CXCR4表达,促进NSCLC细胞凋亡。

Slit2对高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

目的探讨Slit2/ROBO1信号通路在高糖诱导肾小管上皮细胞上皮间质细胞转分化(EMT)中的作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,进行高糖浓度梯度实验,随机分为正常组、对照组1、对照组2和高糖组1、高糖组2;同时进行高糖时间梯度实验,随机分为正常组、对照组、高糖24h组、高糖36h组和高糖48h组,采用Western blotting检测HK-2细胞中Slit2、ROBO1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白的表达变化,筛选出最佳高糖刺激浓度和时间。采用Slit2过表达质粒及阴性对照质粒转染HK-2细胞,验证转染成功后,随机分为正常组、对照组、高糖组、高糖+空载组及高糖+Slit2组,经最佳高糖浓度及时间刺激后提取总蛋白,Western blotting检测纤维连接蛋白及α-SMA的表达变化。结果在高糖浓度梯度实验中,与正常组相比,高糖组1、高糖组2的Slit2表达明显下降(分别为0.647±0.048、0.210±0.023vs.1.000±0.050),ROBO1表达明显下降(分别为0.703±0.041、0.303±0.022vs.1.000±0.057),纤维连接蛋白表达明显增加(分别为1.953±0.042、2.997±0.078vs.0.990±0.059),α-SMA表达明显增加(分别为1.767±0.012、2.427±0.059vs.1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖组1相比,高糖组2的Slit2、ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在高糖时间梯度实验中,与正常组相比,高糖36h组、高糖48h组的Slit2表达明显下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055vs.0.943±0.032),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028vs.1.000±0.058),高糖24h组、高糖36h组、高糖48h组纤维连接蛋白表达增加(分别为1.247±0.052、1.733±0.084、2.780±0.090vs.0.970±0.040),α-SMA表达增加(分别为1.277±0.041、1.767±0.120、2.537±0.078vs.1.033±0.067),差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖24h组相比,高糖36h组、高糖48h组的Slit2表达下降(分别为0.557±0.020、0.450±0.055vs.0.893±0.034),ROBO1表达下降(分别为0.600±0.023、0.227±0.028vs.0.930±0.025),纤维连接蛋白及α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与高糖36h组相比,高糖48h组的Slit2和ROBO1表达下降,纤维连接蛋白和α-SMA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在高糖环境下,Slit2过表达及阴性对照质粒转染成功后,观察Slit2过表达对肾小管EMT的影响发现,与正常组相比,高糖组、高糖+空载组、高糖+Slit2组的纤维连接蛋白表达增加(分别为2.760±0.012、2.667±0.027、1.460±0.034vs.1.000±0.058),α-SMA表达水平增加(分别为2.487±0.048、2.557±0.037、1.270±0.017vs.1.000±0.050),差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖+空载组相比,高糖+Slit2组的纤维连接蛋白和α-SMA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Slit2和ROBO1的表达下降参与了高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT过程,过表达Slit2可显著抑制高糖诱导的EMT。

人脑胶质瘤miR-218和Robo1的表达及意义

目的研究人脑胶质瘤微小核糖核苷酸-218(mi R-218)和Robo1的表达及意义。方法选取Ⅰ和Ⅱ级胶质瘤患者的脑组织10例,行颅内减压的正常脑组织10例、Ⅲ级胶质瘤脑组织10例、Ⅳ级肿瘤脑组织10例,使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测微小RNA218的表达量,采用免疫组织化学和WB的方法检测组织中Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达水平,分析mi R-218与Slit2-Robo1通路的关系。结果从正常组织、低级别胶质瘤到高级别胶质瘤,其微小RNA218、Slit2联合Robo1的表达量依次降低,Robo1的表达逐渐升高。结论当肿瘤组织中微小RNA218的表达减少时,Slit2蛋白的表达也同时降低,而Robo1蛋白的表达则异常增高,3种物质的水平与肿瘤的良恶程度有重要关系。

Slit2/Robo1 signaling in glioma migration and invasion

Slit2/Robo1 is a conserved ligand-receptor system,which greatly affects the distribution,migration,axon guidance and branching of neuron cells.Slit2 and its transmembrane receptor Robo1 have different distribution patterns in gliomas.The expression of Slit2 is at very low levels in pilocytic astrocytoma,fibrillary astrocytoma and glioblastoma,while Robo1 is highly expressed in different grades of gliomas at both mRNA and protein levels.Acquisition of insidious invasiveness by malignant glioma cells involves multiple genetic alterations in signaling pathways.Although the specific mechanisms of tumor-suppressive effect of Slit2/Robo1 have not been elucidated,it has been proved that Slit2/Robo1 signaling inhibits glioma cellmigration and invasion by inactivation of Cdc42-GTP.With the research development on the molecular mechanisms of Slit2/Robo1 signaling in glioma invasion and migration,Slit2/Robo1 signaling may become a potential target for glioma prevention and treatment.

Slit2/Robo1在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨Slit2及其受体Robo1在宫颈鳞癌（SCC）、宫颈上皮内瘤变（CIN）及正常宫颈上皮（NCE）中的表达,及其与宫颈病变发展的关系。方法组织芯片与免疫组化技术法检测55例SCC、30例CINⅠ-Ⅱ级、30例CINⅢ级及20例NCE中Slit2、Robo1蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测20例SCC、20例CINⅢ级及20例NCE中Slit2-mRNA的表达;分析患者临床特征与Slit2表达水平的相关性。结果 Slit2、Robo1蛋白阳性表达率在NCE、CIN、SCC中逐渐降低,CINⅢ级组阳性表达率显著低于CINⅠ-Ⅱ级组（P〈0.05）。Slit2蛋白表达与宫颈癌临床分期、宫颈浸润深度、淋巴结转移相关（P〈0.05）;与年龄、组织分化、肿物大小无关（P〉0.05）。NCE组Slit2-mRNA的表达水平显著高于CINⅢ组和SCC组（P〈0.05）。结论 Slit2/Robo1信号通路对促癌基因表达及功能的失调控是宫颈癌发生、发展的重要因素。

下调Slit/Robo通路抑制兔血管成形术后血管再狭窄

目的:探讨下调Slit/Robo通路对兔血管成形术后血管再狭窄的影响及机制。方法:将30只雄性新西兰大白兔分成3组,即空白组、对照组及实验组,每组10只。高脂饲养,除空白组外均制作髂动脉内皮剥脱血管狭窄模型。普通喂养4周后在血管狭窄部位行经皮球囊扩张成形术制作再狭窄模型。随后予R5抗体进行腹腔注射。继续喂养4周后再次血管造影检查,用图像工作站对血管造影结果行血管狭窄分析,并测定血清中Slit2、Robo1浓度,取髂动脉行HE染色。结果:成功建立兔髂动脉成形术后血管再狭窄动物模型。对照组及实验组与空白组相比,Slit2、Robo1血清浓度均显著升高(P<0.01),但实验组经R5抗体干预后,Slit2、Robo1血清浓度较对照组明显降低(P<0.05),经血管造影证实髂动脉血管面积狭窄率及直径狭窄率均降低(P<0.05)。结论:兔血管再狭窄模型Slit2/Robo1的表达显著增高,R5抗体可有效抑制Slit2/Robo1的表达,下调Slit2/Robo1信号通路可治疗兔血管成形术后再狭窄。

电针对周围神经损伤大鼠轴突靶向再生修复的Slit/Robo信号通路的影响

目的:探讨电针对周围神经损伤大鼠轴突靶向再生修复大鼠的Slit/Robo信号通路的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠120只,Excel软件随机分成空白组、假手术组、模型组和电针组,每组30只,每组再分为7 d、15 d和23 d3个亚组,每亚组10只。后两组大鼠右坐骨神经横断后即刻端对端缝合造模。假手术组只切开相应皮肤再缝合。造模后第二天,电针组取'环跳''足三里'进行电针治疗,1次/d,每次15 min,7 d为1个疗程,连续治疗3个疗程,疗程间隔1d。空白组不予干预,模型组、假手术组予模拟电针组抓取。每疗程结束后,分别检测比较大鼠腓肠肌湿重恢复率(WWG);实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)观察比较坐骨神经Robo1mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)观察比较坐骨神经和相应脊髓段(L4-L6) Slit2、Robo1蛋白的表达变化。结果:与空白组、假手术组比较,模型组、电针组WWG恢复率降低(P <0. 01);与模型组比较,电针组WWG恢复率逐渐升高(P <0. 05)。电针组与模型对照组比较,大鼠损伤的坐骨神经和相应脊髓段中Slit2蛋白表在第1疗程后(7 d)达到高峰后逐渐降低,3个疗程均高于模型组(P <0. 01),且两组均高于空白组和假手术组(P <0. 01);Robo1蛋白及其mRNA表达也有类似规律,但表达高峰在第2疗程后(15 d)。结论:电针治疗能增强损伤坐骨神经和相应脊髓段中Slit2蛋白、Robo1蛋白及其mRNA的表达,调控Slit/Robo信号通路可能是其促进周围神经损伤再生修复的机制之一。

Slit分泌蛋白家族2/Slit分泌蛋白家族特异性受体1在骨髓增生异常综合征中的表达及意义

目的探讨Slit分泌蛋白家族2/Slit分泌蛋白家族特异性受体1(Slit2/Robo1)在骨髓增生异常综合征(MDS)中的表达及临床意义。方法以2017年8月至2019年6月就诊于徐州医科大学附属医院的51例初诊MDS病人为研究对象,采用Ficoll密度梯度离心法分离51例MDS病人治疗前后骨髓单个核细胞,并通过实时定量PCR检测细胞中Slit2/Robo1mRNA的表达水平,采用蛋白质印迹法(Westernblotting)测定其蛋白表达。将Slit2/Robo1mRNA表达水平与临床参数进行相关性分析。以对照组Slit2、Robo1 mRNA表达水平为基线,分别将Slit2、Robo1 mRNA的表达量分为高表达组和低表达组,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并分析Slit2/Robo1 mRNA基因表达水平与MDS预后关系。结果初治组Robo1表达量明显高于正常对照组[(2.595±0.395)比(1.422±0.485)],而Slit2表达量明显低于正常对照组[(2.453±0.185)比(2.729±0.136)](P<0.05);中高危病人治疗后,有效组Robo1表达量降低,无效组升高,Slit2表达量则相反,有效组较前升高,无效组较前降低(P<0.05)。相关性分析结果显示,Robo1 mRNA表达水平与IPSS-R分组、骨髓原始细胞数、年龄均呈正相关(r=0.36,r=0.41,r=0.36),Slit2 mRNA表达水平与IPSS-R分组、骨髓原始细胞数、年龄均呈负相关(r=−0.83,r=−0.78,r=−0.53)。生存分析显示Robo1 mRNA相对表达水平与病人的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)呈负相关,而Slit2mRNA水平与病人的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS)呈正相关(P<0.05)。结论Slit2/Robo1在MDS病人骨髓单个核细胞中表达,其在MDS的发生、发展及预后中起重要作用。