Slit2在小鼠银屑病样皮炎模型炎性浸润中的作用

目的观察分泌型糖蛋白Slit2在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎模型中的表达及作用。方法采用免疫荧光观察咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损中Slit2的定位,PCR及Western blot检测皮损中Slit2的表达。30只小鼠随机分为5组:正常组、IMQ模型组、Slit2 siRNA组、Slit2蛋白低剂量组(100 ng/ml)、Slit2蛋白高剂量组(300 ng/ml),每组6只小鼠。每天对小鼠皮肤进行PASI评分,HE染色测量表皮厚度,计数各组真皮内炎症细胞数及血管密度,RT-PCR检测各组皮损处IL-23、IL-17A、IL-22 mRNA表达量,免疫组化检测各组皮损处Ki67表达及CD3 T细胞数量。结果咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎模型皮损处Slit2的表达升高。相较于模型组,Slit2 siRNA处理后PASI评分增加,表皮变厚、表皮细胞增殖程度增加,真皮炎性细胞浸润增多及血管密度升高,IL-23、IL-17A、IL-22 mRNA水平升高,CD3 T细胞数量明显增加。给予重组Slit2蛋白处理后,PASI评分降低,表皮变薄,表皮细胞增殖程度降低,真皮炎性细胞浸润及血管密度降低,IL-23、IL-17A、IL-22 mRNA水平降低,CD3 T细胞浸润明显减少。结论Slit2在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损中表达升高,使用Slit2 siRNA抑制皮损处Slit2表达可加重皮炎程度,在皮损处使用重组Slit2蛋白处理可减轻皮炎程度,Slit2对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎具一定的抗炎作用。

Slit2蛋白过表达的阿尔茨海默症杂合子小鼠的构建与鉴定

目的利用阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)模型构建Slit2蛋白过表达杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究Slit2蛋白过表达在阿尔兹海默症中的作用提供研究平台。方法将AD模型鼠Tg2576的杂合子小鼠(Tg2576+/-小鼠)进行繁殖并鉴定,然后将鉴定结果为阳性的子代Tg2576+/-小鼠与Slit2蛋白过表达的Slit2-Tg纯合子小鼠进行杂交,鉴定其子代小鼠的基因型。结果成功繁育Tg2576+/-小鼠和Slit2-Tg小鼠,并通过鉴定得到Tg2576+/-小鼠,与Slit2-Tg小鼠杂交并繁殖,获得基因型为Tg2576+/-;Slit2-Tg小鼠5只。结论本研究利用AD模型鼠成功构建了Slit2蛋白过表达杂合子小鼠,为进一步研究Slit2蛋白过表达在AD发生发展中的作用提供了良好的动物模型。

冷沉淀对感染患者Slit2蛋白表达的影响

目的了解冷沉淀输注对感染患者Slit2蛋白表达的影响。方法随机将61名感染患者分为治疗实验组：31名患者使用常规抗感染药物＋冷沉淀输注治疗;治疗对照组：30名患者单纯使用常规抗感染药物治疗;使用ELISA方法检测30名健康人以及2组感染患者在治疗前后的12-24 h的新鲜血浆标本中Slit2蛋白水平;观察健康人与2组感染患者血浆中的Slit2蛋白水平,比较2组感染患者在治疗前后血浆Slit2蛋白水平及相关临床指标的变化。结果治疗后实验组、对照组感染患者和健康人血浆Slit2蛋白水平（ng/m L）分别为2.432 vs 3.644 vs 1.382（P〈0.05）;实验组感染患者的治疗前后的血浆Slit2蛋白水平（ng/m L）为3.117 vs 2.432,WBC（×10~9/L）为10.31±6.00 vs 9.32±5.66,分类计数（×10~9/L）为7.53±5.34 vs 6.80±4.51,PT（s）为20.33±5.93 vs 20.32±5.73（P〈0.05）,APTT（s）为51.43±13.47 vs 51.66±16.43;对照组患者在治疗前后血浆Slit2蛋白水平及相关临床指标无明显变化（P〉0.05）。结论血浆Slit2蛋白对评价感染性疾病治疗疗效具有潜在的参考价值;输注冷沉淀可以降低感染患者Slit2蛋白的表达,可能对辅助治疗感染性疾病有效。

Slit2基因过表达小鼠的生物学参数及心脏生理功能分析

目的测量评价人Slit2基因过表达小鼠(Slit2-Tg小鼠)的基本生物学参数、心脏超声形态功能及转录组测序等,为该小鼠在生物医学研究应用提供参考。方法观察比较近交系繁育的Slit2-Tg和C57BL/6 J小鼠繁育情况、运用PCR技术确定基因型、采集血液进行血常规及血生化检测、收集脏器组织进行蛋白表达和病理分析,以及对心脏进行超声评价和转录组测序分析。结果 Slit2-Tg小鼠的每窝产仔数显著高于C57BL/6 J小鼠,并可检测到Slit2基因和蛋白高表达。Slit2-Tg小鼠脾的脏器系数有显著增加,但未见组织结构异常。Slit2-Tg小鼠的红细胞、血小板、嗜酸性粒细胞、葡萄糖、球蛋白、尿素氮、甘油三酯、高密度脂蛋白、动脉粥样硬化指数具有显著改变。Slit2-Tg小鼠的心脏除舒张末期左心室前壁厚度较小外,其他指标差异无显著性,其心脏组织受检的17 513个基因中有535基因表达显著升高或降低,主要涉及15个生物进程和信号转导通路。结论完善了Slit2-Tg小鼠生物学参数,并提示了此模式动物亦适用于心血管疾病相关研究。

Slit2在OVA/+SEB小鼠特应性皮炎模型炎性浸润、血管新生中的作用

目的探讨分泌型糖蛋白Slit2在卵清蛋白(OVA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)致敏小鼠特应性皮炎模型(AD模型+sponge模型)的皮肤炎性浸润、血管新生中的作用。方法1 g/L卵清蛋白(OVA)3周期贴片法重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建小鼠AD模型,期间分别用0.5/5μg SEB处理该模型小鼠,35 d后评估皮炎程度,ELISA检测IgE水平。评估模型情况后,选皮炎程度最重的OVA+5μg SEB组给予重组Slit2蛋白处理。HE染色计数各组真皮细胞内炎症细胞数、表皮厚度,Western blot检测各组Slit2蛋白表达量,ELISA检测各组皮肤IL-13、INF-γ表达量;构建小鼠Sponge海绵模型观察各组血管新生情况,免疫组化检测各组海绵内Slit2^(+)细胞数,以及CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的浸润情况。结果小鼠AD模型中OVA+5μg SEB组皮炎程度最重,炎性细胞浸润最多,表皮炎性增生最厚,IgE、IL-13、IFN-γ水平明显升高,Slit2蛋白表达量最高;给予重组Slit2蛋白处理后皮炎程度、炎细胞浸润、表皮厚度均减少,IL-13、IFN-γ水平降低,但IgE水平无统计学差异。小鼠Sponge模型中,OVA+5μg SEB组血管新生、Slit2^(+)细胞数最多,CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润最多;给予Slit2蛋白处理后血管新生、Slit2^(+)细胞数明显减少,CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞浸润减少。结论在AD病程中,Slit2蛋白有一定的抗炎作用,可减少淋巴细胞浸润,且Slit2同时具有抗血管生成和促血管生成的作用。

Slit2基因转染对人视网膜色素上皮细胞VEGF表达的影响及其作用机制

目的:研究Slit2基因对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,并探讨丝裂原激活(mitogen-activated,MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)这2条信号通路在此过程中的作用。方法:(1)体外培养人RPE细胞株RPE-19;(2)将腺病毒介导的Slit2(adenovirus-mediated Slit2,Ad-Slit2)转染RPE细胞,培养12、24 h及48 h;(3)转染前将MEK信号通路阻断剂PD98059、PI3K信号通路阻断剂LY294002预处理RPE细胞1 h;(4)用real-time PCR及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测VEGF的表达水平,用Western blot检测磷酸化ERK、磷酸化AKT的表达情况。结果:Slit2转染的RPE细胞后,real-time PCR结果显示不同时间之间VEGF m RNA表达有差别(F=12.789,P=0.018),组别和时间之间存在交互作用(F=13.375,P=0.017),不同组别有差别(F=16.855,P=0.015),在24 h与48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P24 h=0.002,P48 h=0.018)。ELISA结果显示不同时间之间VEGF蛋白表达有差别(F=24.886,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=23.524,P=0.000),不同组别有差别(F=28.250,P=0.006),在48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P=0.003)。Western blot结果可见p-ERK及p-AKT的蛋白表达水平增加,阻断剂PD98059及LY294002分别能降低ERK、AKT的磷酸化水平,并与Ad-Slit2组相比较,real-time PCR结果显示VEGF m RNA表达水平在不同时间有差别(F=32.202,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=8.372,P=0.006);不同组别存在差别(F=15.062,P=0.001),ELISA结果显示VEGF蛋白表达水平在不同时间之间有差别(F=90.703,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=4.968,P=0.005),不同组别存在差别(F=69.636,P=0.000)。结论:PI3K/AKT以及MEK/ERK这两条信号通路参与了Slit2所诱导的RPE细胞中VEGF表达水平增加。

重组人Slit2蛋白预处理可减轻内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎

目的探讨重组人Slit2蛋白(recombinant human slit2,rhSlit2)对内毒素诱导的SpragueDawley(SD)大鼠葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis,EIU)的作用。方法给予SD大鼠玻璃体腔内分别注射rhSlit2(10、30、100 ng/眼)。24 h后,将2 g/L的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)注射到大鼠双侧后足底肉垫内(200μg/鼠)。LPS注射24 h后观察大鼠前房炎症并进行临床评分;取大鼠房水进行房水蛋白浓度测定和房水细胞计数;LPS注射24 h后摘除大鼠眼球,制作石蜡切片HE染色后观察大鼠眼部形态学变化;采用Real-time PCR检测大鼠眼部炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA水平的表达;Western blot检测大鼠眼部IL-6、TNF-α和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。结果在LPS注射24 h后,rhSlit2对前房炎症有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性。LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组临床评分明显低于LPS+PBS组[(1.40±0.84)vs(5.60±0.97)分,P<0.01];HE染色可见各组大鼠眼内结构层次完好。与LPS+PBS组比较,LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组眼内炎症细胞渗出数量明显减少[(65.21±18.38)×106/m L vs(319.60±28.88)×106/m L,P<0.01];房水蛋白浓度明显降低[(12.59±3.04)vs(31.50±3.09)mg/m L,P<0.01];眼内炎症因子IL-6(19.69±5.28 vs 77.09±12.61)、TNF-α(1.78±0.33 vs 4.06±0.58)的mRNA表达降低(P<0.01);大鼠眼内IL-6(1.92±0.60 vs 4.42±0.11)、TNF-α(1.33±0.11 vs 1.69±0.21)和P-Akt(0.18±0.37 vs 0.55±0.34)蛋白水平也降低(P<0.01)。结论大鼠玻璃体腔Rh Slit2预注射对内毒素诱导的SD大鼠葡萄膜炎具有抑制作用。Rh Slit2可通过抑制PI3K/Akt信号通路的活化以抑制LPS诱导炎症反应。

Slit2蛋白在胆囊癌中的表达及其临床意义

目的探讨神经导向因子Slit2蛋白在胆囊癌中的表达及其临床意义。方法免疫组化SP法检测80例胆囊癌组织及80例癌旁组织中Slit2蛋白的表达水平,分析Slit2蛋白表达水平与胆囊癌患者临床特征及生存期的相关性。结果 (1)胆囊癌组织中Slit2蛋白阳性表达率为57.5%,癌旁组织中Slit2蛋白阳性表达率为35.0%,两种组织表达差异有统计学意义(P<0.05)(2) Slit2蛋白表达与胆囊癌TNM分期、淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。(3) Slit2蛋白阳性表达组患者的总体生存期明显低于阴性表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Slit2蛋白在胆囊癌组织中表达增高,与胆囊癌的侵袭、转移及预后密切相关。

Slit2蛋白在乙型重型肝炎患者血清中表达水平及其与肝功能生化指标的相关性分析

目的研究Slit2蛋白在乙型重型肝炎患者血清中的表达水平，同时分析其与肝功能生化指标的相关性。方法选取本院在2015年1月至2016年12月期间收治的92例乙型重型肝炎患者作为观察组，同时选取92例正常居民作为对照组。观察组患者根据病情恢复情况分成恢复组与未恢复组。观察不同组对象血清中Sih2表达情况，并分析其与肝功能生化指标的相关性。结果观察组患者Slit2蛋白、TBIL、ALT水平显著高于对照组（P〈0．05），而PTA水平低于对照组（P〈0．05）；观察组患者治疗后随访1个月，能随访的患者有50例，其中27例患者恢复，23例患者未恢复，恢复组患者Slit2蛋白、PTA水平显著高于未恢复组（P〈0．05），而TBIL、ALT显著低于对照组（P〈0．05）；经Pearson分析，Slit2蛋白与PTA呈正相关（r=-0．367，P〈0．05），与TBIL、ALT呈负相关（r=-0．461，r=-0．318，P〈0．05）。结论血清Slit2蛋白水平可反映乙型重型肝炎患者的预后情况，为临床治疗提高有效的参考依据，是帮助诊断乙型重型肝炎预后的重要指标。

脓毒症大鼠肠黏膜Slit2/Robo4蛋白表达及其与血管生成的关系

目的 研究Slit2/Robo4蛋白对脓毒症大鼠肠黏膜微循环及屏障功能的影响。方法 利用实验用大鼠16只,采用盲肠末端结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)模型制备脓毒症组(n=8),假手术组(n=8),24 h后处死,取回肠末端组织,4%多聚甲醛溶液固定后进行实验分析。采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)的方法进行Slit2/Robo4、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白mRNA表达量检测,同时采用Western印迹法进行Slit2/Robo4蛋白的表达检测。Slit2/Robo4蛋白表达与VEGF表达的相关性采用Pearson秩相关检验。结果 Slit2蛋白mRNA以及Robo4蛋白mRNA表达量在脓毒症组均明显下降(P<0.05),Slit2蛋白表达量与Robo4蛋白表达量呈正相关(r=0.805,P<0.001);VEGF蛋白mRNA在脓毒症组的表达量明显增加(P<0.05),Slit2蛋白表达量与VEGF蛋白表达量呈负相关(r=-0.688,P=0.003),Robo4蛋白表达量与VEGF蛋白表达量呈负相关(r=-0.836,P<0.001)。结论 脓毒症模型大鼠肠黏膜血管中Slit2/Robo4蛋白表达量下降,VEGF表达量增加,两者变化可能与肠黏膜血管系统的稳定性密切相关。

肝细胞肝癌中外周血浆DNA基因甲基化检测及意义

目的评估外周血浆DNA甲基化检测在肝细胞肝癌(HCC)诊断中的作用,筛选血浆灵敏度及特异性高的甲基化抑癌基因。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测34例经病理检查证实的HCC患者血浆及其配对癌组织中的SLIT2及DAPK基因启动子甲基化状态,并分析其与HCC临床病理特征的关系。结果 34例HCC患者癌组织中SLIT2和DAPK基因甲基化率分别为70.6%(24/34)和79.4%(27/34),相应外周血浆中SLIT2和DAPK基因甲基化率分别为44.1%(15/34)和50.0%(17/34)。血浆SLIT2和DAPK基因甲基化检测的灵敏度分别为62.5%和63.0%,特异度均为100%,阴性预测值分别为52.6%和41.2%,阳性预测值均为100%。HCC癌组织和外周血浆中SLIT2及DAPK甲基化检出率与HCC各临床病理特征无关(P>0.05)。在AFP<400μg/L患者中SLIT2和DAPK基因甲基化联合检出率达61.1%(11/18)。结论基于MSP方法,血浆中SLIT2及DAPK基因甲基化仍有较高的检出率,HCC癌组织和血浆中SLIT2及DAPK基因甲基化具有明显的一致性。血浆DNA甲基化可作为一种独立非侵入性诊断HCC的标志物,尤其对AFP阴性者可提高HCC的诊断率。HBV感染可能仅与部分抑癌基因甲基化相关。